هنا، علينا أن نظهر أداء نموذج إصابة الحبل الشوكي الحد الأدنى في ماوس الكبار أن قطع الغيار مكانة القناة الوسطى السكن الذاتية العصبية الخلايا الجذعية (الود). علينا إظهار كيف يمكن استخدام التحليل نيوروسفيري التحديد الكمي للتنشيط والهجرة من الود البدائية ونهائية بعد الإصابة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الفحص نيوروسفيري لتقييم تنشيط الخلايا الجذعية العصبية الذاتية في نموذج الفأر من إصابات النخاع الشوكي الحد الأدنى
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
هي الخلايا الجذعية العصبية (الود) في الحبل الشوكي الثدييات الكبار سكان هادئة نسبيا ميتوتيكالي تلين الخلايا التي يمكن دراستها في المختبر باستخدام الإنزيم نيوروسفيري. هذا الفحص تشكيل مستعمرة أداة قوية لدراسة استجابة الود للعوامل الخارجية في صحن؛ ومع ذلك، هذا يمكن أيضا لدراسة التأثير في فيفو التلاعب مع الفهم الصحيح لمواطن القوة والقيود المفروضة المقايسة. أحد التلاعب بالفائدة السريرية هو تأثير الإصابة على تفعيل مجلس الأمن القومي الذاتية. توفر النماذج الحالية لإصابات النخاع الشوكي تحديا لدراسة هذا حسب شدة النماذج شيوعاً كدمة وضغط ترانسيكشن تتسبب في تدمير مكانة مجلس الأمن القومي في موقع الإصابة التي يقيم فيها الخلايا الجذعية. وهنا يصف لنا نموذج الحد أدنى من ضرر الذي يتسبب في أضرار المترجمة على السطح dorsolateral سطحية من انخفاض مستوى الصدر (T7/8) على الحبل الشوكي الماوس الكبار. هذا النموذج الإصابة قطع غيار القناة الوسطى على مستوى الإصابة ويسمح تحليل الود التي تتواجد على مستوى الآفة في نقاط زمنية مختلفة بعد الإصابة. هنا، نحن إظهار كيف يمكن استخدام التحليل نيوروسفيري لدراسة تفعيل السكان متميزة، وذات الصلة منحدرين، اثنين من الود التي تتواجد في منطقة تلين النخاع الشوكي-الود البدائية ونهائي (بنسكس ودنسكس، على التوالي). ونحن لشرح كيفية عزل وثقافة هذه الود من منطقة تلين على مستوى الإصابة وموقع الإصابة المسألة الأبيض. لدينا تشريح النخاع الشوكي بعد الجراحة تظهر زيادة في إعداد بنسك والمستمدة من دنسك نيوروسفيريس من منطقة تلين الاحبال المصابين مقارنة بضوابط، متحدثاً عن التنشيط عن طريق الإصابة. وعلاوة على ذلك، في أعقاب الإصابة، المستمدة من دنسك نيوروسفيريس يمكن أن تكون معزولة من موقع الإصابة، مما يدل على قدرة الود لترحيل من مكانها تلين إلى مواقع الإصابة.
المقدمة
يحتوي الجهاز العصبي المركزي يتدنى لتجديد ذاتي، مولتيبوتينت من الخلايا الجذعية التي لها القدرة على أن تؤدي إلى جميع الخلايا العصبية الناضجة مختلف أنواع1،2،3،4. هذه الخلايا الجذعية العصبية (الود) الموجودة في المنافذ المتخصصة في المخ والحبل الشوكي ويمكن تفعيلها بعد إصابة تتكاثر وتهاجر، وتفرق في الخلايا العصبية الناضجة. قد ثبت الود وذرياتهم إلى الهجرة إلى موقع الإصابة في الإصابات القشرية نماذج5،6. في الدماغ، وأظهرت الود لترحيل من البطينات الجانبية إلى موقع الإصابة حيث أنها تفرق في أستروس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
هذا البروتوكول وافقت "اللجنة رعاية الحيوان" في جامعة تورنتو ويتفق "دليل لرعاية واستخدام لتجريبية الحيوانات" (2nd الطبعة، "المجلس الكندي للعناية بالحيوان"، 2017).
1-جراحة إصابات النخاع الشوكي الحد الأدنى
ملاحظة: قبل عملية جراحية تأكد من أن جميع الأدوات الجراحية والمواد يتم تعقيمها بالطرق المناسبة (الشكل 1A).
- بناء قوس دعم الصدري المتداول يصل المربعات 4 – 5 من الشاش وتسجيل لهم معا في الوسط للحصول على لفافة ثابتة من الشاش.
- ضع الماوس في قاعة توجيهي والشروع في التخدير مع إيسوفلوراني 5%. تأكيد غياب منعكس قرصه تو قبل المتابعة، وكذلك طوال فترة الإجراءات. كما يمك....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في أعقاب عملية جراحية، يجب أن تواجه الفئران العجز الحركي الحد الأدنى التي قد تشمل الذيل وشلل أطرافهم هند ممكن لمدة تصل إلى 24 ساعة. بعد هذا الوقت، يجب أن تواجه الفئران لا شلل أطرافهم هند و/أو شلل وتغيرات طفيفة في مشيه.
ويبين الشكل 3 نتائج تمثيلية من الإنزيم نيوروسفيري 5 أيام بعد إصابة الحبل الشوكي الحد الأدنى. العدد المطلق نيوروسفيريس المستمدة من دنسك (نمت في EFH) أكبر من عدد نيوروسفيريس المستمدة من.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وخلال العملية الجراحية، وهناك بضع خطوات حاسمة حيث أن الباحث ينبغي أن تولي اهتماما خاصا لبغية الحصول على نتائج أفضل وتقليل التباين بين الحيوانات. يجب الحرص مع التخدير استنشاق (إيسوفلوراني) أثناء الجراحة كالمخدر قد ثبت أن لها آثار محصن مع التعرض لفترة طويلة27. وبناء على ذلك، عند دراسة قدرة التجدد بعد إصابة الحبل الشوكي، بذل جهد لإجراء الجراحة، بسرعة وكفاءة ممكنة لمنع التباس المتغيرات. المحافظة على نفس الوقت التعرض isoflurane كل الماوس سوف يقلل تقلب. معدل التنفس الماوس ينبغي رصدها في جميع أرجاء الجرا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
هو تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة كريمبيل (منحة تشغيلية CMM). وكان WX جائزة الطالب "كارلتون مارغريت سميث". NL حصل "منحة الدراسات العليا أونتاريو".
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Agricola Retractor | أدوات العلوم الدقيقة | 17005-04 | |
| مقص الربيع Moria Vannas-Wolff (منحني) | أدوات العلوم الدقيقة | 15370-50 | قم بالتخصيص عند الطلب للحصول على نصائح ضعيفة |
| ملقط Graefe (مستقيم ، 1 × 2 أسنان) | أدوات العلوم الدقيقة | 11053-10 | |
| ملقط Graefe ناعم للغاية (منحني ، مسنن) | أدوات العلوم الدقيقة | 11152-10 | أو أي ملقط آخر لخياطة |
| Hartman Hemostats (Straight) | Fine Science Tools | 13002-10 | أو أي ملقط آخر مناسب لخياطة |
| مقبض المشرط # 3 | أدوات العلوم الدقيقة | 10003-12 | أو أي |
| ماكينة قص شعر | amazon.ca | https://www.amazon.ca/Wahl-Professional-8685-Classic-Clipper/dp/B00011K2BA | أو أي |
| Stereotaxic مناسب آخر تمت معاقبة الصك | Stoeling | 51500 | أو أي |
| بوبرينورفين | مناسب أو أي معتمد على مرفق رعاية الخاص بي | ||
| Meloxicam | أو أي مرفق مناسب يعاقب عليه من قبل مرفق رعاية | ||
| Tears Naturale P.M. | Alcon | https://www.amazon.ca/Alcon-Tear-Gel-Liquid-Eye-Gel/dp/B00HHXGUXE | أو أي 02225875 أخرى مناسبة |
| من Isoflurane | Baxter International Inc | DIN | أو أي amazon.ca أخرى مناسبة للتخدير |
| Q-tips Cottom Swabs | https://www.amazon.ca/Q-Tips-Cotton-Swabs-500-Count/dp/B003M5UO6U/ref=pd_lpo_vtph_194_bs_tr_img_1/140-7113119-8364127?_encoding=UTF8&psc=1&refRID=JC16N542KVRF2N62N3DS | ||
| شاش قطني | فيشر علمي | 13-761-52 | |
| 30 جرام إبر | بيكتون ديكنسون | 305106 | للإصابة |
| 25 جرام إبر | بيكتون ديكنسون | 305122 | لحقن المخدرات |
| 1 مل محاقن | بيكتون ديكنسون | 3090659 | لحقن المخدرات |
| 3 مل محاقن | بيكتون ديكنسون | 309657 | لحقن السوائل |
| 4-0 خياطة | uoftmedstore.com | 2297-VS881 | لخياطة الجلد |
| 6-0 خياطة | uoftmedstore.com | VS889 | لخياطة العضلات |
| مرهم بوليسبورين | amazon.ca | 102051 | |
| Isoflurane Vaporizer | VetEquip | 901806 | |
| 15 مل أنابيب مخروطية | ThermoFisher | أي | |
| أطباق بتري | ThermoFisher | أي | |
| Trypan Blue | ThermoFisher | مناسب أي | |
| مقياس للخلايا | ThermoFisher | ||
| طرد مركزي مناسبThermoFisher | أي | ||
| أدوات تشريح قياسية | أدوات | ||
| مجهر | Zeiss | Stemi 2000 | |
| مجهر العد | أوليمبوس | CKX41 | |
| العصبي القاعدي-A | متوسط Invitrogen | 10888-022 | |
| B27 | Invitrogen | 17404-044 | |
| البنسلين - ستربتومايسين | جيبكو | 15070 | |
| لتر - الجلوتامين | جيبكو | 25030 | |
| DMEM | Invitrogen | 12100046 | |
| F12 | Invitrogen | 12700075 | |
| 30٪ جلوكوز | سيجما | G6152 | 1 م ، 9.01 جم في 100 مل dH 2< / sub>O |
| 1 م جلوكوز | |||
| 7.5٪ NaHCO3 | Sigma | S5761 | 155 mM ، 1.30 g in 100 مل dH2< / sub>O |
| 155 mM NaHCO3 | |||
| 1 M HEPES | Sigma | H3375 | 23.83 g في 100 مل dH2 |
| O Apo-Transferrin | R& D Systems | 3188-AT | |
| Putrescine | سيجما | P7505 | |
| الأنسولين | سيجما | I5500 | |
| السيلينيوم | سيجما | S9133 | |
| البروجسترون | سيجما | P6149 | |
| نظام تفكك غراء | قارورة Worthington Biochemical Corporation | PDS | 1 من غراء لعينتين |
| من مسحوق PMG8041 عامل نمو البشرة | المعاد تكوينه بمزيج هرمون 1 مل ويتم تقسيسه في قوارير 20 ميكرولتر ليتم تخزينها في الفريزر | ||
| PHG0226 | نمو الخلايا الليفية | المعاد تشكيله بمزيج هرمون 0.5 مل ونقاصه في 20 مو ؛ L قوارير ليتم تخزينها في الفريزر | |
| Heparin | Sigma | H3149 | |
| عامل مثبط لسرطان الدم | في المنزل | ||
| الدم | |||
| الأزرق | |||
| 24 بئر لوحات | NUNC | ||
| 2 M NaCl | Sigma | S5886 | 11.69 جم في 100 مل dH2< / sub>O |
| 1 M KCL | Sigma | P5405 | 7.46 جم في 100 مل dH2O |
| 1 M MgCl2 | Sigma | M2393 | 20.33 g في 100 مل dH2O |
| 108 mM CaCl2 | Sigma | C7902 | 1.59 جم في 100 مل dH2O |
المراجع
- Johansson, C. B., et al. Identification of a neural stem cell in the adult mammalian central nervous system. Cell. 96 (1), 25-34 (1999).
- McKay, R. Stem cells in the central nervous system. Science. 276 (5309), 66-71 (1997).
- Gage, F. H.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
