雄性小鼠性行为评估
Summary
本文介绍如何在雄性小鼠身上进行性行为测试。
Abstract
性行为是高度物种特异性。虽然啮齿动物的性行为略有不同，但老鼠有相似的性行为模式。本文旨在描述激素引起的雌性细胞化女性模型和雄性小鼠性行为评估的实验程序。最重要的性行为元素在视频和插图中得到证明。还解释了性行为测试的关键步骤、优点和局限性。最后，给出了行为参数，并区分了交配中的安装、内向和射精过程。行为参数根据在测试期间发生的持续时间和计数进行评估。
Introduction
成熟雄性小鼠的性行为是不同大脑回路中一系列相关和相互依存的荷尔蒙系统和神经系统相互作用的结果1。它还需要发展经验、学习、背景和适当的合作伙伴。行为分析是神经或神经神经功能的重要反映。因此，动物模型的性行为研究已广泛应用于行为神经科学等相关研究中。啮齿动物性行为的类表已被许多文章和书籍1，3，4解释。例如，斯卡斯和巴菲尔德对大鼠5的性行为的描述帮助理解了小鼠5的类似行为模式。鼠标是行为研究最常用的主题之一。赫尔等人对雄性小鼠的性行为进行了详细的介绍：当雄性小鼠遇到雌性时，它开始调查雌性小鼠的生殖器区域。然后，男性按前爪对女性的侧翼，从后方安装女性。女性表现出典型的性接受姿势，将脊柱弯曲成弓，将尾巴移到身体的一侧，露出男性性渗透的开口（即领口）。安装后，男性进行快速、浅骨盆推力，然后进行缓慢而深的阴道推力。经过无数次的接种，一个持久的推力导致精液射精，在此期间，雄性小鼠可以冻结约25s之前，从雌性6。在射精时，雄性小鼠附属腺可产生含有精液的混合物，这种混合物会硬化成刺激塞。最后，射精后，男性开始生殖器梳理，并表现出对女性缺乏兴趣。简而言之，男性性行为的基本顺序包括嗅探、跟踪、安装、内化、射精和射精后梳理。老鼠性行为表现出应变差异。例如，射精延迟从594到6943s不等，入院人数从5个到100个以上不等。射精后延迟范围从17至60分钟。然而，引入一个新颖的女性可以减少这个时间间隔。在某些情况下，男性射精在第一次介绍与新的女性7。
评估性行为的主要事件是增加、介绍和射精。行为科学家建议不仅测量每个动作的频率，而且测量其延迟和时间间隔5，8。过去研究中的一些主要测量指标包括：安装次数、入院次数、安装延迟、延迟、射精延迟、射电后安装延迟（或接种后间隔）、按摩后住院延迟、共支系列数和共支序列的持续时间。Park等人8和Sachs等人5描述了如何识别啮齿动物的安装、介绍和射精的每个作用。安装的定义是男性从后方安装女性，用前腿拍打她的侧翼，并快速和反复地推力他的阴茎，没有阴茎插入。内省，也称为插入，由以下一种或多种行为确定：快速浅推力后长而深的推力，一个后腿的快速踢，以及男性从女性明显横向退出。射精由一个终端骨盆推力识别，比内向和后腿高程减少的速度慢、更深。从安装到射精的每个序列都确定了共支序列。本研究中使用的行为参数定义如下：1）安装延迟：从引入女性到首次安装男性的时间;2）介绍延迟：从引入女性到第一次介绍的时间;3）射精延迟：从第一次接种到第一次射精的时间（一般遵循最后骨盆推力）;4）射精后安装延迟：从射精到下一次安装的时间;5） 射精后介绍延迟：从射精到下一次的接种时间;6）安装次数：首次射精前的安装时间数;7）入院次数：第一次射精前的介绍次数;8）共合系列的数量：观察期间共合序列的数量;9）共合序列的持续时间：观察期间所有共合序列的时间。
性行为和相关行为可以在男性的家庭笼子或封闭的竞技场进行，其中介绍一种叫做里斯曼的”无秘密”镜盒的装置来观察交配行为3。摄像机放置在盒子前面，以同时记录从横向视图和从心室视图的倾斜镜镜中小鼠的动作。然而，这种方法需要明亮的灯光，这不可避免地导致更长的居住时间，以消除小鼠的环境压力。在测量方法方面，建议对基于视频的行为进行分析，以记录和量化行为4。具有逐帧视频前进选项、建议快门速度大于 1/1000 s 的录像机可用于记录鼠标的快速移动。在黑暗的环境中录制时，高分辨率红外摄像机是必需的。要分析胶片，需要使用帧抓取器的计算机，以便捕获单个行为帧以进行计算机操作。小鼠用途极多，在几乎任何治疗后都能表现出补偿行为。模糊性可能存在于每个移动的身体第4部分。因此，分析某些行为可能需要更高的分辨率和更高速的摄像机。
小鼠的男性性行为受多种因素影响，包括菌株差异、激素变化和基因突变体1、3、9、10。麦吉尔和布莱特11说明了小鼠交配行为中的应变差异。例如，C57BL/6雄性通常快速获得内向和射精在大约20分钟11。DBA/2 男性获得内省速度很慢，但射精速度很快。BALB/c男性缓慢实现射精（平均延迟1小时），由于长期求爱11。睾丸激素促进和维护男性性行为2，睾丸激素水平的变化可以改变性行为表现12.手术割礼和抗雄激素治疗可以降低睾丸激素水平，并导致性行为，甚至性动机和性兴奋迅速下降13。施用的睾丸激素可以恢复在割礼小鼠的预刺激和共亲行为。最后，与野生型小鼠相比，淘汰和击倒小鼠在性行为方面存在差异。例如，具有Adcy3、Cnga2和Gnao靶向突变的雄性小鼠检测信息素的能力降低，而Trpc2敲除小鼠表现出改变的伙伴偏好14，15，16。克劳利3解释了转基因和敲除对小鼠性行为的其他影响。
在这里，描述了评估雄性小鼠与卵巢细胞化女性配对时性行为的最常见程序之一，该女性已被激素准备接受。提出了在小鼠进行性行为实验的实验方案。此外，还展示了CD-1小鼠社会隔离引起的性行为模式改变的一个例子。
Protocol
Representative Results
Discussion
在介绍的协议中有一些关键步骤。关于女性的卵巢切除术，背部的手术切口开口比腹部的切口没有危害。鉴于卵巢的位置是深的，拉其他器官，当切口从腹部切开时往往导致出血，并导致手术视力不明20。我们的背部进行切口，以容易地到达卵巢，缩短手术时间，并确保手术安全。
手术期间维持无菌条件对生存很重要。在外科手术中考虑了四个主要变量：手…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢陆聪、张红霞、张北岳和胡米对实验的建议。
Materials
| Choral hydrate | Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd. | 20160225 | |
| Coated VICRYL Plus Sutures | Ethicon, Inc. | missing | |
| Estradiol benzoate | J&K Scientific, Ltd. | L930Q170 | |
| Ethanol absolute | Beijing Chemical Works Co., Ltd. | 20160715 | |
| Ibuprofen (Children's Motrin) | Shanghai Johnson & Johnson Co., Ltd. | 160629478 | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | 217180501 | |
| Lidocaine | HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd. | 1170506107 | |
| Male and female CD-1 mice | Vital River Beijing | SCXK( )2013-0023 |
|
| Olive oil | |||
| Penicillin sodium | North China Pharmaceutical Co., Ltd. | F5126420 | |
| Progesterone | J&K Scientific, Ltd. | LR50Q07 | |
| Sony digital camera | Sony Corporation | HDR-CX290E | |
| Test box | DIY | ||
| ThinkStation Computer | Lenovo | S/N PCOGLQKG | |
| Vaporizer for Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | E05904-009M |
References
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