Myelodysplastic सिंड्रोम की उत्पत्ति का आकलन करने के लिए टेम स्टेम कोशिका प्रत्यारोपण का उपयोग
Summary
हम आनुवंशिक रूप से इंजीनियर टेम कोशिकाओं की घातक क्षमता का आकलन करने के लिए टेम स्टेम सेल ट्रांसप्लांटेशन (HSCT) के उपयोग का वर्णन । HSCT vivo में विभिंन घातक टेम कोशिकाओं के मूल्यांकन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से myelodysplastic सिंड्रोम के साथ चूहों का एक बड़ा पलटन पैदा करने के लिए उपयोगी है (MDS) या के लिए उपंयास चिकित्सा का मूल्यांकन ल्यूकेमिया ।
Abstract
Myelodysplastic सिंड्रोम (MDS) टेम कोशिका विकारों कि अप्रभावी hematopoiesis, परिधीय रक्त cytopenias, dysplasia द्वारा परिभाषित कर रहे हैं, और तीव्र ल्यूकेमिया के लिए परिवर्तन के लिए एक प्रवृत्ति के एक विविध समूह हैं । NUP98-HOXD13 (NHD13) ट्रांसजेनिक चूहों परिधीय रक्त दोहराऊंगा, cytopenias, और तीव्र ल्यूकेमिया के लिए परिवर्तन के मामले में मानव MDS dysplasia । हम पहले से प्रदर्शन किया है कि mds mds अस्थि मज्जा nucleated कोशिकाओं (BMNC) के प्रत्यारोपण से जंगली प्रकार के प्राप्तकर्ताओं के लिए एमडीए के साथ एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस से स्थानांतरित हो सकता है । अधिक स्पष्ट रूप से मूल के MDS सेल समझने के लिए, हम विशिष्ट प्रत्यारोपण के दृष्टिकोण विकसित किया है, immunophenotypically टेम उपसमुच्चय परिभाषित. इस अनुच्छेद में, हम अलग और टेम स्टेम और जनक कोशिकाओं की विशिष्ट आबादी प्रत्यारोपण की प्रक्रिया का वर्णन । प्रत्यारोपण के बाद, हम प्रत्यारोपण और दाता MDS कोशिकाओं के हठ की दक्षता का आकलन करने के दृष्टिकोण का वर्णन ।
Introduction
Myelodysplastic सिंड्रोम (MDS) अप्रभावी hematopoiesis, dysplasia के सुघड़ सबूत, और तीव्र माइलॉयड ल्यूकेमिया (एएमएल)1,2 के लिए परिवर्तन के लिए एक प्रवृत्ति के द्वारा विशेषता क्लोनल रक्त विकारों के एक विविध सेट का प्रतिनिधित्व ,3,4. अप्रभावी hematopoiesis अस्थि मज्जा में एक परिपक्वता गिरफ्तारी के रूप में मांयता प्राप्त है, और परिधीय रक्त cytopenias में एक hypercellular अस्थि मज्जा1,3के बावजूद परिणाम । mds की घटना को विभिंन १००,००० प्रति वर्ष संयुक्त राज्य अमेरिका में व्यक्तियों के रूप में 2-12 मामलों के रूप में अनुमानित किया गया है, और mds की घटनाओं उंर के साथ बढ़ जाती है, यह एक महत्वपूर्ण शर्त बनाने के लिए उंर बढ़ने अमेरिका की आबादी3दिया समझ बना, 5. हालांकि mds के अधिकांश मामलों में कोई स्पष्ट एटियलजि है, mds के कुछ मामलों में ज्ञात genotoxic एजेंटों के लिए जोखिम के कारण होने लगा रहे हैं, जैसे बेंजीन, और कैंसर कीमोथेरेपी6के रूप में सॉल्वैंट्स सहित ।
mds रोगियों आमतौर पर mds कोशिकाओं7में उत्परिवर्तनों का अधिग्रहण किया है । हालांकि अपेक्षाकृत असामांय, MDS रोगियों की संख्या संतुलित गुणसूत्र जैसे NUP98, EVI1, RUNX1, और MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman) के रूप में जीन शामिल अनुवादन प्राप्त कर लिया है । हमारी प्रयोगशाला गुणसूत्र अनुवादन, जो NUP98 जीन8शामिल में एक लंबे समय से रुचि है । ट्रांसजेनिक चूहों कि एक NUP98-HOXD13 (NHD13) transgene प्रवर्तक और बढ़ाने के तत्वों द्वारा विनियमित Vav1 एक्सप्रेस MDS की प्रमुख विशेषताओं के सभी प्रदर्शित परिधीय रक्त cytopenias, सुघड़ के dysplasia सबूत, और परिवर्तन एएमएल 9 के लिए शामिल .
हालांकि mds ६० से अधिक वर्षों के लिए मांयता प्राप्त किया गया है10, और एक क्लोनिंग स्टेम सेल विकार माना जाता है, immunodeficient चूहों में मानव mds सेल engraft करने के प्रयास काफी हद तक असफल रहे हैं, क्योंकि mds कोशिकाओं engraft खराब11, 12,13,14 और चूहों में नैदानिक रोग का विकास नहीं होता है । एक जो टेम कोशिकाओं MDS संचारित कर सकते है की पहचान करने के प्रयास में, हम NHD13 मॉडल में बदल गया, और पता चला है कि हम एक रोग इकाई है कि मानव mds के कार्डिनल सुविधाओं के सभी दिखाया परिधीय रक्त cytopenias, dysplasia सहित, के रूप में engraft mds सकता है और परिवर्तन एएमएल15। इस रिपोर्ट में, हम इन प्रयोगों की तकनीकी जानकारी के साथ ही आगे fractionate टेम स्टेम और अग्रदूत कोशिकाओं (HSPC) के दृष्टिकोण, MDS-प्रारंभिक कोशिकाओं की पहचान करने के प्रयास में प्रस्तुत करते हैं ।
Protocol
Representative Results
Discussion
हालांकि mds एक क्लोन टेम स्टेम कोशिका विकार हैं, mds “स्टेम”, या कोशिकाओं की शुरुआत, अभी तक विशेषता नहीं किया गया है । हम पहले दिखा दिया है कि MDS WT चूहों NHD13 चूहों से HSCT द्वारा अस्थि मज्जा का उपयोग करने के लिए प्रत्?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस कार्य के लिए राष्ट्रीय कैंसर संस्थान, स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों (अनुदान संख्या जिया अनुसूचित जाति ०१०३७८ और बीसी ०१०९८३) के अंदर अनुसंधान कार्यक्रम का समर्थन किया गया.
Materials
| 14 mL round bottom tube | Falcon | 352057 | |
| Hank's balanced salt solution | Lonza | 10-527F | |
| Anti-CD45.2 antibody | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| 3 mL Syringe | Monoject | 8881513934 | |
| 27-G needle | BD | 305109 | |
| 20-G needle | BD | 305176 | |
| Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Anti-Biotin antibodies | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| 1 mL Syringe | Excelint | 26027 | Insulin Syringe |
| Heating Lamp | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
| FACS machine | Cytec | FACScan | 2 lasers, 5 color detectors |
| FACS sorting instrument | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously |
| Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Gamma Irradiator | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
| Blood collection tube | RAM scientific | 76011 | |
| Recipient mice | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 mice | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony maintained at NIH |
| 5 mL round bottom tube | Falcon | 352058 |
References
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