Här presenterar vi en pålitlig och enkel tvådimensionell (2D) coculture system för att studera interaktionen mellan tumörceller och benmärgen adipocyter, som avslöjar en dubbla melanom cell-derived faktorer påverkar de benmärgen adipocyter differentiering och utgör också en klassisk metod för mekanistiska studier av skelettmetastaser.
Överhörning mellan benmärgen adipocyter och tumörceller kan spela en avgörande roll i processen för skelettmetastaser. Det finns en mängd metoder för att studera betydande överhörning; en tvådimensionell transwell system för coculture är dock fortfarande en klassisk, pålitlig, och enkelt sätt för överhörning studien. Här presenterar vi ett detaljerat protokoll som visar coculture av benmärgen adipocyter och melanomceller. Dock kan ett sådant coculture system inte bara bidra till studiet av cell signal transductions av cancerceller som induceras av benmärgen adipocyter, men också till framtiden mekanistisk studie av skelettmetastaser som kan avslöja nya terapeutiska mål för ben metastas.
Skelettmetastaser är utbrett bland patienter med avancerad cancer, men en botande behandling är fortfarande inte tillgänglig. Utöver specialiserade på lagra energi som fett, kan adipocyter stödja tumörtillväxt och metastas i benmärgen och andra organ1,2,3,4,5,6. Dessutom spelar adipocyter en viktig roll i regleringen av cancer cellbiologi7,8,9,10 metabolism4,11,12 ,13,14,15,16, så väl som i ben metastaser1,4,12. I benmärgen nisch, kan adipocyter också påverka den biologiska beteenden cancer celler4,6,17. Samspelet mellan benmärgen adipocyter och cancerceller med osteotropism är väsentliga för förståelsen av skelettmetastaser. Lite är dock känt.
Baserat på nuvarande studier, tillämpas olika metoder adipocyter, inklusive två – eller tredimensionella (2/3D) och ex vivo kulturer17,18,19,20,21. Nyligen, Herroon et al. utformat en ny 3D-kultur-metod att studera interaktioner mellan benmärgen adipocyter och cancer celler22. Även om den 3D coculture är optimal för att imitera fysiologiska interaktioner mellan adipocyter och cancer celler i vivo, det lider av dålig reproducerbarhet22,23. I jämförelse med ett 2D coculture system föreskriva ett 3D coculture system olika cellulära fenotyper, såsom cell morfologi21,22,24,25,26. Dessutom, ex vivo kultur isolerade spongiöst ben vävnad fragment kan leda till en robust utväxt av adipocyter från odlade benmärg celler17.
I motsats till dessa tidigare modeller förblir 2D cell kultur modellen dock en klassisk, tillförlitlig och enkel teknik för snabbt Skanna kandidat molekyler och de fenotyper som ändrats i adipocyter eller cancer celler in vitro-1, 4,6,12,15,27. För att bättre förstå överhörning mellan benmärgen adipocyter och melanomceller, ger vi ett detaljerat protokoll för ett 2D coculture system av benmärgen adipocyter med melanomceller.
Cocultures med skär har använts att studera cell-till-cell interaktioner. Systemets 2D coculture är ett effektivt sätt att observera hur de två delar överhörning i vitro, som vi här visade två olika cancer cell-driven effekter på benmärgen adipocyter. Många laboratorier har utnyttjat denna metod för att undersöka överhörning mellan adipocyter och cancer celler6,12,27,39…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar Dov Zipori (The Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israel) Vänligen för att ge oss murina benmärgens stromaceller cellen linje 14F1.1. Denna studie stöddes av bidrag från kinesiska National Natural Science Foundation (nr 81771729) och Yongchuan sjukhus av Chongqing medicinska universitetet (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
24-well plate | Corning | CLS3527 | |
Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
Culture incubator | Thermo Scientific | ||
50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
Microscopy | Olympus | – | |
200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |