Summary
Этот протокол представляет в vivo крысы модель клей капсулит. Модель включает в себя внутренней фиксации плечевого совместного с креплением экстра суставной шов на длительное время, что приводит к снижению вращения диапазон движения (ROM) и увеличение тугоподвижность.
Abstract
Это предложение направлено для создания в vivo крысы модель клей капсулит для изучения возможных вариантов лечения этого состояния и других этиологий сопоставимых arthrofibrosis. Модель включает в себя экстра суставной фиксации плеча в крыс через наплечник для плечевых швов, обусловило вторичных контрактуры без вторжения внутрисуставных пространства и приводит к снижению вращения ROM и расширение совместных жесткость.
Мы использовали 10 крысах Sprague-Dawley, для целей настоящего исследования. Базовые ROM измерения были взяты перед иммобилизации плечевого. Крысы были подвергнуты 8 недель иммобилизации до фиксации швы были удалены, и были оценены изменения в ПЗУ и тугоподвижность. Чтобы оценить ли иммобилизации привели к значительному сокращению в ПЗУ, были рассчитаны изменения в кинематике. ROM был измерен в каждый момент времени в последующий период и был по сравнению с базовой внутренней и внешней ROM измерений. Для того чтобы оценить жесткость, совместные кинетики были рассчитаны путем определения различий в крутящий момент (tдоб и tint ), необходимых для достижения первоначальных наружного поворота 60 ° и первоначальный внутреннее вращение 80 °.
После удаления экстра суставной шовные фиксации на последующий день 0 мы нашли 63% снижение в целом ROM, по сравнению с базовой. Мы наблюдали непрерывное улучшение до недели 5 последующей деятельности, с прогрессом, замедление вокруг 19% ограничение. На неделе 8 последующей деятельности по-прежнему существует 18% ограничение ROM. Дополнительно, на последующий день 0, мы нашли крутящий момент вырос на 13,3 НММ по сравнению с базовой. На неделе 8, Общая крутящий момент был измерен 1.4 ± 0,2 Nmm выше чем первоначальные измерения. Эта работа представляет крысы модель клей капсулит плеча с lasting уменьшение ROM и увеличенная жесткость.
Introduction
Адгезивные капсулит плеча часто называют замороженное плечо или плечо контрактуры. Он характеризуется ограниченным плечелопаточного движения и боль, предположительно в результате передовые фиброз и совместных контрактуры1,2,3. Условие предполагает набора клеток фибробластов и Миофибробласт с результирующей плотной коллагеновой матрицы (типов I и III) в совместное капсулы2,3. Существует множество возможных факторов риска для разработки совместного контрактуры, включая пол, сахарный диабет, гипертиреоз, травмы и длительной иммобилизации4,5,6.
Эффективные методы лечения хватает и главным образом включают физической терапии, с вмешательством в виде хирургического релиза в крайних случаях, которые не улучшились с консервативной ухода. Лучший метод лечения остается неопределенным и является предметом большой интерес для лет в медицинской области7,,8. Развитие новых терапевтических возможностей потребует воспроизводимые модели на животных для условия, которые не полагаются на внутрисуставных индуцированные травма. Оптимальное клей капсулит модель должна включать две основные характеристики заболевания: Контрактура капсулы плеча и длительное сокращение диапазон движения (ROM). Schollmeier и др. 9 описал один из первых моделей совместного контрактуры, используя приведение разрабатывать контрактуры плечевого в клыки. Они сообщили также, что изменения в ПЗУ и внутрисуставных давления вернулся к нормальному после прекращения иммобилизации9. Однако важным ограничением, упомянутых в исследовании это различия в положении конечности между животных из-за использования метода cast. Для получения более воспроизводимые модели, Канно и др. 10 позднее представил модель крыса клей капсулит, с помощью жесткой внутренней фиксации плеча. Однако хотя они добились значительного сокращения в ПЗУ с их моделью, они не указывали ли эти изменения были временными или надолго. Целью нашего исследования было создание подходящей в vivo плечо контрактуры мышиной модели исследуя влияние продолжительной экстра суставной плечелопаточного совместных иммобилизации на ROM и тугоподвижность.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Исследование было одобрено институциональный уход животных и использования Комитетом на Beth Израиля Deaconess медицинский центр. Чтобы избежать ненужных длительной анестезии, а также избегать переохлаждения были приняты меры. Животных были взвешены на каждой сессии ROM измерения и мониторинг для потери веса.
1. изучение предметов
- Использование 10 крысах Sprague-Dawley, которые 13 недель во время хирургии и что диапазон между 250-300 г веса тела.
2. хирургическая процедура
- Под наркозом и до хирургической иммобилизации, измерить крутящий момент базовой в зависимости от угла поворота между 60° внешнего вращения и 80° внутреннего вращения (см. шаг 5).
-
Побудить анестезии с 5% изофлюрановая через вдыхание в камеру индукции и затем поддерживать с 2% изофлюрановая через носовой конус всей операции.
- Использование водной основе нагревательный элемент под животное для поддержания температуры тела во время анестезии.
- Для целей контроля боли управлять устойчивым релиз бупренорфин подкожно в дозе 1,2 мг/кг в зависимости от веса тела крыс.
-
Обездвиживания левого плечевого суставов под углом 60 ° похищения (угол между плечевой вал и верхней частью лопаточного позвоночника)10 , 11.
- Начало хирургической процедуры с задний продольный разрез, параллельно плечевой вала. Сделать разрез чуть ниже плечелопаточного совместных и продлить на около 3 см.
- Использовать 2 швы (Плетеный полиэстер) для иммобилизации плечевого сустава, пирсинг через боковые края лопатки и вокруг дистальной две трети плечевых вала и затем затяните как показано на рисунке 1A. Предпринять дополнительные усилия, чтобы избежать сжимает критические структуры, такие как плечевой артерии.
Примечание: Хирургическая техника имеет преимущество возможность ограничить плечевого сустава в 60° похищения (Z), не затрагивая другие планы (X и Y). Размещая швов вокруг плеча и через боковые границы лопатки, приближение двух структур достигается и поддерживается на плоскости лопаточный лезвия. После ужесточения швы, руки фиксируется в положении покоя при рассмотрении X и Y плоскости и на 60° похищения когда Z плоскости рассматривается. Это считается ограничить изменчивость между животными, которые могут быть получены от провала тонкой настройки совместной позиции в трех планов.
3. закрытие разрез
- После надлежащего гемостаз закройте разрез кожи с помощью кожи клипов.
- Прекратите анестезии и позволяют животное, чтобы восстановить под наблюдением в теплой среде. После животное приходит в сознание достаточно для поддержания грудной recumbency, вернуть его обратно в своей клетке.
- Сразу же после процедуры позволяют животных, чтобы вернуться к нормальной деятельности. Разрешить животных для перемещения без ограничений, полагаясь преимущественно на внутренние швы исправить плечевого сустава.
- Следить за возможной инфекции, осмотрите разрез сайтов ежедневно в течение первой недели послеоперационные.
- Удалите клипы рану на 10-е сутки после операции.
Примечание: Существует не манипулирования мышц во время процедуры, и техника не связаны с любой внутрисуставных травмы, таким образом, сохраняя капсульные и суставной преемственность и анатомической целостности. Ни внешних удержать ни деятельность ограничение последовал в наш протокол. - Предоставить обезболивание с помощью устойчивой релиз бупренорфина, вводят подкожно в дозе 1,2 мг/кг, начиная индукции анестезии и повторяются каждые 72 ч при необходимости.
4. шов удаления 8 недель после иммобилизации
- Побудить анестезии с 5% изофлюрановая через вдыхание в камеру индукции, а затем с изофлюрановая 2% через носовой конус всей операции. Для целей контроля боли управлять устойчивым релиз бупренорфин подкожно в дозе 1,2 мг/кг в зависимости от веса тела крыс.
- Сделайте надрез на вершине шрам от предыдущей процедуры.
- Вырезать швы и удалить из плеча и лопатки.
- Закройте разрез с раной клипов.
- Изучить сайт разрез ежедневно в течение первой недели для выявления каких-либо признаков инфекции. Контролировать боль и страдания как хорошо.
- Удалите клипы рану на 10-е сутки после операции.
5. диапазон движения и тугоподвижность измерения
-
Измерьте механики ROM и пассивной плеча до и после иммобилизации, с помощью заказной устройство, состоящее из руки зажим, датчик Ассамблеи и поворотная ось11. Это проводится предоперационная (базовой) и непрерывно после удаления швов.
- Мера ROM сразу же после удаления швов (последующие день 0) и впоследствии дважды в неделю.
- Уменьшите размеры менять раз в неделю, после записи менее 10% от предыдущей точки время.
Примечание: После тестирования ROM для недели, ROM каждого животного не изменился кардинально между тестирования моменты времени (менее 10% изменить). ROM, как представляется, на данный момент плато, таким образом, мы чувствовали, что снижение тестирования частоты от дважды в неделю раз в неделю вполне достаточно.
- Проводить измерения под наркозом с использованием изофлюрановая через испаритель точности в 5% для индукции и 2% для обслуживания по всей длине процедуры (примерно 5 минут), для того, чтобы эффективно содействовать измерений. Использование водной основе нагревательный элемент под животное для поддержания температуры тела во время анестезии.
- Позиция животное правильно для ПЗУ измерения с помощью лазера руководства. Положение передних конечностей на зажим рукой вперед сгибание 90°, с осью зондирования в соответствие с длинной оси плеча. Закрепите передних конечностей, запястья и локоть, как показано на рисунке 1B.
- Контроль вращения пассивной передних конечностей шаговый мотор для оценки ROM и крутящий момент последовательным образом. Управление шаговым двигателем с микроконтроллером. Использование материалов от инклинометра, в сочетании с теми из датчик крутящего момента для обозначения начала и конца измерений.
- Подключите к компьютеру и управления с помощью собственных развитых MATLAB код микроконтроллера.
- Для исходных измерений только, цикла Ассамблеи датчик 3 раза между 60° внешнего вращения и 80° внутреннего вращения для получения начальный крутящий момент измерений (внешние: tдоб и внутренние: tint) для последующего сравнения.
- Для ПЗУ измерений используйте значения крутящего момента каждого животного на свои собственные базовые измерения (tдоб и tint) как заданных входных переменных в программе для обнаружения изменений в ротации, Римлянам использовать базовые измерения как сравнительный остановки точка для последующих измерений ПЗУ. Изменения были обнаружены с разрешением 0,2 °.
- Для измерения жесткости используйте оригинальные углы поворота наружного поворота 60° и 80° внутреннее вращение как пресет ввода в программе с целью обнаружения изменения крутящего момента. Изменения были обнаружены с разрешением 0,01 Nmm.
- Вес животных в тот же день, как каждый ROM оценки. Поместите животных на весы и записывать их массы. Эти данные были использованы как один из инструментов для оценки состояния здоровья животных во время исследования.
- После восстановления вернуть их клетках крыс и контролировать на наличие признаков боли или страданий. На протяжении тестирования, не животное присмотра до тех пор, пока он сознание достаточно для поддержания грудной recumbency.
Примечание: ROM и крутящий момент измерения были достигнуты с заказной устройством, ранее сообщили нашей группой {Вилла-Камачо 2015}. Устройство является заказное кондуктор, который состоит из вала повернут на шаговый двигатель и контролируется с помощью пользовательского сценария, MATLAB. Датчик крутящего момента и Блок инерционных измерения используются для захвата крутящий момент и позиции данных во время разработки образца.
6. Посмертные Immunohistologic анализ
- В конце 8-недельного ROM измерения периода усыпить крыс с CO2 экспозиции.
- Вскрыть оба слева (прикол) и правый (здорового управления) плечи disarticulating плечевой кости из локтевой кости, а также секционирование лопатки от ключицы и грудной полости.
- Исправить подакцизным плечи в растворе нейтрального буферизации формалина 10% в течение 3 дней, следуют декальцинации в растворе Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) 10% при рН 7,4 еще 2 месяца.
- В ходе этого процесса Поместите образцы на шейкер в цикле нежный агитации и хранить при 4 ° C. Следить за декальцинации плечелопаточного совместного с неделю microcomputed томография (uCT) сканирует.
Примечание: EDTA — хелатирующий агент, который связывает ионы кальция от внешней поверхности кристалл апатита, постепенно сократить кристалл размер12,,1314. Этот процесс является очень медленным и нежные, и она используется для выявления конкретных тканевых элементов, которые должны быть сохранены для методов, таких как иммуногистохимия (IHC). Скорость, с которой ЭДТА decalcifies образца зависит от pH и концентрации раствора. С точки зрения рН она может варьироваться от 7 до 7,4, с более щелочных растворов, ускоряя скорость декальцинации. Однако решения с более высоким уровнем рН может повредить ткани ключевые элементы. Кроме того обычной концентрации ЭДТА для таких экспериментов лежит от 10% до 14%, но это очень важно помнить, что активный агент становится исчерпаны после его облигаций кальция, поэтому для этого требуется замена жидкости декальцинации по крайней мере 3-4 раза за неделю15. - После того, как был завершен процесс декальцинации, смонтируйте плечевого суставов в парафин стеки для гистологической секционирование. Ориент образцы для корональные срезы. Ломтики полученные на глубине 50% плечевой головки (в центре, середина coronally) показано на рисунке 1. Выполните иммуногистохимическое окрашивание с помощью метода пероксидаза анти пероксидаза для обозначения присутствие фиброзных тканей в суставе. 4 , 9 , 10 , 16
- Выполнения извлечения антигена в микроволновом, погрузив слайды в пластиковых опарник Coplin в буферный раствор цитрата натрия (цитрат натрия 10 мм, 0,05% 20 анимации, pH 6.0, прогревается в течение 5 мин при температуре 95-100 ° C) и размещение в очередной Микроволновая печь 10 минут на средней мощности. Разрешить слайды остыть в течение 30 мин при комнатной температуре.
- Выполнять блокирование с козу сыворотка для 30 минут и Проинкубируйте образцы с первичной мыши моно клоновых антитела (разбавления 1: 400) фибронектин на ночь при 4 ° C.
- После инкубации с основного антитела, стирать образцы дважды с PBS (0,5 мкг/мл) на 10 минут; и проинкубируйте с вторичное антитело, коза antimouse IgG пероксидаза конъюгата (разбавления 1: 400) для 30 минут.
- Стирать образцы дважды с PBS (2,5 мкг/мл) на шейкер для 10 минут и подвергать 3,30-Диаминобензидин тетрагидро хлорида и 30% перекиси водорода в темноте за 10 мин изображение с Carazzi гематоксилином.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Диапазон движения
На последующий день 0, мы нашли 63% снижение в целом ROM, по сравнению с базовой (P <.001). Мы наблюдали постепенное улучшение ПЗУ до недели 5 последующих мер, когда прогрессии остановился на 19% ограничение (P < 0,001). Остальные ограничения, 18% всего ROM, по-прежнему проявляется на 8 недель последующих (P < 0,001).
Жесткость
На последующий день 0, мы обнаружили увеличение 13.3 Nmm в целом крутящий момент по сравнению с базовым уровнем (P < 0,001); 8.9 Nmm внешне (P =.002) и 4.4 Nmm внутренне (P < 0,001), в результате 138,8% увеличение внешних крутящий, 159.6% увеличение внутренней ротации крутящий момент и в общей сложности 149,2% увеличился крутящий момент в целом. На неделе 8 последующей деятельности, мы нашли всего измеренного крутящего момента 1.4 ± 0,2 Nmm выше базовых (P = 0.115), с увеличением Nmm 0,6 ± 0,1 внешних крутящего момента (P = 0.369) и 0,7 ± 0,2 Nmm увеличение внутреннего крутящего момента (P = 0,036). Это означает, что крутящий момент увеличивается 10% внешне и 25,7% внутренне, для общего увеличения 17,9%. В начале 3 послеоперационных недели, повышения жесткости перестала расти.
Гистологические результаты
Как видно на рисунке 2A, нетронутыми группа отображается надлежащее разделение между капсулой и суставной поверхности головки бедренной кости и нормальной клеточной организации. Кроме того нормальной клеточной организации наблюдалось также в синовиальной ткани и суставного хряща. Однако хирургически иммобилизованных группы свидетельствует капсульной спаек в нижней аспект плечелопаточного совместных. Кроме того окружающие ткани, по-видимому, более плотный, когда по сравнению с нетронутыми плечи, приводит к более жесткие капсулы с снижение суставной щели (рис. 2B). Ломтики, витражи для фибронектин показывают увеличение капсульной толщины в группе контракт хирургические (рис. 2B). по сравнению с здорового управления (рис. 2A). Эти выводы согласуются с ранее сообщалось литературы на животных моделях Объединенного иммобилизации10 и поддержать создание модели надлежащего контрактуры.
Рисунок 1: тестирование аппарат. (A) иммобилизации плечевого сустава с 2 плетеные полиэфирные швы, твердо передается между боковым краем лопаточной и плечевой кости; (B) индивидуальные прибор для измерения ROM и пассивной плечо механики; ) монитор степпера. Датчик Ассамблея, состоящая из b) датчик крутящего момента реакции и c) датчик ориентации. d зажим рукой. Internal (C) и (D) внешнее вращение плечелопаточного совместных11. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: корональные срезы плечевой головки. Изображение витражи для фибронектина (IHC), полученные на 40 кратном. Шкалы бар = 200 µm. (A) здорового контроля. (B) хирургическое управления. Красные стрелки изложить капсульной толщина шва. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: диапазон движения против нормализованных крутящий момент для обоих здоровым и хирургическим путем ограничения крыса плечевого суставов. Внутреннее вращение обозначается как позитивные, внешние вращение является отрицательным. Затененные области показывает, 95% доверительный интервал (ди). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Это исследование представляет модель крыса клей капсулит плеча через внутренней фиксации плечевого сустава. Кроме того он показывает расширенный сокращения общего ПЗУ для по крайней мере в 8 недель после удаления фиксации. Для того чтобы рассчитать изменения в ПЗУ в разное время точках, измерения были по сравнению с животных конкретных базовых показателей. И наоборот, Канно и др. 10 использовали стандартизированные крутящий момент для всех животных, чтобы определить ex vivo ROM изменения.
В 2008 году Сарвер и др. 17 сообщили о тугоподвижность результате нехирургических внешней фиксации плеча. Их исследование показало преходящее повышение в тугоподвижность после иммобилизации ранения и лечение плеч, который был решен на неделю 8 последующей деятельности. Тем не менее в настоящем исследовании, мы не нашли линейную связь между крутящий момент и угол, а многочлен подходят (рис. 3). Кроме того мы нашли только статистически значимой разницы в тугоподвижность, по сравнению с базовой линии во время оценки внутренней ротации, где 25,7%, увеличение жесткости сохраняется после 8 недель иммобилизации.
Мы использовали базовые ROM и жесткость измерения для каждого животного в качестве их собственного внутреннего контроля. Учитывая возможные различия между животных18, используя контралатеральной плечо же животных в качестве внутреннего контроля повышается внутренняя валидность и помогает уменьшить количество животных, требуется.
Одним из ограничений нашего исследования является, что аппарат используется для измерения ROM не стабилизировать лопатки. Однако крыса в лопатки косо более ориентирован с даже более вверх вращение, чем в организме человека. Имея крыс в лежачем положении должны теоретически контроль для лопаточный опрокидывания как лопатки упирается в твердой плитой тестирования джиг. Еще одно ограничение исследования является, что мы только оценить внутреннее вращение и внешней вращение плечелопаточного совместных. Это отчасти тем, что похищения, сгибания и накладные деятельности требуют тщательного внешней фиксации или ограничение scapulothoracic совместных во время тестирования ROM, который требует различные системы, чем наша.
Патогенез и лечение клей капсулит по-прежнему неадекватно понимать. Независимо от этиологии было показано, что это Контрактура капсулы, которая вызывает боль и ограничивает плечелопаточного движения1,3,11. Кроме того было высказано предположение о том, что есть воспалительные триггеры, которые приводят к совместной фиброз, вызывая тем самым контрактуры10. Хотя наши крысы модель не может имитировать первоначальный воспалительных оскорбление первичного контрактуры, тем не менее, он адекватно реплицирует характерные кинетика клей капсулит и его патологических изменений10,19. Эта модель вызывает прочное сокращение ROM и увеличение тугоподвижность, позволяя для всеобъемлющей оценки текущих и потенциальных терапевтических процедур для плеча контрактуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет
Acknowledgments
Авторы хотели бы признать г-н и миссис том и Филлис Froeschle за оказание финансовой поддержки на этот проект.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories, Wilmington, MA, USA | 250-300 g | |
| Surgical tool: | |||
| Injection needle | BD 1' 30 guage | ||
| Needle holder | |||
| 5% isoflurane | |||
| 2% isoflurane | |||
| Nose cone | |||
| Skalpel and skalpel holder | No. 11 scalpel | ||
| Curved hemostat forceps | |||
| Staright hemostat forceps | |||
| Tissue retractor | |||
| Toothed tissue forceps | |||
| Plain tissue forceps | |||
| Dissecting scissors | |||
| Suture scissors | |||
| Skin clip applicator | Any standard staples for wound closure | ||
| Immobilization material | Ethicon | No. 2-0 braided polyester ethibond suture was used for immobilization | |
| Other materials: | |||
| Costumized device for ROM: 1)Sensor assembly, 2)pivoting axle, 3)arm clamp | Assembly that is described in relaxin paper and adhesive capsulitis paper | ||
| Orientation sensor (part of sensor assembly) | MicroStrain Inc., Williston, VT, USA | 3DM-GX3-15 | |
| Reaction torque sensor (part of sensor assembly) | Futek Inc., Irvine, CA, USA | TFF400 | |
| Stepper Motor | SparkFun Electronics, Niwot, CO 80503 | https://www.sparkfun.com/products/13656 | |
| Microcontroller | Torino, Italy). | Arduino UNO, R3 | |
| MATLAB code | MATLAB 7.13.0.564, Natick, Ma, USA | ||
| Weight Scale | Ohaus |
References
- Bunker, T. D. Time for a new name for 'frozen shoulder'. British medical journal. 290 (6477), 1233-1234 (1985).
- Bunker, T. D., Anthony, P. P. The pathology of frozen shoulder. A Dupuytren-like disease. The Journal of bone and joint surgery. British volume. 77 (5), 677-683 (1995).
- Kilian, O., et al. The frozen shoulder. Arthroscopy, histological findings and transmission electron microscopy imaging. Chirurg. 72 (11), 1303-1308 (2001).
- Wang, K., et al. Risk factors in idiopathic adhesive capsulitis: a case control study. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 22 (7), e24-e29 (2013).
- Milgrom, C., et al. Risk factors for idiopathic frozen shoulder. The Israel Medical Association Journal. 10 (5), 361-364 (2008).
- Huang, S. W., et al. Hyperthyroidism is a risk factor for developing adhesive capsulitis of the shoulder: a nationwide longitudinal population-based study. Scientific Reports. 4, 4183 (2014).
- Struyf, F., Meeus, M. Current evidence on physical therapy in patients with adhesive capsulitis: what are we missing. Clinical Rheumatology. 33 (5), 593-600 (2014).
- Song, A., Higgins, L. D., Newman, J., Jain, N. B. Glenohumeral corticosteroid injections in adhesive capsulitis: a systematic search and review. Journal Of Physical Medicine And Rehabilitation. 6 (12), 1143-1156 (2014).
- Schollmeier, G., Sarkar, K., Fukuhara, K., Uhthoff, H. K. Structural and functional changes in the canine shoulder after cessation of immobilization. Clinical Orthopaedics and Related Research. 323 (323), 310-315 (1996).
- Kanno, A., Sano, H., Itoi, E. Development of a shoulder contracture model in rats. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 19 (5), 700-708 (2010).
- Villa-Camacho, J. C., et al. In vivo kinetic evaluation of an adhesive capsulitis model in rats. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 24 (11), 1809-1816 (2015).
- Liu, H., et al. Evaluation of Decalcification Techniques for Rat Femurs Using HE and Immunohistochemical Staining. BioMed Research International. 2017, 9050754 (2017).
- Gonzalez-Chavez, S. A., Pacheco-Tena, C., Macias-Vazquez, C. E., Luevano-Flores, E. Assessment of different decalcifying protocols on Osteopontin and Osteocalcin immunostaining in whole bone specimens of arthritis rat model by confocal immunofluorescence. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (10), 1972-1983 (2013).
- Sanjai, K., et al. Evaluation and comparison of decalcification agents on the human teeth. Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 16 (2), 222-227 (2012).
- Rolls, G. An Introduction to Decalcification. , (2013).
- Burry, R. W. Controls for immunocytochemistry: an update. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 59 (1), 6-12 (2011).
- Sarver, J. J., et al. After rotator cuff repair, stiffness--but not the loss in range of motion--increased transiently for immobilized shoulders in a rat model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 17 (1 Suppl), 108S-113S (2008).
- Macbride, M. Variations within Outbred Strains: Know Your Strains and Stocks | Taconic Biosciences. , Available from: https://www.taconic.com/taconic-insights/quality/variations-within-outbred-strains-know-your-strains-and-stocks.html (2016).
- Liu, Y. L., Ao, Y. F., Cui, G. Q., Zhu, J. X. Changes of histology and capsular collagen in a rat shoulder immobilization model. Chinese Medical Journal. 124 (23), 3939-3944 (2011).
