ラットの急性脳卒中後の脳回復を評価する前臨床モデル
Summary
本研究の目的は、1-90後の中大脳動脈閉塞/再灌流(MCAO/R)後の脳梗塞および感覚運動機能を試験することにより、脳虚血の回復および後遺症の研究のための動物モデルを確立し、検証することですネズミの日。
Abstract
本研究の目的は、回復段階および後遺症段階における動物脳虚血モデルを確立し、検証することにあった。男性スプレイグ・ドーリーラットにおける中大脳動脈閉塞/再灌流(MCAO/R)モデルが選択された。ラットの重量(260-330g)、糸ボルトタイプ(2636/2838/3040/3043)、脳梗塞時間(2-3時間)を変更することにより、ロンガのスコアが高く、より大きな梗塞量とより大きなモデル成功率をロンガのスコアとTTC染色を用いてスクリーニングした。最適なモデル条件(300g、3040スレッドボルト、3時間脳梗塞時間)を取得し、感覚運動機能と梗塞量の評価を介して再灌流後1〜90日間の観察期間に使用した。これらの条件では、両側非対称性試験は1日から90日の間に有意な差があり、グリッドウォーキング試験は1〜60日の有意な差を有した。両方の違いは、適切な感覚運動機能試験である可能性があります。したがって、脳虚血の回復および後遺症段階における新規ラットモデルの最も適切な状態が発見された:3時間の脳梗塞のための3040スレッドボルトでMCAOを受けた300gラットが見つかり、その後再浸透した。適切な感覚運動機能試験は、両側非対称性試験とグリッドウォーキング試験であった。
Introduction
脳虚血は、急性期(1週間以内)、回復段階(1週間~6ヶ月)、後遺症の3つの段階に分けられる。現在、ほとんどの研究は、その有意な効果と多対相対研究モデル1、2、3のために脳虚血の急性期に焦点を当てています。しかし、脳虚血の回復と後遺症の段階は、障害の長期的な合併症のために無視することはできません。そこで、本研究の目的は、脳虚血の回復段階と後遺症を研究するために、安定した信頼性が高く比較的単純な動物モデルを探索することになる。
多くの実験的脳虚血モデルの中で、中脳動脈閉塞(MCAO)を使用して、右中大脳動脈(MCA)への糸ボルト挿入を使用しています。このモデルは、より大きな梗塞量を産生し得るヒト脳卒中に類似しており、脳卒中に関連する多くの行動障害をもたらし、糸ボルト4、5、6を除去することによって血液再灌流(R)を可能にすることができる。MCAO/Rはまた、脳虚血7の金標準動物モデルと考えられている。さらに、脳損傷の重症度は、糸ボルトの直径および挿入長さ、脳虚血の持続時間、および動物重量(より大きなラットは、より大きな脳およびより厚い脳血管を有する)8に依存する。したがって、糸ボルトの種類、梗塞時間、およびラット重量を変更することにより、MCAO/Rラットにおける脳虚血の回復および後遺症の段階に適したモデルを見つけることができる。ラットモデルを検証するために、TTC染色と感覚運動機能実験(両側非対称性試験、グリッドウォーキング試験、ロタロッド試験、リフティングロープテスト)を用いて、MCAO/Rモデルの1日間、35日間、60日間、90日間の研究を行いました。
Protocol
Representative Results
Discussion
急性脳虚血によく使用されている方法および行動指標を確立する多くのモデルは、脳虚血16、17の回復および後遺症段階に有意な変化を有しないかもしれない。しかし、回復および後遺症期における脳虚血患者の数は最も多い。虚血脳卒中の回復および後遺症段階に適した動物モデルを選択することが不可欠である。
ラットのMC…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、中国国立自然科学財団(81603315,81603316)、中国江西省の主要な研究開発計画(20171ACH80001)、福建省の大学における産業・学術協力プロジェクトによって支援されました。中国 (2018Y41010011).
Materials
| Anatomical Microscope | Leica (Germany) | S8 | Microscopic operating instrument |
| Blade | Gellette | / | Cutting brain sections |
| Constant Temperature Shaking Bed | Taicang Experimental Equipment Factory | THZ-C | To keep the brain sections stained evenly and at a constant temperature |
| Digital Camera | Canon | 700D | For taking pictures of TTC staining |
| Electric Shaver | Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd. | 3000# | Removal of hair from the neck of rats |
| Forceps Hamostatic | Shanghai Medical device Co., Ltd. | 14 cm | Using for brain removing |
| Image Pro Plus Software | Media Cybernetics Inc. | 6.0 | Analyze the infarct volume |
| Isoflurane | RWD Life Science | 217170702 | Anesthetic gas |
| Microforceps | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd. | 10 cm | Vascular micromanipulation |
| Microshear | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd. | 10 cm | Vascular micromanipulation |
| Ophthalmic Forceps | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd. | 10 cm | Auxiliary skin and muscle anatomy |
| Pphthalmic Scissors | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd. | 10 cm | Using for cutting the skin of neck |
| Rat Brain Slice Mold | Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd. | 400 g | For standard, uniform cutting of brain tissue |
| Rat Rotating Bar Fatigue Apparatus | Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co., Ltd. | ZH-300B | To test the sensorimotor function |
| Small Animal Anaesthesia Machine | Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd. | ABM3000 | A gas anesthetic machine |
| Small Animal Thermostat | Beijing Damida Technology Co., Ltd. | DM.7-YLS-20A | To maintain animal body temperature constant during operation |
| Surgical Scissors | Shanghai Medical device Co., Ltd. | 16 cm | Using for decapitate and brain removing |
| Suture | Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd. | 4-0 / 5-0 | Using for skin and muscle sutures / Using for vascular ligations |
| Thread Bolt | Beijing Cinontech Co. Ltd. | 2636/2838/3040/3043-A4 | Blockage of the middle cerebral artery in rats |
| 5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC) | Sigma | LOT#BCBP3272V | Brain section staining reagent |
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