Summary

पेरिनेरियल आक्रमण के Vivo Murine Sciatic तंत्रिका मॉडल में एक

Published: April 23, 2018
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Summary

हम sciatic तंत्रिका में syngeneic अग्नाशय के कैंसर कोशिकाओं इंजेक्शन द्वारा पेरिनेरियल आक्रमण के vivo murine मॉडल में एक का वर्णन । मॉडल तंत्रिका आक्रमण की हद के ठहराव के लिए अनुमति देता है, और सेलुलर और पेरिनेरियल आक्रमण के आणविक तंत्र की जांच का समर्थन करता है ।

Abstract

कैंसर की कोशिकाओं को एक प्रक्रिया पेरिनेरियल आक्रमण (्नि), जिसमें कैंसर कोशिकाओं पैदा करना और तंत्रिका microenvironment में विस्थापित के माध्यम से नसों पर आक्रमण । आक्रमण के इस प्रकार के कैंसर के प्रकार की एक किस्म द्वारा प्रदर्शित किया जाता है, और बहुत बार अग्नाशय के कैंसर में पाया जाता है । माउस अग्ंयाशय के भीतर तंत्रिका तंतुओं के सूक्ष्म आकार orthotopic murine मॉडल में ्नि मुश्किल का अध्ययन renders । यहां, हम ्नि के वीवो मॉडल में एक heterotopic का वर्णन है, जहां हम H7 murine तंत्रिका में syngeneic अग्नाशय के कैंसर सेल लाइन Panc02-sciatic सुई । इस मॉडल में, anesthetized चूहों की sciatic नसों को उजागर कर रहे हैं और कैंसर कोशिकाओं के साथ इंजेक्शन । कैंसर की कोशिकाओं के इंजेक्शन के बिंदु से रीढ़ की हड्डी की ओर समीपस्थ नसों में आक्रमण । हमला sciatic नसों तो निकाले जाते है और जमे हुए अनुभाग के लिए OCT के साथ कार्रवाई की । एच एंड ई और इम्यूनोफ्लोरेसेंस इन वर्गों के दाग दोनों के ठहराव की डिग्री आक्रमण और प्रोटीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन की अनुमति देते हैं । इस मॉडल को अपनी बहुमुखी प्रतिभा दी ्नि पर अध्ययन की एक किस्म के लिए लागू किया जा सकता है । विभिंन आनुवंशिक संशोधनों और/या कैंसर कोशिकाओं के विभिंन प्रकार के साथ चूहों का उपयोग सेलुलर और ्नि के आणविक तंत्र की जांच के लिए और विभिंन प्रकार के कैंसर के लिए अनुमति देता है । इसके अलावा, तंत्रिका आक्रमण पर चिकित्सकीय एजेंटों के प्रभाव इन चूहों के लिए उपचार लागू करने के द्वारा अध्ययन किया जा सकता है ।

Introduction

नसों एक विशिष्ट ट्यूमर microenvironment है कि कैंसर के विकास और प्रवासन1,2,3उत्तेजित करता है । पेरिनेरियल आक्रमण (्नि) प्रक्रिया है जिसके माध्यम से कैंसर कोशिकाओं में और नसों के आसपास आक्रमण । यह मेटास्टेसिस के एक अनूठे मार्ग के रूप में माना जा सकता है के बाद से कैंसर आक्रमण मूल की साइटों से दूर नसों के साथ फैली हुई है । ्नि अग्नाशय, प्रोस्टेट, सिर और गर्दन, लार, ग्रीवा, और एक 22% से १००%1,2से लेकर घटना के साथ कोलोरेक्टल कैंसर सहित कई प्रकार के कैंसर में पाया जाता है । ्नि दर्द के साथ जुड़ा हुआ है और गरीब पूर्वानुमान और बदतर जीवित रहने की दर1,2के साथ संबद्ध है ।

पेरिनेरियल आक्रमण के मॉडल का विकास इस प्रक्रिया के सेलुलर और आणविक तंत्र स्पष्ट करने के लिए आवश्यक है, और ्नि कमी करने के लिए उंमीदवार चिकित्सकीय एजेंटों का परीक्षण करने के लिए । इन विट्रो में कैंसर और नसों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के तरीकों सह तंत्रिका explants4के साथ कैंसर कोशिकाओं की संस्कृति, पृष्ठीय रूट ganglions के साथ5,6,7, या विशिष्ट कोशिकाओं के साथ शामिल तंत्रिका microenvironment से ऐसे Schwann कोशिकाओं के रूप में7vivo में दृष्टिकोण, तथापि, और अधिक शारीरिक रूप से प्रासंगिक हैं, कैंसर माउस मॉडल जिसमें कैंसर प्रेरित किया गया है या प्रत्यारोपण और पूरे तंत्रिका microenvironment के लिए लेखांकन का लाभ है के उपयोग में शामिल हैं । अग्नाशय या प्रोस्टेट कैंसर के orthotopic मॉडलों में ्नि की सूचना दी गई है8,9,10 और ्नि की घटनाएं दर्ज हो सकती हैं, लेकिन उन अंगों में नसों के छोटे आकार की वजह से यह देखना मुश्किल होता है पूरी तंत्रिका और इसलिए ्नि की हद तक बढ़ाता है । हम यहां का वर्णन मॉडल एक सरल शल्य प्रक्रिया11के माध्यम से चूहों के sciatic तंत्रिका में इंजेक्ट कर रहे है जिसमें कैंसर की कोशिकाओं ्नि के एक vivo में मॉडल है । heterotopic प्रत्यारोपण रीढ़ की हड्डी की ओर तंत्रिका के भीतर आक्रमण । रीढ़ की हड्डी के लिए इंजेक्शन की साइट से तंत्रिका आक्रमण की लंबाई मापा जा सकता है, साथ ही तंत्रिका के भीतर कैंसर की मात्रा । महत्वपूर्ण बात, हमला तंत्रिका भी सूक्ष्म सहित परख की एक किस्म के लिए एकत्र किया जा सकता है, और आणविक विश्लेषण । कैंसर कोशिकाओं की एक किस्म का परीक्षण किया जा सकता है, और मेजबान चूहों कि आनुवंशिक रूप से संशोधित किया गया है या विशिष्ट यौगिकों के साथ इलाज किया जा सकता है के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया । इस शक्तिशाली परख कैंसर की कोशिकाओं और मेजबान microenvironment के लिए अनुमति देता है ्नि के तंत्र में जांच के लिए संशोधित किया जाएगा ।

Protocol

पशु विषयों के साथ प्रक्रियाओं के सभी मेमोरियल Sloan Kettering कैंसर सेंटर में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया । 1. कैंसर की कोशिकाओं को तैयार करना हार्वेस्ट उप-धाराप्र?…

Representative Results

इस विधि murine sciatic तंत्रिका में अग्नाशय के कैंसर की कोशिकाओं के सर्जिकल आरोपण का वर्णन करने के लिए quantifiable तंत्रिका आक्रमण के vivo में मॉडल बनाने के लिए । चित्रा 1 sciatic तंत्रिका और इंजेक्…

Discussion

इस प्रोटोकॉल में हम पेरिनेरियल आक्रमण है कि अग्नाशय के कैंसर की कोशिकाओं द्वारा sciatic तंत्रिका आक्रमण के ठहराव के लिए अनुमति देता है की vivo murine मॉडल में एक का वर्णन । इस मॉडल तंत्रिका आक्रमण के आणविक तंत?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

लेखक आणविक cytology सुविधा और मेमोरियल Sloan Kettering कैंसर केंद्र की पशु सुविधा द्वारा प्रदान की गई तकनीकी सेवाओं को स्वीकार करते हैं । यह काम NIH अनुदान CA157686 (R.J. वोंग) और P30 CA008748 (मेमोरियल Sloan Kettering कैंसर सेंटर सहायता अनुदान) द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Mouse Number and age variable depending on experimental needs
Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS) Any Steps 1.1, 1.2, 1.3.
Conical centrifuge tube, 50 mL Falcon 352098 Step 1.1
Microcentrifuge tube 1.5 mL Axygen MCT-150-C-S Step 1.2
Electric razor WAHL 9962 Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent
Isoflurane, 250 mL Baxter 1001936060 Step 2.2
Hypoallergenic surgical tape 3M Blenderm 70200419342 Step 2.3
Betadine Swapsticks PDI SKU 41350 Step 2.4
Webcol Alcohol Preps Covidien 5110 Step 2.4
Sterile surgical tools (scissors and forceps) Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5
10 μL Hamilton syringe Hamilton 80308 Steps 2.7, 2.8
Steel Micro spatula Fisher Scientific S50823 Step 2.7
Dissecting microscope Step 2.7
Bupivacine, 1 g Enzo Life Sciences BML-NA139-0001 Step 2.9. Reconstitute to 0.5%
5-0 Nylon suture Ethicon 698H Step 2.9
Tissue-Tek O.C.T. Compound VWR 25608-930 Step 4.1
Tissue-Tek Cryomold Molds VWR 25608-916 Step 4.1

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Deborde, S., Yu, Y., Marcadis, A., Chen, C., Fan, N., Bakst, R. L., Wong, R. J. An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion. J. Vis. Exp. (134), e56857, doi:10.3791/56857 (2018).

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