Allojeneik trombosit açısından zengin plazma (PRP) kesitli Aşil tendon sıçan iyileşme süreci üzerine etkileri: metodolojik bir açıklama
Summary
Bu iletişim kuralı tendon allojeneik trombosit zengin plazma (PRP) ya da tuzlu Çözümle Aşil tendonu parçası çıkardıktan sonra enjekte edilmiş Sıçanlarda şifa değerlendirme işlemini açıklar. Tendon şifa ilerlemesini analizleri farklı türleri kullanarak birkaç saat noktalarda değerlendirilir.
Abstract
Bu makalede, PRP olumlu tendon şifa etkileyebilir Eğer gözlemlemek için kullanılan deneysel yordamlar açıklanır. İzlenmesi gereken 4 ana adım vardır: Aşil tendonu; bir lezyon teşvik PRP hazırlamak ve bu (veya tuzlu çözüm); tendon Kaldır; ve biyomekanik, moleküler ve histolojik değerlendirme gerçekleştirmek. Her adımda, kolayca yeniden olabilir bu yüzden usul ve yöntemleri ayrıntılı olarak açıklanmıştır.
Aşil tendon 5 mm uzun bölümünün ameliyatla kesitli (kaldırma) olmuştur. Daha sonra PRP ya da tuzlu çözüm PRP tendon şifa üzerinde olumlu bir etkisi olup olmadığını incelemek için enjekte ettiler. Üç grup (bir toplam 120 sıçan bu çalışmada kullanılmıştır) 40 hayvanların 2 alt gruplar alt: PRP enjeksiyon grubu ve tuzlu bir enjeksiyon kontrol grubu. Fareler zaman puan (Grup A: 5 gün; artırmaya kurban edildi Grup B: 15 gün; C: 30 gün grup) ve tendon çıkarıldı. 90 tendonları biyomekanik transcriptomic analiz yapmadan önce test uygulandı ve 30 kalan tendon histolojik analizi için sunuldu.
Introduction
Koagülasyon, inflamatuar süreç ve trombosit bağışıklık modülasyonu rollerini iyi bilinen1vardır. Son zamanlarda, onlar da şifalı özellikleri2,3var kanıtlanmıştır. Gerçekten de, çeşitli faktörler sitokinler ve büyüme (VEGF, PDGF, TGF-B, IGF-ı ve HGF) trombosit tarafından degranulation sırasında serbest bırakılır. Bu büyüme faktörleri anjiogenezi, doku remodeling ve yara iyileşme (kemik, deri, kas, tendon)2teşvik. Otolog kan centrifuging izolasyon yöntemine bağlı olarak yüksek trombosit konsantrasyonları içeren trombosit zengin plazma (PRP) üretir (3 arasında ve 10 kez kan baseline konsantrasyonu). Gerçekten de, çeşitli PRP hazırlama teknikleri özdeş bir nihai ürün sağlayamaz. Şimdiye kadar bu konuda uluslararası genel anlaşma oldu. Genel olarak, PRP Kronik kas-iskelet, tendinopathy, plantar Fasiit, Osteoartrit ve sendikasız4gibi tedavi için çekici bir tedavi seçeneği olabilir. Bu ilk defa oral Cerrahi ve İmplantoloji4 bir diş implantı koyduktan sonra şifa kemik hızlandırmak ve geliştirmek için kullanıldı. Bu çalışmada, PRP edinme hayvan deney4için sağlar bir tekrarlanabilir yöntemi açıklanmaktadır.
Lezyonlar tendonların sporcular ve fiziksel işçiler sık sık gözlenir beri büyük ilgi5/ geliştirilmesi süreci şifa ve böylece azaltmak belgili tanımlık zaman kurtarma için vardır. Kez gelişmekte olan yeni tedavi yöntemleri büyüme faktörlerinin kullanımı dahil ve endojen büyüme faktörleri4bir karışımı teslim etmek için basit ve minimal invaziv bir şekilde PRP bir ilçedir.
Biyolojik arabulucu, serbest bırakarak trombosit, yüksek düzeyde içeren plazma yönetim biyolojik arabulucu6 serbest bırakarak tendon ve bağ onarım teşvik edebilirsiniz çeşitli vitro veya hayvan çalışmaları göstermiştir ,7,8,9. Ayrıca, diğer çalışmalar PRP ben ve tendon III kollajen sentezinde hücreleri9,10,11türü teşvik edebilirsiniz göstermiştir. Ayrıca PRP matriks metalloproteinazların (MMPs) aktivasyonu azaltmak ve bu nedenle matrix bozulması azaltmak sürülmüştür. İltihap sürecinde söz konusu hücre doku iltihabı12tarafından indüklenen remodeling (fizyolojik ve patolojik) bir rol oynar MMP-9 üretebilir.
Sıçan bir tek PRP enjeksiyon kesitli Aşil tendon içine kurtarma işlemi ve tamir doku mekanik gücünü geliştirmek olabilir ki bu bilgilere dayanarak, biz onaylanmadığına karar. Bu kurtarma işlemi sırasında şifa tendonları biyomekanik özellikleri ölçme ve histolojik ve moleküler analizler remodeling yeni kurulan dokusunda kollajen değerlendirmek için performans test edilir. Çalışmanın amacı allojeneik PRP tek bir enjeksiyon kesitli Aşil tendon şifa etkisi gözlemlemek oldu.
Protocol
Representative Results
Discussion
Trombosit süreci şifa tendon erken enflamatuar faz için gereklidir. Ne zaman bu trombosit doku veya koagülasyon teşvik faktörler bağlama için maruz kalan, α granül stocked vardır büyüme faktörleri yayınlayacak. Bu etkileşim nedeniyle Mezenkimal hücrelerin prolifere ve hücre dışı matriks oluştururlar synthetized vardır. Trombosit kemotaktik etkinlik progenitör hücrelerinin angiogenez artırılması ve hücresel başkalaşım6,20uyarıcı k…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışmada standart de Liège tarafından desteklenen ve Leon Frédéricq fonların Lejeune – Chien verir.
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
References
- Kaux, J., Degrave, N., Crielaard, J. Platelet rich plasma traitement des tendinopathies chroniques? Revue de la littérature. Platelet rich plasma treatment of chronic tendinopathies? Review of literature. J. Traumatol. du Sport. 24, 99-102 (2007).
- Anitua, E., et al. Autologous preparations rich in growth factors promote proliferation and induce VEGF and HGF production by human tendon cells in culture. J. Orthop. Res. 23, 281-286 (2005).
- Bosch, G., et al. Effects of platelet-rich plasma on the quality of repair of mechanically induced core lesions in equine superficial digital flexor tendons: A placebo-controlled experimental study. J. Orthop. Res. 28, 211-217 (2010).
- Kaux, J. F., Drion, P., Croisier, J. L., Crielaard, J. M. Tendinopathies and platelet-rich plasma (PRP): From pre-clinical experiments to therapeutic use. J. Stem Cells Regen. Med. 11, P7-P17 (2015).
- Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clin. Sports Med. 22, 675-692 (2003).
- Molloy, T., Wang, Y., Murrell, G. The roles of growth factors in tendon and ligament healing. Sports Med. 33, 381-394 (2003).
- Lyras, D. N., et al. The effect of platelet-rich plasma gel in the early phase of patellar tendon healing. Arch. Orthop. Trauma Surg. 129, 1577-1582 (2009).
- Aspenberg, P., Virchenko, O. Platelet concentrate injection improves Achilles tendon repair in rats. Acta Orthop. Scand. 75, 93-99 (2004).
- Visser, L. C., et al. Growth Factor-Rich Plasma Increases Tendon Cell Proliferation and Matrix Synthesis on a Synthetic Scaffold: An In Vitro Study. Tissue Eng. Part A. 16, 1021-1029 (2010).
- Zhang, J., Wang, J. H. -. C. Platelet-Rich Plasma Releasate Promotes Differentiation of Tendon Stem Cells Into Active Tenocytes. Am. J. Sports Med. 38, 2477-2486 (2010).
- Kajikawa, Y., et al. Platelet-rich plasma enhances the initial mobilization of circulation-derived cells for tendon healing. J. Cell. Physiol. 215, 837-845 (2008).
- Pasternak, B., Aspenberg, P. Metalloproteinases and their inhibitors-diagnostic and therapeutic opportunities in orthopedics. Acta Orthop. 80, 693-703 (2009).
- Dell, R. B., Holleran, S., Ramakrishnan, R. Sample size determination. ILAR J. 43, 207-213 (2002).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Lab. Anim. 48, 178-192 (2014).
- Kaux, J. -. F., et al. Étude comparative de cinq techniques de préparation plaquettaire (platelet-rich plasma). Pathol. Biol. 59, 157-160 (2011).
- Wieloch, P., Buchmann, G., Roth, W., Rickert, M. A cryo-jaw designed for in vitro tensile testing of the healing Achilles tendons in rats. J. Biomech. 37, 1719-1722 (2004).
- Kaux, J. -. F., et al. Vascular Endothelial Growth Factor-111 (VEGF-111) and tendon healing: preliminary results in a rat model of tendon injury. Muscles. Ligaments Tendons J. 4, 24-28 (2014).
- Docheva, D., Hunziker, E. B., Fässler, R., Brandau, O. Tenomodulin is necessary for tenocyte proliferation and tendon maturation. Mol. Cell. Biol. 25, 699-705 (2005).
- Lambert, C. A., Colige, A. C., Munaut, C., Lapière, C. M., Nusgens, B. V. Distinct pathways in the over-expression of matrix metalloproteinases in human fibroblasts by relaxation of mechanical tension. Matrix Biol. 20, 397-408 (2001).
- Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front. Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
- Woodall, J., Tucci, M., Mishra, A., Benghuzzi, H. Cellular effects of platelet rich plasma: a study on HL-60 macrophage-like cells. Biomed. Sci. Instrum. 43, 266-271 (2007).
- Taylor, D. W., Petrera, M., Hendry, M., Theodoropoulos, J. S. A systematic review of the use of platelet-rich plasma in sports medicine as a new treatment for tendon and ligament injuries. Clin. J. Sport Med. 21, 344-352 (2011).
- Mazzocca, A. D., et al. The positive effects of different platelet-rich plasma methods on human muscle, bone, and tendon cells. Am. J. Sports Med. 40, 1742-1749 (2012).
- McCarrel, T. M., Minas, T., Fortier, L. A. Optimization of leukocyte concentration in platelet-rich plasma for the treatment of tendinopathy. J. Bone Joint Surg. Am. 94 (1-8), e143 (2012).
- Boswell, S. G., et al. Increasing platelet concentrations in leukocyte-reduced platelet-rich plasma decrease collagen gene synthesis in tendons. Am. J. Sports Med. 42, 42-49 (2014).
- Virchenko, O., Aspenberg, P. How can one platelet injection after tendon injury lead to a stronger tendon after 4 weeks?: Interplay between early regeneration and mechanical stimulation. Acta Orthop. 77, 806-812 (2006).
