Parafin üzerinde elastik boyama-pT3N0M0 gastrik kanser dokusu gömülü slaytlar
Summary
Burada, pT3N0M0 gastrik kanser dokularındaki elastik liflerin formalin-fixed, parafin-Embedded bölümlerinde tespit edilmesi için elastik boyama Protokolü sunuyoruz. Daha sonra, tümör hücrelerinin elastik lamina ötesinde işgal olup olmadığını belirlemek için bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Genellikle alt-mezotelyal tabakada bulunan elastik lamina, periton mezotelyal hücrelerin bitişiğinde, hematoksinli ve eozin (H & E) boyama üzerinde amphiphilik ama elastik boyama ile görselleştirilebilir. Elastik boyama önemli yararlarından biri, tümör hücrelerinin elastik lamina ötesinde işgal olup olmadığını belirlemek için kolaylaştırır olmasıdır. Bu, periton yüzey istilasının kapsamını inceleyerek, gastrointestinal kanserde PT3 ve PT4 aşamalarını ayırt etmenize yardımcı olur. Bu çalışmada, formalin-sabit, parafin-gömülü pT3N0M0 gastrik kanser dokusu bölümlerinde elastik lifleri tanımlamak için bir protokol sunuyoruz. Slaytlar üzerinde sabit 5-μm parafin bölümler hazırlamak ve sonra tüm slaytlar deparaffinated ve boyama işlemi sırasında rehydrated. Daha sonra, tüm bölümler potasyum permanganat tarafından oksitlenir, oksisik asit tarafından ağartılmış, elastik boyama ile lekelenmiş, ve Van Gieson ‘s tarafından karşı. Son olarak, biz boyama etkisini incelemek; Elastik lamina lekelenmiş mavi-siyah ve kollajen lifleri kırmızı lekeli, kanser hücreleri sarı tonları değişen lekelenmiş iken. Ayrıca, kanser hücreleri ve elastik lamina arasındaki pozisyonel ilişkiyi belirlemek için kullanılan yöntemleri ayrıntılı olarak tarif ediyoruz. Bu yöntem basit, düşük maliyetli ve yaygın elastik lifler ve otantik sonuçlar için olağanüstü seçicilik nedeniyle gastrointestinal kanserde periton yüzey invazyonu tanımlanması için geçerlidir.
Introduction
Tümör, düğüm ve metastaz (TNM) kanseri evreleme sistemine göre, patolojik aşamada pT4 gastrik kanserinin prognoz, pT3 (8th UıCC/AJCC)1‘ de önemli ölçüde daha kötüdür. Mide kanseri ile, primer tümör sınıflandırılması (pT) genellikle tümör istilası derinliğine bağlıdır2. Patolojik aşama PT3 gastrik kanser muskularis propria aracılığıyla subserozal dokulara işgal kanser olarak tanımlanır, PT4 mide kanseri visserat peritonumun yüzeyine penetran kanser olarak tanımlanır ise. Periton yüzey invaziv varlığı iki aşama ayırt etmek için anahtar2. Ancak, periton mezotelyal hücre tabakası çok ince olduğu için, ameliyat sırasında hasar görmüş olabilir, postoperatif tedavi, ve fikşasyon3. Dahası, tümör ile ilgili inflamatuar değişiklikler ve fibrozis, periton yüzey istilasını sadece H & E boyama4‘ ü kullanarak doğru şekilde yargılamak çok zordur. Sitoloji ve immünhistokimya gibi mevcut yardımcı tanı yöntemleri, yanlış pozitif oldukları veya düşük maliyetli olması nedeniyle sınırlı teşhis değeri5,6 ‘ dir.
Serozal membran peritonum, plevra ve perikardium içerir ve mezothelium, bir Bodrum membran ve bir alt-Mesothelial katman7oluşur. Serozal membranın bir yaygın histolojik özelliği, mezotelyal hücrelerin bitişik alt-mezotelyal katmanda bir elastik lamina varlığı,8,9. Elastik lamina güçlü bir anti-zarar yeteneği vardır ve mezotelyal hücreler ciddi tümör ile ilgili inflamasyon veya fibrozis tarafından tahrip ise alternatif bir prognostik Marker olarak hizmet verebilir3. Elastik lamina özellikle elastin ve microfibril10, elastik boyama ile görselleştirilebilir oluşur. Elastinin elastin çözeltisi içinde rezorsinol fenolik grubu ile bir hidrojen bağı oluşturur elastik boyama kullanımı arkasındaki asıl nedeni, elastik liflerin mavi-siyah lekelenmesine neden. Van Gieson (VG) kontrast boyama sonra, kollajen lifleri kırmızı ve kas lifleri ve kırmızı kan hücreleri lekelenmiş olabilir sarı8,11,12,13leke olabilir.
Akciğer kanserinin TNM evreleme sekizinci baskısı viseral plevra invazyonu tanımlar (T2) elastik lamina ötesinde bir tümör istilası veya visseral plevra yüzeyinde bir işgali2. Kolorektal kanserle ilgili çalışmalar, pT3 kolorektal kanserinde elastik lamina istilasının kötü prognozların nedeni olabilir olduğunu göstermiştir. Kolorektal kanserin 5 yıllık hastalıksız ve genel hayatta kalma oranı da pT4a gibi olduğu kanıtlanmıştır. Elastik boya ile ilgili önceki çalışmalarımız temelinde, Elastic lamina istilası, pT3 gastrik kanserinin prognoz üzerinde önemli bir olumsuz etkiye sahip olduğu bulunmuştur ve pT4a mide kanseri12ile aynı şekilde tedavi edilmelidir. Bu nedenle, bu basit ve uygun maliyetli Yöntem, H & E boyama ile elde edilen sonuçlarda belirsizlikleri ortadan kaldırmasına ve sitoloji ve immünhistokimya da dahil olmak üzere diğer yardımcı tanı yöntemleriyle ilişkili diğer ortak sınırlamalara yardımcı olabilir, Diğer. Bu yöntem, özellikle bazı belirsiz durumlarda, gastrointestinal kanser periton yüzey istilaları teşhis etmek için verimli bir şekilde kullanılabilir. H & E leke ve diğer lekeleri genellikle zor bu tür istilaları tanımlamak için yapmak beri uygundur. Bu yöntem, özellikle elastik liflerin çok seçici olduğundan, sonuçların güvenilirliğini de sağlar. Burada, biz tümör hücrelerinin pT3N0M0 mide kanseri12elastik lamina işgal olup olmadığını belirlemek için elastik boyama yapmak.
Bu yöntem, formalin-sabit, parafin-gömülü bölümlerde dokularda elastik lifler tanımlamak için kullanılır ve dondurulmuş bölümler için de kullanılabilir. Burada, hücresel ve doku morfolojisi için en iyi bakım için parafin-gömülü bölümler seçiyoruz. Bu protokoldeki tüm adımlar oda sıcaklığında gerçekleşir. Sunulan çalışmada potasyum permanganat çözeltisi, okalik asit çözeltisi, elastin çözeltisi ve Van Gieson çözeltisi içeren ticari boyama kiti kullanılmaktadır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada önerilen bu yöntem, subserozal elastik lamina tanımlamak için doğru bir yaklaşım sağlar. Yöntem tümör hücrelerinin pT3N0M0 mide kanseri12elastik lamina işgal olup olmadığını değerlendirmek için kullanılabilir. Elastik lamina H & E-lekelenmiş bölümlerde kırmızımsı olup, kollajen liflerinden kolayca ayırt edilemedi, ve sitoloji ve immünhistokimya gibi mevcut diğer yardımcı tanı yöntemleri de sınırlı tanı değerini uygular. Periton sulama sıvısında tüm…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Ulusal Doğal Bilim Vakfı (NO. 81401902 ve NO. 81501992) ve Hunan doğal Bilim Vakfı (NO. 2017SK2134, NO. 2018JJ2238) kısmen destek teşekkür ederiz. El yazması Guang Lei tarafından yazılmıştır. Tüm deney Guang Lei ve Haiyan Yang tarafından gerçekleştirilir. Yazarlar, patologlar ve hastaların verilerini takip eden arkadaşlarının yardımını teşekkür eder.
Materials
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
References
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. . AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , (2017).
- Kojima, M., et al. Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features. Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).
- Ludeman, L., Shepherd, N. A. Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance. Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation. Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).
- Liang, W. Y. Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers. American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).
- Carter, D., True, L., Otis, C. N., Mills, S. E. Serosal membranes. Histology for Pathologists. 3rd ed. , 547-562 (2007).
- Knudsen, P. J. The peritoneal elastic lamina. Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer. Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).
- Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin–a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa. Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).
- Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology. Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).
- Lei, G., et al. Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer. Human Pathology. 65, 79-84 (2017).
- Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert’s resorcin-fuchsin. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).
- Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship. American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).
- Nakanishi, Y., et al. Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).
- Grin, A., et al. Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer. Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).
- Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours. Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).
- Kojima, M., et al. Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum. Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).
- Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia. Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).
- Vos, A., et al. Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery. Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).
