22C3 Anti-PD-L1 抗体精矿在非小细胞肺癌活检及细胞学标本中的应用
Summary
为了扩大全世界实验室的能力, 以可靠和可重复的方式评估肺癌患者接受 pembrolizumab 治疗的资格, 我们开发了一种使用22C3 抗体集中于广泛应用的检测方法。免疫组化 autostainer, 用于活检和细胞学标本。
Abstract
Pembrolizumab 单药疗法已被批准为一线和二线治疗 PD-L1-expressing 晚期非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者。用 PD-L1 免疫组化 (IHC) 22C3 伴侣诊断法 (PD-L1) 对肿瘤组织进行了实验验证。我们开发了一个优化的实验室开发的测试 (LDT), 使用22C3 抗体 (Ab) 集中在广泛可用的 IHC autostainer 活检和细胞学标本。对 PD-L1 TPS 进行了120配对全肿瘤组织切片和活检标本, 并与70配对活检和细胞学标本 (支气管洗涤, n = 40; 胸腔积液, n = 30)。22C3 Ab 精矿为基础的 LDT 表明, 活检 (~ 100%) 和细胞学 (~ 95%) 标本之间的高协调率, 与 PD-L1 IHC 表达式确定使用 PD-L1 IHC 22C3 同伴化验在两个 TPS 切割点 (≥1%, ≥50%)。在这里提出的优化 LDT, 利用 22C3 Ab 精矿来确定在肿瘤组织和细胞学标本中的 PD-L1 表达, 将扩大全球实验室的能力, 以评估肺癌患者的资格, 以治疗与pembrolizumab 以可靠和可重现的方式进行单一疗法。
Introduction
最近的临床试验证明 pembrolizumab 是一种人性化的单克隆 IgG4 同种抗体, 它阻断了程序性细胞死亡 1 (PD-1) 及其配体、PD-L1 和 PD-L2 之间的相互作用, 在治疗患者中先进的 NSCLC1,2,3,4。
目前, pembrolizumab 被批准用于治疗 PD-L1-expressing 非细胞肺癌的治疗-天真的患者 PD-L1 表达 TPS 的≥50% 和没有表皮生长因子受体 (EGFR) 或变性淋巴瘤激酶 () 基因组肿瘤畸变3对以前治疗过的病人用 PD-L1 TPS 的≥1%1。
PD-L1 蛋白表达 IHC 被广泛应用于 anti-PD-1/PD-L1 治疗的预测生物标志物检测。在 pembrolizumab 临床试验中, 使用 PD-L1 IHC 22C3 辅助试验5测定了用福尔马林固定石蜡嵌入 (FFPE) 组织样品获得的 PD-L1 TPS。这项化验已获美国食品及药物管理局 (FDA) 批准, 并已在欧洲 CE 标记, 以确定肿瘤 PD-L1 TPS5。
各机构为可靠和高质量地评估 PD-L1 TPS 与使用22C3 抗体浓缩物的 LDTs 提供了更多的全球选择, 这对于支持有关患者资格的临床决定是必不可少的 pembrolizumab治疗。大量病理学实验室无法获得伴侣诊断 PD-L1 IHC 22C3 检测。因此, 开发可靠和一致的 LDTs 兼容其他, 广泛可用的 IHC autostainer 平台是必不可少的。
此外, 有必要建立 LDTs 使用细胞学标本, 是唯一的标本类型经常可用的 NSCLC 患者。PD-L1 IHC 22C3 伴侣检测是验证切除, 核心针活检, bronchoscopies 只有当支气管镜产生100肿瘤细胞。虽然这些样本类型经常获得, 细胞学样本更容易收集, 是最常见的样本类型在一些机构6,7。然而, 目前尚无经证实的诊断化验方法可用于评价细胞学标本中的 PD-L1 表达;与细胞学样品兼容的可靠 LDTs 将进一步促进高质量的 PD-L1 测试。
此外, 在建立 LDT 的临床验证时, IHC 应与相应的临床验证的商业试验8进行类似的操作。例如, 应该验证几个关键步骤, 以获得相同的信号序列部分, 如抗体滴定, 预处理延迟, 孵化时间, 和放大系统9。
我们最近开发了一个优化 LDT, 使用22C3 抗体精矿评价 PD-L1 表达的肿瘤活检和细胞学标本10,11。我们发现与 LDT 的高一致性与 “金标准” PD-L1 IHC 22C3 测定10,11。此临床验证的协议将支持全球范围内可靠、高质量的 PD-L1 测试。
Protocol
Representative Results
Discussion
我们通过与相应的临床验证的商业试验10、11进行比较, 验证了使用 22C3 PD-L1 抗体精矿进行优化的 LDT。22C3 集中抗体为基础的 LDT 在活检 (~ 100%) 和细胞学 (~ 95%) 标本之间的一致性高, 与 PD-L1 tps 和 IHC tps 切割点22C3 ≥1% 试验确定的 PD-L1 IHC 表达式比较。正如国际肺癌研究协会最近建议的那样, PD-L1 阳性区域应相同, 大约 10 PD-L1 阴性样本, 10 PD-L1 阳性样本, 20 个…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究由美国新泽西州凯尼尔沃思默克 & 公司赞助。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
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