pT3N0M0 胃癌组织石蜡嵌入幻灯片上的弹性染色
Summary
在这里,我们提出了弹性染色方案,以识别pT3N0M0胃癌组织在形式固定,石蜡嵌入部分的弹性纤维。随后,我们描述了一种确定肿瘤细胞是否侵入弹性层压外的方法。
Abstract
弹性层状通常位于亚中上层,毗邻围肠中皮细胞,在血氧素和欧辛(H&E)染色上是两年期的,但可以通过弹性染色可视化。弹性染色的一个重要好处是,它很容易确定肿瘤细胞是否侵入了弹性层压。这有助于检查围膜表面入侵的程度,从而区分胃肠道癌的pT3和pT4阶段。在这项研究中,我们提出了一个协议,以识别在形式固定,石蜡嵌入pT3N0M0胃癌组织部分的弹性纤维。我们准备固定在幻灯片上的5μm石蜡部分,然后在染色过程中对所有幻灯片进行脱蜡和补水。随后,所有部分均被高锰酸钾氧化,由草酸漂白,被弹性染色染色,并反染范吉森。最后,我们考察了染色的效果;弹性层压是彩色蓝黑色和胶原纤维被染成红色,而癌细胞被染色在不同色调的黄色。我们还详细介绍了用于确定癌细胞和弹性层压作用关系的方法。该方法简单、成本低,因其对弹性纤维的选择性和真实效果,在胃肠癌的围膜表面入侵的鉴定中应用广泛。
Introduction
根据肿瘤、节点和转移(TNM)癌症分期系统,病理阶段pT4的胃癌预后明显比pT3(第8次UICC/AJCC)1的晚期差。与胃癌,原发性肿瘤(pT)的分类通常取决于肿瘤入侵的深度2。病理阶段 pT3 胃癌被定义为通过肌肉体侵入到亚血清组织中的癌症,而 pT4 胃癌被定义为渗透到内脏围气体的表面的癌症。围层表面侵入性的存在是区分两个阶段2的关键。然而,由于围肠间细胞层非常薄,在手术、术后治疗和固定3过程中可能会受损。此外,肿瘤相关的炎症变化和纤维化会损害围肠的正常解剖结构,因此很难仅使用H&E染色4准确判断围肠表面入侵。目前的辅助诊断方法,如细胞学和免疫组织化学,由于是假阳性或成本效益低,诊断价值有限。
血清膜包括围肠、胸膜和心包膜,由中皮膜、基底膜和亚中上层7组成。血清膜的一个常见组织学特征是,在亚中皮层中存在弹性层,与中上层细胞8、9相邻。弹性拉米纳具有很强的抗损伤能力,如果间皮细胞被严重的肿瘤相关炎症或纤维化3破坏,可以作为替代预后标记。弹性层压片主要由弹性蛋白和微纤维10组成,可以通过弹性染色进行可视化。弹性染色使用的主要原因是弹性素与弹性素溶液中的红素酚组形成氢键,导致弹性纤维被染成蓝黑色。在范吉森(VG)对比染色后,胶原纤维可以染成红色,肌肉纤维和红血球可以染黄色8,11,12,13。
肺癌的TNM分期第八版将内脏胸膜入侵(T2)定义为肿瘤入侵,超出弹性层膜或内脏胸膜2表面的入侵。对结肠直肠癌的研究表明,pT3结肠直肠癌的弹性层压瘤入侵可能是预后不佳的原因。大肠癌的5年无病和整体存活率也被证明像pT4a13,14,15。根据我们以前对弹性染色的研究,弹性拉米纳入侵对pT3胃癌的预后有显著的负面影响,应像pT4a胃癌12一样对待。因此,这种简单且经济高效的方法可以帮助消除通过H&E染色获得的结果的不确定性,以及与细胞学和免疫性化学在内的其他辅助诊断方法相关的其他常见限制。别人。该方法可有效地诊断胃肠癌的围膜表面入侵,特别是在一些模棱两可的情况下。它很方便,因为H&E污渍和其他污渍通常很难识别这种入侵。这种方法还确保了结果的可靠性,因为它非常有选择性,尤其是弹性纤维。在这里,我们进行弹性染色,以确定肿瘤细胞是否侵入了pT3N0M0胃癌12的弹性层压。
该方法用于识别形式固定、石蜡嵌入部分的组织中的弹性纤维,也可用于冷冻部分。在这里,我们选择石蜡嵌入部分,以最佳维护细胞和组织形态。此协议中的所有步骤都在室温下执行。一种商业染色试剂盒,包括高锰酸钾溶液、草酸溶液、艾莱他溶液和Van Gieson溶液。
Protocol
Representative Results
Discussion
这里提出的该方法为识别亚血清弹性层压提供了一种准确的方法。该方法可用于评估肿瘤细胞是否侵入了pT3N0M0胃癌12中的弹性层。弹性层压在H&E染色部分是红色的,很难与胶原纤维区分,其他现有的辅助诊断方法,如细胞学和免疫组织化学,也具有有限的诊断价值。在围肠灌溉液中发现肿瘤细胞并不一定表明原发性肿瘤存在血清入侵,这可能是由于淋巴结转移或其他遥远的转移5。<sup cl…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者部分感谢国家自然科学基金(NO.81401902和NO.81501992)和湖南省自然科学基金(NO.2017SK2134,NO.2018JJ2238)的支持。手稿由广磊撰写。整个实验由杨光磊和杨海燕进行。作者感谢病理学家和跟踪患者数据的研究员的帮助。
Materials
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
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