Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Mit 22 3 Anti-PD-L1-Antikörper konzentrieren sich auf Biopsie und Zytologie Proben von Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs

10.4K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/58082

⸱

25. September 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Um die Fähigkeit des Labors weltweit, die Förderfähigkeit von Patienten mit Lungenkrebs Behandlung mit Pembrolizumab, auf eine zuverlässige und reproduzierbare Weise beurteilen zu erweitern, haben wir eine Probe, die das 22 3 Antikörper-Konzentrat auf eine weithin verfügbar verwendet entwickelt. immunhistochemische Autostainer, Biopsie und Zytologie Proben.

Zusammenfassung

Pembrolizumab-Monotherapie ist für die First- und Second-Line-Behandlung von Patienten mit PD-L1-mit dem Ausdruck ihrer fortgeschrittenen nicht-kleinzelligen-Lungenkrebs (NSCLC) zugelassen. Test für PD-L1-Ausdruck mit dem PD-L1 Immunhistochemie (IHC) 22 3 Begleiter diagnostischen Assay, wodurch einen Tumor-Anteil (TPS) Gäste, auf Tumorgewebe validiert wurde. Wir entwickelten einen optimierte Labor entwickelten Test (LDT), der 22 3 Antikörper (Ab) Konzentrat auf eine weithin verfügbar IHC Autostainer Biopsie und Zytologie Proben verwendet. Der PD-L1-TPS wurde mit 120 gekoppelten ganze Tumorgewebe Abschnitte und Biopsie Proben ausgewertet und gepaart mit 70 Biopsie und Zytologie Proben (bronchiale Waschungen, n = 40; pleural Ergüsse, n = 30). Die 22 3 Ab das Konzentrat-basierte LDT zeigte eine hohe Übereinstimmung zwischen Biopsie (~ 100 %) und Zytologie (~ 95 %) Exemplare im Vergleich zum PD-L1 IHC Ausdruck anhand der PD-L1 IHC 22 3 Begleiter Assay an beiden TPS Schnitt Punkte (≥1 %, ≥50 %). Die optimierte LDT das hier vorgestellte mit 22 3 Ab Konzentrat den PD-L1-Ausdruck in beiden Tumorgewebe und zytologische Proben bestimmen wird die Fähigkeit des Labors weltweit zur Bewertung der Förderfähigkeit von Patienten mit NSCLC für die Behandlung mit erweitern Pembrolizumab-Monotherapie in zuverlässig und reproduzierbar.

Einleitung

Neue klinische Studien belegen die Wirksamkeit von Pembrolizumab, ein humanisierter monoklonaler IgG4 Kappa Isotype Antikörper, die die Interaktion zwischen den programmierten Zelltod 1 (PD-1) blockiert und die Liganden, PD-L1 und PD-L2, bei der Behandlung von Patienten mit fortgeschrittenen NSCLC1,2,3,4.

Derzeit Pembrolizumab zur Behandlung von NSCLC PD-L1 mit dem Ausdruck in beiden Behandlung-naiven Patienten mit PD-L1 Ausdruck TPS ≥50 % und keine epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) oder anaplastische Ly....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

Alle Verfahren wurden von der lokalen Ethikkommission genehmigt (menschliche Forschungsethikkommission, Centre Hospitalier Universitaire de Nizza/Tumorothèque BB-0033-00025).

Hinweis: Dieses Protokoll ist speziell für den Einsatz von die 22 3 Antikörper konzentrieren sich auf eine kommerziell erhältliche automatisierte IHC Stainer (bezeichnet als Autostainer hier, die Tabelle der Materialiensehen) für Tumor Biopsien und zytologische Proben angepasst.

1. Vorbereitung des Tumorgewebes Proben

  1. Beheben von Tumorgewebe in 10 % neutral gepuffertem Formalin (NBF) in einer Kassette.
    Hinweis: ....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Mit dem Verfahren präsentiert hier und wie beschrieben im Detail in dieser Gruppe den letzten Veröffentlichungen10,11, wurde optimierte LDT klinisch mit 120 Archivierung FFPE NSCLC Biopsie Proben von Patienten validiert, die eine chirurgische Resektion oder eine Biopsie an der Universitätsklinik von Pasteur, Nizza, von März 2007 bis März 2016. Darüber hinaus wurde für die Bewertung der PD-L1 Ausdruck zytologische Proben, TPS in 70.......

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

Wir haben eine optimierte LDT mit den 22 3 PD-L1-Antikörper-Konzentrat, durch den Vergleich mit den entsprechenden klinisch validierte kommerziellen Test10,11validiert. Die 22 3 konzentriert Antikörper-basierten LDT zeigten eine hohe Übereinstimmung zwischen Biopsie (~ 100 %) und Zytologie (~ 95 %) Exemplare im Vergleich zu den PD-L1 IHC-Ausdruck mit Hilfe des PD-L1 IHC 22 3 Tests bei ≥1 % TPS und ≥50 % TPS Schnitt Punkte ermittelt. Wie vor kurzem empfohlen von d.......

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Diese Studie wurde unterstützt von Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Die Geldgeber spielte keine Rolle im Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung, zu veröffentlichen oder der Manuskripterstellung.

....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
NovaPrep HQ1NovacytNAKonservierungslösung für zytologische
Proben Novaprep® HQ+ BNovacytNAMukolytische Lösung
Tissue-Tek VIP 6Sakura6042 VIP 6
Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console SystemSakura5229 TEC 5
Mikroskop Glasobjektträger SuperFrost PlusThermo Fisher Scientific4951PLUS4
DL-Dithiothreitol PulverSigma-AldrichD3801
Heidolph Multi Reax Vortex ShakerThermo Fisher Scientific13-889-410
Shandon CytoblockThermo Fisher Scientific7401150
22C3 Anti-PD-L1 KonzentratAntikörper Agilent Dako#M365329
PD-L1 IHC 22C3 pharmDxAgilent DakoSK006
Autostainer Link 48Agilent DakoAS480
BenchMark ULTRA AutostainerVentana#750-600
OptiView HQ Universal LinkerVentana#760-700
OptiView HRP MultimerVentana#760-700
OptiView Amplification H2O2Ventana#760-099
OptiView AmplifierVentana#760-099
OptiView Amplifikation MultimerVentana#760-100
OptiView DABVentana#760-700
OptiView KupferVentana#760-700
Hämatoxylin IIVentana#790-2208
BläuereagenzVentana#760-2037
Zellkonditionierung 1 (CC1)Ventana#950-124
Tissue-Tek Film EindeckschuhSakura4742

Referenzen

  1. Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
  2. Herbst, R. S., et al.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Weitere Artikel entdecken

PD-L1-Immunhistochemie22C3-AntikörperkonzentratTumor Proportion ScoreBiopsie-ZytologieprobenIHC-Automaten-ProtokollProcessing von ZytologiepräparatenEinbetten von TumorgewebePD-L1-ExpressionsanalysePatientenauswahl für die Immuntherapie