Summary
수족관에 서식하는 물고기의 생식 생태학을 연구 할 수있는 일련의 기본 방법이 설명되어있다. 이들은 스쿠바 (SCUBA)를 사용하여 물고기를 수집하고 생선을 운송하며 수족관에 보관 된 야생 잡은 생선의 생식 행동을 관찰하는 데 유용한 프로토콜입니다.
Abstract
포획 사육 관측은 지속적인 현장 조사가 불가능할 때 어류 행동 및 생태계의 측면을 밝히는데 유용합니다. 여기에는 수족관에 보관 된 모델로 야생 잡힌 고비도 물고기의 생식 행동을 관찰 할 수있는 일련의 기본 기술이 설명되어 있습니다. 이 방법은 세 가지 단계에 초점을 둡니다 : 수집, 운송 및 기판 스폰역의 재생산 생태 관찰. 활어 수집 및 운송의 필수적인 측면은 (1) 물고기에 대한 상해 방지 및 (2) 수족관에 대한 신중한 순응입니다. 생선을 수집 할 때 스크래치 나 갑작스런 수압의 변화와 같은 상해를 통한 해를 방지하는 것은 신체적 손상이 생선의 생존과 나중에 행동에 부정적인 영향을 미칠 수 있기 때문에 필수적입니다. 주의 깊게 수조에 적응 시키면 발생 빈도가 감소하고 운송의 충격이 완화됩니다. 포로 기르기 동안의 관찰은 (1) indivi의 확인(2) 생선이나 난에 부정적인 영향을 미치지 않으면 서 산란 된 난을 관찰함으로써 연구 종의 생식 생태에 대한 상세한 조사를 가능하게한다. 눈에 보이는 임플란트 엘라스토머 (VIE) 태그의 피하 주사는 개별 물고기의 후속 식별을위한 정밀한 방법이며, 생존 및 행동에 최소한의 영향을주는 넓은 범위의 물고기와 함께 사용될 수 있습니다. 연구 종이 접착 알을 낳는 기질 스폰자 인 경우, PVC 방수 시트가 추가 된 PVC 튜브로 만든 인공 둥지 사이트는 알을 세고 모니터링하는 것을 용이하게하여 둥지 보유자에 대한 조사자의 영향을 줄입니다. 그리고 물고기의 난기 행동. 이 기본 방법은 연구 기사에서 자세하게 언급되지 않는 기술을 필요로하지만 야생 동물을 사육하는 실험이 필요합니다.
Introduction
환상적인 적응 진화는 물고기의 형태학, 생태학 및 행동에서 분명합니다 1 . 특히 생식과 관련된 생태 학적 특징은 다양하며 이들 대부분은 개인의 건강에 직접적으로 영향을받을 수있다 2 . 다른 물고기 종에서 독특한 특징의 진화를 가져온 선택적 압력에 대한 통찰력을 얻으려면 생선을 사용하는 생식 및 사회적 행동을 직접 관찰하는 것이 종종 이론적 가설을 입증하는 데 유리합니다.
그러나, 어류에 대한 지속적인 현장 관측은 전문화 된 수중 장비 및 유지가 어려운 시설이 필요할 수 있습니다. 이 경우 야생에서 잡은 수족관으로 자란 물고기의 관찰이 도움이 될 수 있습니다 3 , 4 , 5 . 또한 희귀하거나 어색한 어류의 행동을 효과적으로 관찰 할 수 있습니다수족관 6 , 7 , 8 에서 실험을 조작하면 자연 상태에서 관찰 할 수 있습니다. 인공적인 스트레스와 물리적 손상을 최소화하여 좋은 조건에서 물고기를 양육하는 것은 정확한 생태 조사에 중요합니다.
피그미 문 절망 둑 Trimma marinae는 23-25mm 전체 길이에 도달 9-26m (9)의 깊이에, 그것은 조용하고 아늑한 베이에서 발견되는 서부 태평양에 배포됩니다. 이 연구에서 T. marinae 는 자체 수중 호흡 장치 (SCUBA), 어류 운송 및 직접 관측을위한 수족관에 대한 어류 순응을 사용하여 어류 수집을위한 일련의 기본 기술을 설명하는 모델로 사용됩니다 연구 종의 생식 행동 및 생태학에 대한
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Protocol
1. 살아있는 물고기 수집 및 운반
참고 :이 프로토콜은 깊이 15m 이상에서 지표면까지 가스 방광을 가진 물고기를 수집하는 방법을 설명합니다. 표면으로의 신속한 운반은 압력 변화에 의한 가스 방광의 팽창을 유발하여 심각하게 해를 입히거나 죽일 수 있습니다. 이 첫 번째 단계에서 생선이 피해를 입으면 생존과 나중에 행동에 부정적인 영향을 미칠 수 있으므로주의가 필요합니다.
- 스쿠버 다이빙을하기 전에 다음 자료를 수집하십시오. 수중 표적 종을 포획하기에 적합한 핸드 그물. 물고기를 위해 충분히 큰 두 배 폴리에틸렌 부대; 고무 밴드 (ø 80 mm x 6 mm); 상기 표면에서 상기 수집 백을 팽창시키기위한 산소 실린더; 항균제 인 Elbagin은 10 % sodium nifurstyrenate를 포함합니다. 수집 봉투를 넣을 폴리스티렌 폼 상자; 피펫; 그리고 필요하다면 (1.4 절 참조) 길이가있는 로프최대 잠수 깊이와 동등하며 최소 2kg의 중량이 필요합니다.
- 다이빙하는 동안 손으로 그물을 사용하여 표적 어류를 수집합니다. 아직도 수중에있는 동안, 붙잡은 물고기를 폴리에틸렌 부대에서두고 고무 밴드로 부대의 입을 묶으십시오. 수족관으로 물고기를 옮기는 데 1 일 이상 걸리면 다른 수하물의 자연 서식지에서 물을 보존하여 물고기를 키우는 물을 새로 만드는데 사용하십시오.
참고 : 안전을 위해 최소 두 사람이 수중 작업을해야합니다. - 1m / min 이하의 속도로 물고기의 부대와 함께 수집 지점에서 표면 : 10m 이상의 깊이에서, 2m마다 1 ~ 5 분 동안 오름차순 중지; 10 m의 깊이에서 1 m마다 1 - 5 분 동안 표면 정지까지. 붙잡힌 물고기가 부대에서 부력을 유지할 수 없을 때 ( 즉 , 팽창 된 가스 방광으로 바닥을 향해 헤엄 쳐 가면서 떠 다니는 경우), 같은 깊이를 1 - 5 분 또는 1 분 동안 유지하거나1 - 2 m 깊이로 이동하십시오. 일단 물고기가 그들의 부력을 회복하는 것처럼 보이면, 표면으로 상승을 재개하십시오.
참고 : 스쿠버 탱크의 공기가 오름차순으로 떨어질 가능성이있는 경우, 로프를 폴리에틸렌 봉지에 고정시키고 무게가 2kg 이상인 것을 부착하십시오. 수중 운전자가 안전하게 승강 한 후에는 위에서 규정 한 속도와 동일한 속도로 표면에 당깁니다. - 해변이나 보트에서 10ppm Elbagin을 표면 처리 한 후 각 폴리에틸렌 봉지의 물에 녹입니다.
참고 : 일부 물고기는 표면에 가져온 직후에 부력을 유지할 수 없지만 대부분은 하루 이내에 회복 될 것으로 예상됩니다. - 수집 가방에있는 어류의 밀도가 높으면 운송 중에 서로 마찰하여 서로를 손상시키지 않도록 더 많은 가방 사이에서 물고기를 나눕니다. 물고기가 공격적인 종인 경우 가방 사이에 개별적으로 나눕니다.
- 산소로 수집 백을 팽창시키고 r을 사용하여 백의 입을 다시 봉인하십시오.ubberbands. 산소를 가방에 넣을 때 노즐을 가방의 물에 넣고 용존 산소량을 늘립니다. 완전히 팽창 된 봉지는 물을 1/4로 가득 채워야합니다.
- 수증기를 안정적으로 유지하고 어두운 조건에서 어류의 스트레스를 줄이려면 폴리스티렌 폼 상자에 어류와 함께 수거 백을 보관하십시오.
- 수족관으로 물고기를 옮기는 데 1 일 이상 걸릴 경우 하루에 한 번 서식지에서 보유한 물을 사용하여 각 어류 저장 백에서 물의 1/4에서 1/3을 교환하십시오. 10ppm Elbagin , 산소로 다시 포장하십시오. 매일, 죽은 생선과 배설물을 손 네트 또는 피펫으로 바닥에서 제거하십시오.
참고 : 비행기 운송이 포함 된 경우 단기간에 두 단계의 압력 변화 (수중에서 표면으로, 표면에서 상부 공기로)가 부정적인 영향을 줄 수 있기 때문에 적어도 1 일을 기다린 후에 물고기를 표면에 공기 압력으로 적응 시키십시오. 물고기의 생존. i>
2. 수족관에 물고기 적응시키기
- 수온을 균일하게하기 위해 수족관에 물고기가 들어있는 가방을 30 분 동안 부어 두십시오.
- 10 분 동안 물의 화학적 특성 ( 예 : pH, 염분)의 급격한 차이로 인한 충격을 피하기 위해 수족관 물과 증류수를 점차적으로 교환하십시오.
참고 : 물 화학에서 너무 큰 차이로 인해 충격을받는 물고기는 신체 색 및 / 또는 행동에 비정상적인 변화를 나타낼 수 있습니다. 순응 중 조심스럽게 이것을 모니터하십시오. - 수족관 물에 10ppm Elbagin을 녹인다.
- 그런 다음 하루에 한 번 3 일 동안 수족관 물의 1/3을 교체하고 Elbagin 10ppm을 보충 수에 첨가하십시오.
- 마지막으로 수족관 물의 절반을 하루에 한 번씩 색이 바래 때까지 교환하여 엘바 긴을 제거하십시오.
3. 개개의 물고기를 식별하기위한 Visible Implant Elastomer (VIE) 태그 삽입
t "> 참고 :이 연구에서, 개별 물고기는 VIE 꼬리표를 사용하여 식별되며, 예를 들어, Frederick 10 , Olsen and Vøllestad 11 및 Leblanc and Noakes 12를 참조하십시오 . 단계 3.2에서 사용 된 외과 테이블은 필요하지 않습니다.- 각 개인의 사출 위치와 태그 색상을 결정하십시오. 가장 안전한 방법은 두꺼운 근육의 등쪽 또는 꼬리 부분의 주사 점을 선택하고 내부 장기가 뚫린 복부에 주사하는 것을 피하는 것입니다.
참고 : 번호 매기기 시스템은 그림 1에 설명되어 있습니다. 검사 종족이 가능한 8 개의 위치에 주입하기에 충분히 큰 경우이 시스템은 단일 색상을 사용하여 154 명의 개인을 식별 할 수 있습니다. VIE 태그의 10 가지 색상은 상업적으로 이용 가능합니다. 물고기의 몸 색깔에 따라 구별 할 수있는 색을 선택하십시오. - <손에 잡을 수있는 것보다 작은 물고기는 다음과 같이 수술 테이블을 준비하십시오 (Kinkel et al . 13 참조 ) ( 그림 2 ).
- 페티 접시 높이보다 5 - 10mm 낮은 5cm L x 5cm W의 부드러운 스폰지를 잘라내십시오.
- 약 5 - 10mm 깊이의 스폰지에 홈을 자르고 물고기의 대략적인 몸 너비의 너비로 조정하십시오. 폴리 염화 비닐 (PVC) 보드 (0.3mm 두께)를 5cm L x 5cm W로 자르고 골짜기 접기 (또는 M 자 모양)로 구부립니다.
- 홈이있는 스폰지 위에 홈이있는 PVC 보드를 놓은 다음 스폰지를 페트리 접시 (ø 160 mm, 깊이 30 mm)에 넣으십시오. PVC 보드가 적절히 잠길 때까지 회수 탱크의 물을 사용하여 페트리 접시를 채 웁니다.
- VIE 태깅 매뉴얼에 따라 VIE 태그를 준비하십시오. 엘라스토머 물질을 혼합하고 혼합물을 3 mL syri키트에 들어있는 29 게이지 바늘을 사용하십시오.
- 태그 주입을 수행하는 동안 사용할 두 개의 물 탱크를 준비하십시오 : 하나는 마 취용이고 다른 하나는 회복 용입니다. 양육 수족관의 물과 일치하도록 이들의 온도와 염분 농도를 조정하십시오. 에어 스톤이 달린 에어 펌프를 사용하여 물을 가볍게 순환 시키십시오.
- 99.5 % 에탄올 같은 양으로 2- 메틸 퀴놀린을 혼합하여 마취 액체를 준비하십시오. 이것을 마취 탱크에 넣고 농도가 18ppm이되도록하십시오.
참고 : 마취 액체의 최적 농도는 개인의 종류와 신체 크기에 따라 다릅니다. 그러므로 미리 연구 종의 최적 농도를 조사하십시오. - 마늘 탱크로 개별 물고기를 옮기고 마취가되도록하십시오 : 즉, 탱크 외부가 두드려 졌을 때 물고기가 만졌을 때 반응하지 않거나 진동을받을 때까지 기다리십시오. 마취되면 몸 색깔이 변함에 따라많은 물고기에서 zed, 또한 몸 색깔을주의 깊게 감시하고 물고기가 그것의 변화에서 마취되는지 재판하십시오. 마취 탱크에서 물고기가 튀어 나오는 경우가 있으므로 물고기가 천천히 움직이기 시작할 때까지 투명한 아크릴 판으로 덮어 둡니다.
참고 : 연구 종 및 체격에 따라 마취 액의 농도를 마취 및 / 또는 마취하는데 필요한 시간을 미세 조정하십시오. 마취에 의해 오구 수술이 중단되면 물고기는 사망 위험이 높습니다. - 몸이 따뜻해지면 물고기가 약 해지므로 물고기를 마취하면서 비교적 찬물에 손가락을 넣어 두십시오.
- 마취 탱크에서 물고기를 들고 신속하게 측정하거나 필요한 데이터 (총 길이, 성별 등 )를 기록하십시오. 측정 중에 물고기가 회복되면 즉시 마취 탱크로 다시 옮깁니다.
- 물고기를 외과 테이블로 옮긴다. 물고기 복부 측면을 아래로 설정하십시오.그는 PVC 그루브입니다. 몸의 크기가 매우 작 으면 주사를 만드는 동안 쌍안 현미경을 사용하십시오. 연구 종족이 손에 쥐기에 충분히 큰 경우, VIE 꼬리표를 잡고있는 상태에서 주사하십시오.
- 바늘의 경 사진면을 바깥쪽으로 향하게하고 물고기의 머리쪽으로 향하게하십시오. 바늘을 피하에, 신체에 다소 평행하게, 가능한 한 피부 바로 아래에 삽입하십시오. 물고기의 몸 크기와 궁극적으로 태그를 볼 수있는 정도에 따라 삽입 깊이를 조정하십시오.
- 바늘을 당기면서 VIE 태그를 삽입하고, 바늘 베벨이 바늘 진입 점에 도달하기 전에 주입을 중지하십시오 (상대적으로 넓은 영역에 태그를 삽입하는 경우 식별하기 쉽습니다).
- 꼬리표 주사를 완료 할 때, 즉시 물고기를 회복 탱크로 옮기십시오. 회복이 너무 느리게 나타나는 경우 손으로 부드럽게 물을 순환 시키십시오.
- 회복 후 물고기를 양육 수족관으로 되돌려 놓고 10ppm El을 계속 추가하십시오3 일 동안 물에 바진.
참고 : VIE 태그에 대한 가시성이 낮은 조건에서 UVA로 필터링 된 빛은 태그 인식을 용이하게합니다.
4. Demersal Adhesive Eggs 계산하기
- 물고기가 접착 알을 낳을 수있는 인공 산란 장소를 만들려면 불투명 한 PVC 파이프 (직경 5cm, 길이 6cm)를 지름에 반으로 반으로 자릅니다.
참고 : 위의 파이프 크기는 비교적 작은 고비 T. marinae 산란에 적합합니다. 따라서 연구 종에 적합한 PVC 파이프 크기와 양식을 조정하십시오. - 방수 시트에 5mm x 5mm 격자를 인쇄하고 PVC 파이프의 안쪽 부분에 맞게 잘라냅니다.
- 고무 밴드를 사용하여 방수 시트를 PVC 파이프 안쪽에 고정하십시오.
참고 : 암컷이 방수 시트에 달걀을 부착하기 어렵고 알이 시트에서 떨어지면, 그 종이를 사포로 질감을 만드십시오. - 모래 층으로 수족관 바닥을 덮으십시오, 1- 2cm 두께. PVC 파이프의 약 1/3을 시트 고정면을 아래로하여 모래에 비스듬히 넣습니다.
- 물고기에 의해 성공적으로 산란 후, PVC 파이프에서 계란 질량과 시트를 제거하고 수족관 물 페트리 접시에 넣으십시오. PVC 파이프 안쪽에 새 시트를 고치고 수족관 바닥에 다시 놓습니다. 마지막으로, 계란 질량을 촬영하여 계란을 계산합니다.
- 또는, 산란 후 부모의 알 돌기 관리를 관찰 할 경우 알을 물에서 꺼내지 않도록주의하십시오. 오히려 페트리 접시를 사용하여 계란과 수족관 물을 훑어 내고 신속하게 계란 덩어리를 찍은 다음 조심스럽게 달걀 덩어리로 시트를 다시 같은 PVC 파이프로 다시 채우기 전에 모든 것을 원래 위치로 되돌려 놓습니다. 수족관의 하단입니다. 마지막으로 그림을 사용하여 알을 계산합니다.
- ImageJ를 사용하여 알을 계산하십시오 ( 그림 3
- 그렇지 않으면, 계란이 조밀하게 퇴적 된 경우 면적 - 밀도 비율을 계산하여 난의 수를 계산하십시오 : 5 x 5 mm 2 격자로 인쇄 된 계란을 계산하여 난 밀도를 계산하고, ImageJ에 의해 계란으로 덮인 표면적을 측정하고, 단위 및 표면적 당 위의 밀도로부터 난의 총 수를 추정하십시오. ImageJ의 위의 표면적 측정 방법은 다음과 같이 설명됩니다. Set scale ... (Research Services Branch, https://imagej.nih.gov/ij/docs/menus/analyze.html); 이미지의 공간 스케일을 정의하는 방법을 설명합니다. ImageJ를 사용하여 표면적 측정 (Keene State College, Academic)Technology, https://dept.keene.edu/at/2011/04/15/by-matthew-ragan/).
참고 : 계란이 투명하면 ImageJ가 계란의 윤곽을 개별적으로 인식 할 수 있기 때문에 검은 방수 시트가 자동 계산 방법에 더 적합합니다.
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Representative Results
위의 방법에 따라 T. marinae 의 41 마리 , 15 마리 및 96 마리의 개체 가 일본 카고시마 현 아마미 오시 마 앞바 다에서 2014 년 4 월, 2015 년과 2016 년에 각각 수집되었다 ( 표 1 ). 각각의 경우에 수족관에 알을 낳기 전까지 25 (61 %), 14 (93 %) 및 91 (95 %)의 개인이 살았습니다. Fukuda et al . 그림 3 에서 볼 수 있듯이 2014 년 관측 기간이 끝나기 전에 한 마리의 어류 만 사망했고, 물고기가 산란 한 지 7 일 만에 물고기가 산란하는 것처럼 보였다.
VIE 꼬리표는이 소형 물고기에서조차 개인의 눈에 보이는 확인을 허용했다 ( 그림 4A , 4B ). 방수 시트 상에 퇴적 된 계란의 사진이 도 4C에 도시되어,그들은 세어 볼만큼 충분히 보였습니다. 그것이 제거되고 사진이 찍히고 난 후에, 시트는 수족관의 그 이전의 장소에 되돌아 갔다. 그리고 둥지를 짓고있는 남성은 즉시 아버지의 걱정을 계속했다 ( 그림 4D ).
함께, 이러한 기술은 사육 된 모든 개별 물고기의 사회적 상호 작용과 생식 성공을 기록하기위한 실험에 사용될 수 있습니다. 특히, Fukuda et al. 3 은 위의 방법을 사용하여 수족관에서 T. marinae 의 생식 생태계를 조사했다. 결과는 여성의 생산성과 여성의 몸 크기 사이에 양의 상관 관계를 보여 주었지만 ( 그림 5 ), 크기가 다른 남성들 사이에서는 생식 성공의 차이가 관찰되지 않았다 ( 그림 6 ). 또한 T. marinae 는 연속적인 번식 쌍을 형성하는 경향이 있었고, 대부분의 산란은 이들 내에서 발생했다쌍 ( 표 2 ). 남성 T. marinae 만이 부계 달걀 관리를 수행하는 것으로 관찰되었다. 개인간의 공격적인 상호 작용은 일부일처 제 교배 체계가 주로 여성 배우자 보호에서 비롯 될 수 있다고 제안했습니다.
| 수집 일 | 컬렉션 깊이 | 수집 방법 | 수집 된 개인 수 | 체류 기간 | 수송 일 | 사망자 수 | 생존률 | ||
| 부상 | 수송 | 순응 | |||||||
| 15 April 2014 | - 21m | 표면까지 물고기와 표면. | 41 | 밤새 | 2014 년 4 월 16 일 | 16 | 0 | 0 | 61 % |
| 2015 년 4 월 23 일 | - 19 m | 12m 깊이까지 물고기와 표면, 표면까지 로프로 당겨. | 15 명 | 1 일 | 2015 년 4 월 25 일 | 1 | 0 | 0 | 93 % |
| 2016 년 4 월 26 일 | - 21m | 표면이 물고기까지 깊이가 15 m가 될 때까지 표면까지 로프로 잡아 당깁니다. | 96 | 1 일 | 2016 년 4 월 28 일 | 4 | 1 | 0 | 95 % |
표 1 : 수집 조건 및 생존율. 죽은 개체의 수는 개별 물고기가 죽은시기와 수를 나타냅니다.
표 2 : 육성 실험 중 산란 쌍. 남 , 남성의 개인 신원 (ID); F , 여성의 ID; 밑줄 친 ID , 산란 된 여성; 윤곽선이 그어진 ID , 남자와 짝짓기 한 여성, 연속적인 쌍을 세우지 않은 여성. 이 결과는 T. marinae 가 일부일처 교배 시스템의 일부로서 지속적인 생식기 쌍을 형성하는 경향이 있음을 나타낸다. 이 테이블은 Fukuda et al. 3 이 테이블을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
그림 1 : VIE 태깅 위치의 배열. ( A ) 각 숫자는 뉴mber)의 위치에 대응한다. 개별 물고기의 신원 번호는 태그의 위치를 일치시켜 결정됩니다. ( B ) 93 호 양식 어류의 예.
그림 2 : 외과 테이블을 보여주는보기. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3 : ImageJ를 사용하여 수동 및 자동 에그 계산. ( A ) Cell Counter Plugin을 이용한 수동 카운팅. 이 플러그인을 사용하면 일부 하위 그룹별로 그룹화 된 계란을 계산할 수 있습니다. 달걀s는 네 그룹으로 세분되어 세어졌습니다. ( B ) 자동 계란 계산. ( C ) 자동 계란 계산 이미지와 원본 그림을 병합 한 이미지. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4 : VIE 꼬리표를 가진 T. marinae 를 주사 하고 Artificial Spawning Site에 기탁 된 계란을 세는 방수 시트를 사용하여 대표적인 개인 식별 . ( A ) 분홍색 VIE 꼬리표에 의해 확인 된 개인 번호 1; 흰색 화살표 는 삽입 된 VIE 태그를 나타냅니다. ( B ) 두 개의 녹색 VIE 태그로 식별되는 Individual No. 11; 흰색 화살표 는주입 VIE 태그. ( C ) 방아 시트에 알을 산란. ( D ) 달걀이 든 시트가 제거 된 후 남성이 재개 한 부계 돌연변이를 제거하고 사진을 촬영 한 다음 다시 수족관에 넣었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5. T. marinae 에서의 클러치 크기와 여성 몸체 크기 (전체 길이) 사이의 관계 . 일반 선형 혼합 효과 모델을 사용하여 얻은 여성의 각 크기 그룹에서 추정 된 양산 곡선 . 이 결과는 여성의 생식 성공률이 신체 크기에 따라 증가 함을 나타낸다 (Pearson 상관, r = 0.56, P <0.05, n = 1 6). 이 수치는 Fukuda et al. 3 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 6. T. marinae 에서 추정 된 짝짓기 성공과 남성의 체형 크기 (전체 길이) 사이의 관계 . 각 데이터 항목은 수컷의 번식 빈도와 암컷의 추정 된 번식력으로부터 추정되었다. 이 결과는 수컷의 체형에 상관없이 (Pearson 's correlation, r = ˗0.51, P > 0.05, n = 8) 수컷이 재발 성으로 성공했음을 나타낸다. 이 수치는 Fukuda et al. 삼_upload / 55964 / 55964fig6large.jpg "target ="_ blank ">이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
수많은 물고기의 생식 생태계는 실험적 양육을 통해 종종 드러났습니다. 특히 성 변화 6 , 8 , 14 , 배우자 선택 15 , 16 및 종내 경쟁 7 , 17 은 수족관에 보관 된 물고기를 사용하여 상세한 조사의 주제가되어 왔습니다. 게다가, 수족관에서 관찰 된 일부 결과는 나중에 현장 8 , 18 에서 확인되었다. 이러한 결과는 수족관에서 야생 잡힌 어류와 함께 양육 실험의 유용성과 신뢰성을 뒷받침합니다. 또한 야생 상태에서 자연적으로 발생할 수있는 상황을 시뮬레이션하는 양육 실험을 통한 조작은 대규모 현장 조사의 예비 단계로서 가치가 있습니다.
프로tocol은 접착제 달걀을 묻는 작은 크기의 기판 스폰지에 적합한 방법을 설명합니다. 수족관에 보관 된 물고기에 대한 최적 조건의 큰 변화가 종 사이에 예상 될 수 있으므로 프로토콜의 일부 지점을 조정해야합니다. 특히, 특정 연구 종에 대한 예비 평가 후 조정을 위해 5 가지 프로토콜을 고려해야한다. (1) 프로토콜 1.4에서 어류 표면을 보냈다. (2) 프로토콜 3.1.3 및 3.1.5 각각에서 VIE 태그를 주사하기 직전 마취 액체의 농도 및 마취에 소요 된 시간; (3) 프로토콜 3.1.8에서 물고기에 VIE 태그를 주입 할 때 바늘의 삽입 깊이; (4) 프로토콜 3.2.1에서 인공 둥지로 사용 된 PVC 파이프의 크기와 형태; (수동적 인 계산 (정확하지만 시간과 노력이 필요함), 자동 계산 및 면적 - 밀도 비율 추정 (효율적이지만 거친). 때 th일부 알이 없거나 일부분으로 그룹화 된 카운팅이 필요할 때 (예 : 사망 또는 생존, 발달 단계별 분류 등) 수동 수 계산 방법이 권장됩니다. 많은 수의 난자가 있고 ImageJ가 각 난을 개별적으로 구별 할 수있는 경우 자동 계산 방법이 적합 할 수 있습니다. 면적 - 밀도 비율 추정은 많은 계란이 있고, 계란이 개별적으로 구분할 수 없을 때 효과적이다.
많은 종류의 물고기가 표면으로 운반 된 후 부력을 완벽하게 유지하지 못할 수 있습니다. 그러나,이 프로토콜에 따라주의 깊은 부상은 대부분의 물고기가 하루 이내에 복구 할 수 있습니다. 부상을 입은 직후 수거 가방에 거꾸로 물고기가 발견되면 물고기를 제거하기 적어도 하루 전에 사망했는지 확인하십시오. 물고기가 표면에 가져온 직후에 죽거나, 회복하기 위해 하루 이상이 필요할 경우, 물고기가 더 천천히 표면에 닿거나 연장됩니다ch 수집 시간 간격.
VIE 태그 외에도, 개별적인 물고기를 식별하기위한 다른 방법으로는 컬러 플라스틱 스트 리머, 나일론 앵커 태그, 핀 클리핑 및 PIT (passive integrated transponder) 태그 등이 있습니다. 그러나 특히 작은 어류를 수집 할 때 이러한 기술 중 일부는 사망률을 증가 시키거나 성장을 방해하거나 현장에서 볼 수 없습니다 . 대부분의 외장 태그 물고기의 몸에서 돌출로 (10)는 또한, 태그는 굴, 좁은 틈새 또는 조밀 한 해초 침대에 서식하는 종의 몇 가지 행동을 제한 할 수 있습니다. 대조적으로, 작은 물고기의 많은 연구는 VIE 태그는 사망률과 성장 (10), (11)에 더 큰 부정적인 영향을 미치지 않았다 것을 발견했다. VIE 꼬리표는 또한 피하 꼬리표가 튀어 나오지 않기 때문에 물고기 행동이 무시할 정도로 생기게 할지도 모른다. 그러나 물고기는 작다.소형 종의 행동 관찰을위한 식별 방법 10 . 이전의 몇몇 연구에 따르면, 아크릴 페인트는 VIE 태그 19 , 20 과 동일한 방식으로 사용될 수 있습니다.
인공 산란은 일반적으로 demersal 접착제 달걀을 산란 물고기의 재생산의 조사에 사용됩니다. 이전 연구 등과 테라코타 지붕 타일 (21), 세라믹 (22), 쉘 (23), PVC 박스 (24)와 같은 재료의 종류로부터 만들어진 인공 둥지를 사용했다. 이러한 인공 산란 장소는 많은 기질 산란에 유용 할 수 있습니다. 이 연구는 물고기의 인공 둥지가 모양 및 / 또는 크기와 같은 것이 가능한지보다 더 중요하다고 제안합니다. PVC 파이프는 얻기 쉽고 가공하기 쉬운 재료이기 때문에,이 신문은 산란 둥지로 PVC 파이프를 사용했습니다.
포로 사육 관측을 통해 얻어진 생태 정보의 한계는 잘 인식되어야한다. 당연히 종의 자연 환경과 비교하여 수족 환경을 조성하는 것은 수생 서식지의 다양한 생태적 조건 ( 예 : 물의 물리적 및 화학적 특성, 식품 생태학, 내부 및 특정 상호 작용 기회, 서식지 범위, 인구 밀도). 개인이 자연스러운 행동과 다른 행동을 보일 수도 있습니다. 그러므로 현장 조사는 양육 관찰을 보완하여 어류 재생산 행동의 적응 적 진화를 추론 할 수있는 최상의 배경을 제공해야한다.
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Disclosures
저자는 공개 할 것이 없습니다.
Acknowledgments
물고기를 모으는 데 도움을 준 S. Yokoyama에게 감사드립니다. 양육 방법에 대한 유용한 조언을 해주신 W. Kawamura에게도 감사드립니다. 이 연구는 TS에 수여 된 교부금 (제 24370006 호 및 제 16K07507 호)을 통해 일본 과학 진흥 학회 (KAKENHI)의 지원을 받았다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hand net | Nisso | AQ-17 | Select for the target species size. |
| Polyethylene bag | San-U Fish Farm | 8194 | |
| Rubber band | ESCO Co. LTD. | 78-0420-64 | ø 80 mm x 6 mm |
| Oxygen cylinder | N/A | N/A | Oxgen cylinder for diving equipment suits. |
| Elbagin | Japan Pet Design Co. Ltd. | 75950 | Pafurazine F (provided from same company) is equivalent drug to Elbagin. |
| Polystyrene foam box | N/A | N/A | |
| Pipette | AS ONE | 1-8625-04 | |
| Rope | Mizukami Kinzoku Co. LTD. | 95301601 | |
| Weight | N/A | N/A | Weight for diving equipment suits. |
| Water tank | N/A | N/A | |
| Air pump | KOTOBUKI | 4972814 062115 | |
| Air stone | KOTOBUKI | 4972814 232204 | |
| 2-Methylquinoline | Wako | 170-00376 | |
| Ethanol (99.5) | Wako | 057-00456 | |
| Visible implant elastomer tag kit | Northwest Marine Technology | N/A | http://www.nmt.us/products/vie/vie.shtml |
| Soft sponge | N/A | N/A | |
| PVC board | N/A | N/A | 0.3 mm thickness is easy to use. |
| Petri dish | N/A | N/A | A large one, such as ø 160 mm and 30 mm depth, is convenient for the injection of the VIE tag. |
| Transparent acrylic board | N/A | N/A | |
| UVA filtered light | N/A | N/A | |
| PVC pipe | N/A | N/A | ø 5 cm |
| Waterproof sheet | SOMAR Corp. | 3EKW03 | The film for the plain copier. |
| Sand | N/A | N/A | |
| Stereo microscope | N/A | N/A | |
| Camera | N/A | N/A |
References
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