किडनी कॉर्टेक्स अर्क में वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर और ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन के बीच एक रैखिक संबंध का प्रदर्शन
Summary
यहां प्रस्तुत एक कॉर्टिकल किडनी निकालने की तैयारी और कुल प्रोटीन सामान्यीकरण का उपयोग करने के लिए एक प्रोटोकॉल है जो स्तनधारी गुर्दे में संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर और ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन के बीच सहसंबंध प्रदर्शित करता है।
Abstract
वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (VEGF) किडनी में एंजियोजेनेसिस और वैस्कुलर परायियता को नियंत्रित करने में मदद करता है। गुर्दे के विकार, जैसे मधुमेह नेचुरोपैथी, गुर्दे में VEGF dysregulation के साथ जुड़े हुए हैं । गुर्दे में शारीरिक स्थितियों के तहत VEGF को नियंत्रित करने वाले कारकों को अच्छी तरह से समझ में नहीं आता है। ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच), एक प्रो-एंजियोजेनिक हार्मोन, प्रजनन अंगों में शारीरिक VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में मदद करता है। यह देखते हुए कि एलएच रिसेप्टर्स गुर्दे में पाए जाते हैं, हम, Zietchick अनुसंधान संस्थान में, यहां परिकल्पना है कि LH भी गुर्दे में VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में मदद करता है के रूप में अच्छी तरह से । सबूत प्रदान करने के लिए, हम दिखाने के लिए कि एलएच के स्तर स्तनधारी गुर्दे में VEGF स्तर की भविष्यवाणी करने में सक्षम है उद्देश्य । गुर्दे से जुड़ी अधिकांश VEGF से संबंधित जांचों में मॉडल (यानी, कृंतक और खरगोश) के रूप में निचले क्रम के स्तनधारियों का उपयोग किया गया है। मानव शरीर के लिए इस काम का अनुवाद करने के लिए, उच्च क्रम स्तनधारियों (यानी, गोजातीय और पोर्सिन मॉडल) में VEGF और LH के बीच संबंधों की जांच करने का फैसला किया गया था । इस प्रोटोकॉल में किडनी कॉर्टेक्स से कुल प्रोटीन लाइसेट का इस्तेमाल होता है। इस विधि की सफलता की कुंजी में मृत्यु के तुरंत बाद कसाईघर जानवरों से गुर्दे की खरीद के साथ-साथ कुल प्रोटीन द्वारा एनालिएट स्तर (गुर्दे निकालने में) को सामान्य बनाना शामिल है। यह अध्ययन सफलतापूर्वक गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे दोनों में एलएच और VEGF के बीच एक महत्वपूर्ण रैखिक संबंध को दर्शाता है । परिणाम दो अलग-अलग प्रजातियों में प्रजनन योग्य हैं। अध्ययन सबूत है कि गायों और सूअरों से गुर्दे के अर्क का उपयोग एक उत्कृष्ट, किफायती, और गुर्दे के शरीर विज्ञान के अध्ययन के लिए प्रचुर मात्रा में संसाधन हैं, विशेष रूप से VEGF और अंय analytes के बीच संबंध की जांच के लिए समर्थन प्रदान करता है ।
Introduction
वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर ए (VEGF-A), किडनी और अन्य अंगों में एंजियोजेनेसिस और वैस्कुलर परायियता को विनियमित करने में मदद करता है1,2 (इसके बाद, VEGF-A को VEGF के रूप में संदर्भित किया जाएगा)। गुर्दे में VEGF का स्तर तंग होमोस्टैटिक नियंत्रण में है। जब गुर्दे के VEGF स्तर ऊंचा या उदास हैं, गुर्दे खराब कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, जन्म के 3 सप्ताह के भीतर, VEGF के लिए पोडोसाइट-विशिष्ट विषमता वाले चूहों एंडोथेलियोसिस और रक्तहीन ग्लोबेरौली (यानी, मानव प्रीक्लेम्पसिया में देखे गए गुर्दे के घावों) का विकास करते हैं, और अंत चरण गुर्दे की विफलता इन विषमता में 3 महीने की उम्र तक होती है। पोडोसाइट-विशिष्ट होमोज़िगोटिक नॉकआउट जन्म के 1 दिन के भीतर हाइड्रोप्स और गुर्दे की विफलता से मर जाते हैं3,4।
दूसरी ओर, गुर्दे के VEGF के अतिअभिव्यक्ति प्रोटीनयूरिया और ग्लोमर्युलर हाइपरट्रॉफी3,4का कारण बनता है । उदाहरण के लिए, वीजेएफ को ओवरएक्सप्रेस करने वाले ट्रांसजेनिक खरगोश नेचुरोपैथी के शुरुआती दौर में ग्लोमर्युलर फिल्ट्रेशन दरों में वृद्धि के साथ प्रगतिशील प्रोटीनुरिया का प्रदर्शन करते हैं, जिसके बाद बाद केचरणोंमें ग्लोमर्युलर निस्पंदन दरों में कमी आई है। मधुमेह के वयस्कों में अंतिम चरण गुर्दे की बीमारी का एक प्रमुख कारण मधुमेह नेचुरोपैथी, VEGF dysregulation2,5के साथ दृढ़ता से जुड़ा हुआ है । पैथिकपरिस्थितियोंमें VEGF अभिव्यक्ति को प्रेरित करने में हाइपोक्सिया की भूमिका पर बहुत ध्यान दिया गया है । हालांकि, शारीरिक स्थितियों (गुर्दे और अन्य अंगों दोनों में) के तहत VEGF को नियंत्रित करने वालेकारकोंको2,6अच्छी तरह से समझ में नहीं आता है। इन कारकों की पहचान करना (ऑक्सीजन को छोड़कर) जो शारीरिक और पैथोलॉजिकल VEGF विनियमन में शामिल हैं, एक महत्वपूर्ण उपक्रम है ।
ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच), एक प्रो-एंजियोजेनिक हार्मोन, अंडाशय और टेस्टिस7,8जैसे प्रजनन अंगों में शारीरिक VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में मदद करता है। पिछले अध्ययनों से इस बात के सबूत मिले हैं कि एलएच गैर-प्रजनन अंगों में VEGF को विनियमित करने में भी मदद करता है, जैसे आंखें6,9,10। एलएच रिसेप्टर्स मेदुल्ला और कॉर्टेक्स में किडनी11,12के पाए जाते हैं । ध्यान दें, गुर्दे ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं के साथ-साथ एलएच रिसेप्टर, एक्सप्रेस VEGF11,12,13,14। इन दो टिप्पणियों को एक साथ लेते हुए, हमने परिकल्पना की कि एलएच किडनी13,14में VEGF अभिव्यक्ति को विनियमित करने में भी मदद करता है। इस LH/VEGF रिश्ते के सबूत प्रदान करने के लिए, प्रस्तुत प्रोटोकॉल को दिखाने के लिए कि एलएच के स्तर गुर्दे में VEGF स्तर की भविष्यवाणी करने में सक्षम है करना है । गुर्दे से जुड़ी कई पिछले VEGF से संबंधित जांच ने निचले क्रम के स्तनपायी मॉडल (यानी, कृंतक और खरगोश)2का उपयोग किया है। मानव शरीर के लिए इस काम का अनुवाद करने के लिए, अध्ययन उच्च क्रम स्तनधारियों (यहां, गोजातीय और पोर्सिन मॉडल) में VEGF और LH के बीच संबंधों की जांच करता है । इस उद्देश्य को पूरा करने के लिए, गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे के कॉर्टेक्स क्षेत्र से कुल प्रोटीन लाइसेट तैयार किया गया था।
Protocol
Representative Results
Discussion
पशु मृत्यु के तुरंत बाद बूचड़खाने से गुर्दे की खरीद इस पद्धति में सफलता की कुंजी है। मानव शवों के बजाय गायों और सूअरों से अंगों का उपयोग करने का यह मुख्य लाभ है। आमतौर पर मृत्यु के समय से कम से कम 12-24 घंटे ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक गोजातीय और पोर्सिन गुर्दे प्रदान करने के लिए स्कॉल के कसाईघर (आनंदफील्ड, एमआई) का शुक्रिया अदा करते हैं । इस अध्ययन के लिए अनुदान वित्तपोषण का उपयोग नहीं किया गया ।
Materials
| Bovine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS700951 | |
| Bovine VEGF-A ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS2887434 | |
| Micro BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 23235 | |
| Porcine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS009739 | |
| Porcine VEGF-A ELISA | Ray Biotech, Norcross, GA. | ELP-VEGFA-1 | |
| RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 89901 |
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