남성 마우스의 성적 행동의 평가
Summary
이 문서에서는 남성 마우스에서 성적 행동 테스트를 수행 하는 방법을 설명 합니다.
Abstract
성적 행동은 매우 종에 따라 다릅니다. 설치류는 약간 다른 성적 행동을 가지고 있지만, 마우스와 쥐는 유사한 성적 행동 패턴을 가지고있다. 이 문서의 목적은 호르몬 유도 에스트라스 난소 난소 암소 화 여성 모델 및 남성 마우스의 성적 행동의 평가에 대 한 실험 절차를 설명 하는. 가장 중요한 성적 행동 요소는 비디오 및 그림에서 입증됩니다. 성적 행동 테스트의 중요한 단계, 장점 및 한계도 설명되어 있습니다. 마지막으로, 동작 매개 변수가 제시되고, 짝짓기의 장착, 내향성 및 사정 프로세스가 구별됩니다. 행동 매개 변수는 테스트 기간 동안 발생한 기간 및 개수 측면에서 평가됩니다.
Introduction
성숙한 남성 마우스에 있는 성적인 행동은 다른 두뇌 회로에 있는 관련하고 상호 의존적인 호르몬 시스템 및 신경 시스템의 일련의 상호 작용에서유래합니다 1. 또한 개발 경험, 학습, 맥락 및 적절한 파트너가 필요합니다. 행동 분석은 신경 또는 신경 사적 기능에 중요한 반영입니다. 따라서, 동물 모델에 대한 성적 행동 연구는 행동 신경 과학 및 기타 관련 연구에서 널리 사용되어 왔다2. 설치류에서 성적 행동의 정신은 많은 기사와 책1,3,4에설명되어있다 . 예를 들어, 쥐5에서 성적 행동에 대한 Scahs 및 Barfield의 설명은 마우스5에서유사한 행동 패턴을 이해하는 데 도움이되었습니다. 마우스는 행동 연구에 대 한 가장 일반적으로 사용 되는 과목 중 하나입니다. 선체 등6 남성 마우스 성적 행동의 상세한 소개를 했다: 남성 마우스 는 여성을 발생 하는 경우, 그것은 여성의 선 천 성 영역을 조사 하기 시작. 그런 다음, 수컷은 여성의 측면에 앞발을 눌러 뒤쪽에서 여성을 장착합니다. 여성은 특징적인 성적 수용 자세를 나타내며 척추를 활로 구부리고 꼬리를 신체의 한쪽으로 움직여 남성의 성적 침투에 대한 개방적 인트로이터스 (즉, lordosis)를 노출시다. 장착 후, 남성은 빠르고 얕은 골반 추력을 만들고 느리고 깊은 질 추력을 만듭니다. 수많은 내향성 후, 오래 지속되는 추력은 정액의 사정을 초래하며, 그 동안 남성 마우스는 여성6에서분리되거나 떨어지기 전에 약 25 s 동안 얼어 붙을 수 있습니다. 사정에서 남성 마우스 액세서리 땀 샘 은 copulatory 플러그를 형성하기 위해 경화 정액을 포함하는 혼합물을 생성 할 수있다. 마지막으로, 사정 에 이어, 남성은 생식기 그루밍을 시작하고 여성에 대한 관심의 부족을 표시합니다. 간단히 말해서, 남성 성적 행동의 기본 순서는 스니핑으로 구성, 다음, 장착, 내향성, 사정, 그리고 사정 후 그루밍. 마우스 성적 행동은 변형 차이를 나타낸다. 예를 들어, 사정 대기 범위는 594에서 6943 s이며, 내향제의 수는 5에서 100 이상입니다. 사정 후 대기 시간 범위는 17 분에서 60 분입니다. 그러나, 새로운 여성의 도입은이 시간 간격을 줄일 수 있습니다. 어떤 경우에는, 남성은 새로운 여성과 첫 번째 내향성에 사정7.
성적 행동의 평가를위한 주요 이벤트는 장착, 내향성, 사정입니다. 행동 과학자들은 각 행동의 빈도뿐만 아니라 대기 시간 및 시간 간격5,8의측정을 권장했습니다. 과거 연구에서 몇 가지 주요 측정 지표는 다음과 같습니다 마운트 의 수, 내외 사정의 수, 마운트 대기 시간, 내향 대기 시간, 사정 대기 시간, 사후 사정 마운트 대기 시간 (또는 사정 후 간격), 사정 후 내외 대기 시간, copulatory 시리즈의 수, 및 copulatory 시리즈의 기간. Park et al.8 및 Sachs et al.5는 설치류의 장착, 내향성 및 사정의 각 작용을 식별하는 방법을 설명했습니다. 장착은 남성이 뒤에서 여성을 장착하고, 앞다리로 측면을 만지고, 음경 삽입없이 신속하고 반복적으로 그의 성기를 밀어 넣는 것으로 정의됩니다. 음경 삽입이라고도 하는 내향성은 빠른 얕은 추력 후 길고 깊은 추력, 한 개의 뒷다리로 빠른 킥, 여성에서 남성의 현저한 측면 철수 와 같은 행위 중 하나 이상에 의해 식별됩니다. 사정은 내향성및 뒷다리의 고도의 감소보다 느리고 깊은 말단 골반 추력에 의해 확인됩니다. copulatory 시리즈는 사정에 장착에서 각 순서에 의해 확인된다. 본 연구에 사용되는 행동 매개 변수의 정의는 다음과 같습니다 : 1) 장착 대기 시간 : 여성의 도입에서 남성의 첫 번째 장착까지의 시간; 2) 내향적 대기 시간 : 여성의 도입에서 첫 번째 내향성까지의 시간; 3) 사정 대기 시간 : 첫 번째 내적에서 첫 번째 사정까지의 시간 (일반적으로 마지막 골반 추력에 따라); 4) 사후 사정 마운트 대기 시간 : 사정에서 다음 장착까지의 시간; 5) 사후 사정 내외 적 대기 시간 : 사정과 다음 내향성에서 시간; 6) 마운트 수 : 첫 사정 전 장착 횟수; 7) 내향적 인 수 : 첫 번째 사정 전에 내향적 인 수; 8) copulatory 시리즈의 수 : 관찰 기간 동안 copulatory 시리즈의 수; 9) copulatory 시리즈의 기간 : 관찰 기간 동안 모든 copulatory 시리즈의 시간.
성행위 및 관련 행동은 남성의 홈 케이지 또는 밀폐 된 경기장에서 수행 될 수 있으며, 그 중 리스만의 “비밀 없음”미러 링 박스라는 장치가 결합 행동을 관찰하기 위해 도입됩니다3. 비디오 카메라는 측면보기와 복부보기에서 경사 거울을 통해 마우스의 동작을 동시에 기록하기 위해 상자 앞에 배치됩니다. 그러나,이 방법은 필연적으로 쥐의 환경 스트레스를 제거하기 위해 더 이상 습관에 이르게 밝은 조명을 필요로한다. 측정 방법에 관해서는, 비디오 기반 행동 분석은 행동을 기록하고 정량화하는 것이 좋습니다4. 1/1000s 이상의 권장 셔터 속도를 갖춘 프레임별 비디오 사전 옵션이 있는 비디오 레코더를 사용하여 빠른 마우스 움직임을 기록할 수 있습니다. 어두운 환경에서 녹화할 때는 고해상도 적외선 카메라가 필요합니다. 필름을 분석하려면 컴퓨터 조작을 위해 개별 동작 프레임을 캡처할 수 있는 프레임 그래버가 있는 컴퓨터가 필요합니다. 마우스는 매우 다양 하 고 거의 모든 치료 후 보상 동작을 표시할 수 있습니다. 모호성은 모든 움직이는 신체 부위4에대해 존재할 수 있습니다. 따라서 일부 동작을 분석하려면 해상도가 더 높고 속도가 빠른 카메라가 필요할 수 있습니다.
마우스에서 남성의 성적 행동은 변형차이, 호르몬 변화 및 유전자돌연변이체 1,3,9,10을포함한 많은 요인에 의해 영향을 받습니다. McGill 및 Blight11은 마우스 결합 동작의 변형 률 차이를 보여 주었습니다. 예를 들어, C57BL/6 남성은 일반적으로 신속하게 내향성을 얻고 약 20 분11에서사정합니다. DBA/2 남성은 내향성을 얻기 위해 느리지만 빠르게 사정합니다. BALB/c 남성은 구애의 긴 기간 으로 인해 사정 (1 시간의 평균 대기 시간)을 달성하기 위해 느립니다11. 남성 호르몬 용이 하 고 남성 성적 행동을 유지2,그리고 남성 호르몬 수준에 변화 성적 행동 성능을 변경할 수 있습니다12. 수술 거세 및 antiandrogen 치료 남성 호르몬의 수준을 줄일 수 있습니다 및 성적 행동의 급속 한 감소와 성적 동기 부여 및 성적 흥분을 일으키는13. 관리 된 남성 호르몬 거세 쥐에서 precopulatory 및 copulatory 행동을 복원할 수 있습니다. 마지막으로, 녹아웃 과 녹다운 마우스는 야생 형 마우스에 비해 성적 행동의 측면에서 차이를 표시합니다. 예를 들어, Adcy3, Cnga2 및 Gnao의 표적 돌연변이를 가진 수컷 마우스는 페로몬을 검출하는 감소된 능력을 나타내고, 반면 Trpc2 녹아웃 마우스는 변경된 파트너 선호도14,15,16을나타낸다. 쥐의 성적 행동에 대한 형질 전환 및 녹아웃의 다른 효과는 Crawley3에의해 설명됩니다.
여기서, 호르몬으로 수용될 수 있는 훈증화된 여성과 남성 마우스의 페어링에서 성적 행동을 평가하는 가장 일반적인 절차 중 하나가 설명된다. 실험 프로토콜은 마우스에서 성적 행동 실험을 수행하기 위한 제시된다. 또한, CD-1 마우스에서 사회적 고립으로 인한 성적 행동 패턴의 변화의 예가 도시되어 있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
제시된 프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 여성의 난소 절제술에 관해서는, 뒤에서 열리는 수술 절개는 복부에서보다 덜 해롭습니다. 난소의 위치가 깊다는 것을 감안할 때, 절개가 복부에서 열릴 때 다른 장기를 당기는 것은 종종 출혈로 이어지고 불분명한 수술 시력(20)을초래한다. 우리는 난소에 쉽게 도달하고 수술 시간을 단축할뿐만 아니라 수술의 안전을 보장?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
루콩, 장홍시아, 장베이유, 후미가 실험에 대한 제안에 감사를 표한다.
Materials
| Choral hydrate | Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd. | 20160225 | |
| Coated VICRYL Plus Sutures | Ethicon, Inc. | missing | |
| Estradiol benzoate | J&K Scientific, Ltd. | L930Q170 | |
| Ethanol absolute | Beijing Chemical Works Co., Ltd. | 20160715 | |
| Ibuprofen (Children's Motrin) | Shanghai Johnson & Johnson Co., Ltd. | 160629478 | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | 217180501 | |
| Lidocaine | HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd. | 1170506107 | |
| Male and female CD-1 mice | Vital River Beijing | SCXK( )2013-0023 |
|
| Olive oil | |||
| Penicillin sodium | North China Pharmaceutical Co., Ltd. | F5126420 | |
| Progesterone | J&K Scientific, Ltd. | LR50Q07 | |
| Sony digital camera | Sony Corporation | HDR-CX290E | |
| Test box | DIY | ||
| ThinkStation Computer | Lenovo | S/N PCOGLQKG | |
| Vaporizer for Isoflurane | RWD Life Science Co., Ltd. | E05904-009M |
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