Démonstration d'une relation linéaire entre le facteur de croissance endothéliale vasculaire et l'hormone lutéinisante dans les extraits de cortex rénal
Summary
Présenté ici est un protocole pour l’utilisation d’une préparation corticale d’extrait de rein et de normalisation totale de protéine pour démontrer la corrélation entre le facteur de croissance endothéliale vasculaire et l’hormone lutéinisante dans le rein de mammifères.
Abstract
Le facteur de croissance endothéliale vasculaire (VEGF) aide à commander l’angiogenèse et la perméabilité vasculaire dans le rein. Les désordres rénaux, tels que la néphropathie diabétique, sont associés à la dysrégulation de VEGF dans le rein. Les facteurs qui régissent VEGF dans des conditions physiologiques dans le rein ne sont pas bien compris. L’hormone lutéinisante (LH), une hormone pro-angiogénique, aide à réguler l’expression physiologique de VEGF dans les organes reproducteurs. Étant donné que les récepteurs LH se trouvent dans le rein, nous, à l’Institut de recherche Zietchick, présumé ici que LH contribue également à réguler l’expression VEGF dans le rein ainsi. Pour fournir des preuves, nous avons cherché à montrer que les niveaux de LH sont en mesure de prédire les niveaux de VEGF dans le rein des mammifères. La plupart des enquêtes liées au VEGF impliquant le rein ont utilisé des mammifères de moindre ordre comme modèles (c.-à-d. rongeurs et lapins). Pour traduire ce travail au corps humain, il a été décidé d’examiner la relation entre veGF et LH chez les mammifères de plus haut niveau (c’est-à-dire les modèles bovins et porcins). Ce protocole utilise le lysate protéique total du cortex rénal. Les clés du succès de cette méthode comprennent l’approvisionnement en reins d’animaux d’abattoir immédiatement après la mort ainsi que la normalisation des niveaux d’analytes (dans l’extrait de rein) par protéine totale. Cette étude démontre avec succès une relation linéaire significative entre LH et VEGF dans les reins bovins et porcins. Les résultats sont reproductibles chez deux espèces différentes. L’étude fournit des preuves à l’appui que l’utilisation d’extraits de rein de vaches et de porcs sont une ressource excellente, économique et abondante pour l’étude de la physiologie rénale, en particulier pour examiner la corrélation entre veGF et d’autres analytes.
Introduction
Le facteur de croissance endothéliale vasculaire A (VEGF-A), aide à réguler l’angiogenèse et la perméabilité vasculaire dans le rein et d’autres organes1,2 (ci-après, VEGF-A sera appelé VEGF). Les niveaux de VEGF dans le rein sont sous contrôle homéostatique serré. Lorsque les niveaux rénaux de VEGF sont élevés ou déprimés, le rein peut dysfonctionnement. Par exemple, dans les 3 semaines suivant la naissance, les souris avec l’hétérozygosity podocyte-spécifique pour VEGF développent l’endotheliosis et le glomeruli sans sang (c.-à-d., lésions rénales vues dans la preeclampsia humaine), et l’échec rénal de phase finale se produit dans ces heterozygotes par 3 mois d’âge. Les ko homozygotiques spécifiques aux podocytes meurent d’hydrops et d’insuffisance rénale dans un délai de 1 jour après la naissance3,4.
D’autre part, la surexpression de VEGF rénal provoque la protéinurie et l’hypertrophie glomerulaire3,4. Par exemple, les lapins transgéniques qui surexpriment veGF présentent des proteinuria progressives avec des taux de filtration glomerulaires accrus aux premiers stades de la néphropathie, suivis d’une diminution des taux de filtration glomerulaire s’est accentué aux stades plus avancés3. La néphropathie diabétique, une cause majeure de la maladie rénale de phase finale dans les adultes diabétiques, est fortement associée à la dysregulation de VEGF2,5. Une grande attention a été accordée au rôle de l’hypoxie dans l’induire l’expression de VEGF dans des conditions pathologiques5. Cependant, les facteurs régissant le VEGF dans des conditions physiologiques (tant dans le rein que dans d’autres organes) ne sont pas bien compris2,6. L’identification de ces facteurs (à l’exception de l’oxygène) qui sont impliqués dans la régulation physiologique et pathologique du VEGF est une entreprise importante.
L’hormone lutéinisante (LH), une hormone pro-angiogénique, aide à réguler l’expression physiologique de VEGF dans les organes reproducteurs tels que l’ovaire et le testicule7,8. Des études antérieures ont fourni des preuves que LH aide également à réguler VEGF dans les organes non reproductifs, tels que les yeux6,9,10. Les récepteurs de LH se trouvent dans la médulle et le cortex du rein11,12. A noter, les cellules épithéliales tubulaires rénales, ainsi que le récepteur LH, expriment VEGF11,12,13,14. Prenant ces deux observations ensemble, nous avons supposé que LH aide également à réguler l’expression VEGF dans le rein13,14. Pour fournir l’évidence de cette relation de LH/VEGF, le protocole présenté vise à montrer que les niveaux de LH sont capables de prévoir des niveaux de VEGF dans le rein. De nombreuses enquêtes antérieures sur le VEGF concernant le rein ont utilisé des modèles de mammifères d’ordre inférieur (c.-à-d. rongeurs et lapins)2. Pour traduire ce travail sur le corps humain, l’étude examine la relation entre le VEGF et le LH chez les mammifères de plus haut niveau (ici, les modèles bovins et porcins). Pour atteindre cet objectif, le lysate protéique total a été préparé à partir de la région du cortex des reins bovins et porcins.
Protocol
Representative Results
Discussion
L’aveux des reins de l’abattoir immédiatement après la mort animale est la clé du succès de cette méthodologie. C’est le principal avantage d’utiliser des organes de vaches et de porcs au lieu de cadavres humains. Il y a habituellement au moins un retard de 12-24 h à partir du moment de la mort jusqu’à ce que les organes humains de cadavre soient achetés. Puisque la composition chimique des organes corporels change de manière significative dans 2 h post-mortem15,<sup class="xre…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient Scholl’s Slaughterhouse (Blissfield, MI) d’avoir fourni les reins bovins et porcins. Aucune subvention n’a été utilisée pour cette étude.
Materials
| Bovine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS700951 | |
| Bovine VEGF-A ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS2887434 | |
| Micro BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 23235 | |
| Porcine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS009739 | |
| Porcine VEGF-A ELISA | Ray Biotech, Norcross, GA. | ELP-VEGFA-1 | |
| RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 89901 |
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