高周波超音波による監視マウスのうっ滞による深部静脈血栓症
Summary
この議定書では、うっ滞モデルを用いた静脈血栓症を取得する手順について説明します。さらに、時間の経過とともに血栓形成と解像度を測定する非侵襲的な方法を用いています。
Abstract
静脈血栓症は、1 で 500 の年次発生率と人口の 1-2% に影響を与える一般的な状態です。静脈血栓症は肺塞栓症や血栓後症候群、慢性的な足の痛み、腫れ、潰瘍、特徴または重要な慢性結果慢性的な肺高血圧症の結果によって死につながることができます呼吸器系妥協。これは最も一般的な心血管疾患は、心筋梗塞や虚血性脳卒中後やすべての医療分野の臨床的課題は、それは癌、全身性疾患、手術、および主要な外傷などの他の疾患のコースを複雑にすることができます。
実験モデルは、これらのメカニズムを勉強する必要があります。うっ滞モデルが誘発するは、一貫性のある血栓サイズと血栓量を定量化できます。しかし、体系的に血栓のサイズ変動や誤ったデータ解釈を避けるために下大静脈の側枝を結紮する必要があります。超音波検査法による血栓のサイズを測定する非侵襲的手法を開発しました。この手法を使用すると、我々 は同じ動物で時間をかけて血栓開発および解像度を評価できます。このアプローチは、代替・削減、・研究における動物の絞り込みの原則に一貫して静脈血栓症の定量化に必要なマウスの数を制限します。血栓重量および組織学的測定と血栓サイズ相関解析が超音波検査で得られたことを確認しました。したがって、現在の研究では、下大静脈うっ滞モデルを用いたマウスにおける深部静脈血栓症を誘発する方法と高周波超音波を用いたそれを監視する方法について説明します。
Introduction
構成される深部静脈血栓症 (DVT) 肺塞栓症、静脈血栓症 (静脈血栓塞栓症) は、心筋梗塞や脳卒中後の心血管死の 3 番目の主要な原因です。500 の 11の年間発生率と人口の 1-2% に影響を与える一般的な条件です。静脈血栓塞栓症につながることができます: 1) 死肺塞栓症;2) 血栓後症候群、慢性的な足の痛み、腫れ、潰瘍; 特徴または、3) 慢性の肺高血圧が重大な慢性呼吸障害の結果します。静脈血栓塞栓症は多因子疾患、血管壁および/または凝固と線溶系のバランスの破綻による凝固亢進状態への損傷、血流うっ滞起因するかもしれないようにそれは 100 年以上前に記載されています。ウィルヒョウがウィルヒョウのトライアドとして知られています。
ほとんどの場合人間の深部静脈血栓症のサンプルを得ることはない、ために、研究者は、深部静脈血栓症の実験動物モデルを開発しました。ラット2マウス3ウサギ4豚5犬の6、および非ひと霊長類7を含むいくつかの動物が使用されています。マウスは遺伝子組み換えできる、深部静脈血栓症を研究する最も頻繁に使用される動物です。ただし、すべての動物のように自発的な DVT ないマウスで観察です。したがって、静脈壁の物理的あるいは化学的変化はマウスで血栓が作成されます。以前マウス8,9,10の下大静脈 (IVC) の血栓症を誘発する塩化第二鉄モデルを使いました。このモデルは確実に数分閉塞血栓を生産の利点を持って、急性深部静脈血栓症に抗凝固・抗血小板薬の役割を調査するため使用することができます。ただし、ターミナルの手順です。このように、急性および慢性の深部静脈血栓症を研究するうっ滞モデルが適しています。このモデルでは、深部静脈血栓症の開発のためのウィルヒョウのトライアドの要因の一つ下大静脈の血流の完全な中断による血栓形成。このモデルは、深部静脈血栓症の形成とした FeCl3モデル11と比較して利点である解像度を検討する使用ことができます。
我々 はマイクロ イメージング高周波超音波システム12を使用して時間をかけて血栓形成と解決に従う非侵襲的手法を開発しました。我々 は以前、病理組織学的に得られた血栓と超音波で静脈血栓症の測定が好意的に関連を実証しました。2 その後の研究で栓重量と組織化学9,10によって定量化血栓領域超音波相関と測定値が得られることを確認しました。もっと重要なは、その高周波超音波を使用してマウス12深部静脈血栓症の形成を監視するあることを示した。非侵襲的な方法で血栓分解能の定量化にも使えます。
ここでは、うっ滞による血栓症マウス モデルとどのように血栓形成は高周波の超音波を使用して時間をかけて非侵襲的監視できるを使用して血栓形成を許可するプロトコルについて述べる。
Protocol
Representative Results
Discussion
うっ滞モデルを使用して成功した静脈血栓形成のためのいくつかの重要な手順があります。静脈血栓症の誘発は、古いマウス下大静脈と大動脈の周りの脂肪の蓄積のためにより困難です。理想的には、このプロシージャを受けるマウスは 8 – 10 週齢をする必要があります。鈍的切離および合字中に下大静脈の内皮細胞の損傷を誘発するように細心の注意する必要があります。さらに、手術後?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、心臓や脳卒中財団、カナダからの助成金、そして、モリスとベラ Fainman 財団にサポートされていました。著者は、VEVO770 の超音波イメージング システムの彼女の技術的なヘルプのベロニク ミショーを感謝したいです。
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
References
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