Un modèle de souris de sarcome de tissus mous incomplètement réséqué pour l’essai (Neo)adjuvant thérapies
Summary
Dans ce protocole, nous décrivons un modèle de souris de résection chirurgicale incomplète du sarcome de tissu mou pour tester (neo)thérapies adjuvantes.
Abstract
La chirurgie est souvent le premier traitement pour de nombreuses tumeurs solides. Cependant, les rechutes locales se produisent fréquemment suivant la résection primaire de tumeur, en dépit des thérapies adjuvantes ou néo-adjuvantes. Ceci se produit lorsque les marges chirurgicales sont insuffisamment sans tumeur, ce qui entraîne des cellules cancéreuses résiduelles. D’un point de vue biologique et immunologique, la chirurgie n’est pas un événement nul; l’environnement de cicatrisation des plaies est connu pour induire des voies pro- et anti-tumorigenic. En conséquence, les modèles précliniques pour le développement de médicaments visant à prévenir la rechute locale devraient intégrer la résection chirurgicale lors de l’essai de nouvelles thérapies (néo)adjuvantes, pour modéliser les paramètres cliniques chez les patients traités par la chirurgie.
Ici, nous décrivons un modèle de souris de résection chirurgicale incomplète du sarcome de tissu mou de WEHI 164 qui permet l’essai des thérapies (néo)adjuvantes dans le arrangement d’une réponse de guérison de blessure. Dans ce modèle, 50% ou 75% de la tumeur est enlevée, laissant derrière elle quelques tissus cancéreux in situ pour modéliser la maladie résiduelle brute après la chirurgie dans le cadre clinique. Ce modèle permet de tester des thérapies dans le contexte de la chirurgie tout en considérant la réponse de guérison des plaies, qui peut affecter l’efficacité des traitements (néo)adjuvants. La résection chirurgicale incomplète résulte dans la repousse reproductible de la tumeur dans toutes les souris en l’absence de thérapie adjuvante. Le traitement adjuvant avec le blocus de point de contrôle a des résultats dans la repousse réduite de tumeur. Ce modèle est donc approprié pour tester des thérapies dans le contexte de la chirurgie de débulking et sa réponse de guérison des plaies associée et peut être étendu à d’autres types de cancer solide.
Introduction
La chirurgie reste l’option de traitement principale pour de nombreuses tumeurs solides1, y compris le sarcome des tissus mous2,3. Malgré l’amélioration des techniques de chirurgie du cancer, et des combinaisons avec des thérapies (néo)adjuvant, il ya encore un risque élevé de rechute du cancer et de métastases suite à la résection primaire de tumeur4,5. Dans le sarcome des tissus mous, les rechutes se produisent particulièrement locorégionally, au site de la chirurgie, ayant pour résultat la morbidité et la mortalité accrues. Dans le cadre clinique, il peut être difficile d’obtenir des marges suffisamment larges (par exemple, en raison de contraintes anatomiques), ce qui entraîne une résection incomplète et une récurrence tumorale subséquente6. Le stress chirurgical et le processus ultérieur de cicatrisation des plaies sont connus pour créer un microenvironnement de tumeur immunosuppressive favorable à la répétition de tumeur7,8. Par conséquent, la découverte et le développement de nouvelles thérapies pour le sarcome des tissus mous, en particulier les immunothérapies, devraient idéalement tenir compte de la réponse chirurgicale de guérison des plaies.
La plupart des études précliniques pour les thérapies adjuvantes sont initialement effectuées à l’aide de modèles de souris syngénéiques ou xénotransplantes sous-cutanées, sans incorporer le stress chirurgical et la réponse de guérison des plaies9,10. Par conséquent, nous avons développé un modèle syngeneic sous-cutané de sarcome de tissu mou de souris incorporant la résection chirurgicale incomplète. WEHI 164 cellules de fibrosarcome sont inoculés sous-cutanéement, et une fois que les tumeurs sont établies, nous enlevons 50-75% du volume de tumeur (Figure 1A-E). Les tumeurs se repoussent constamment de la tumeur restante. Ce modèle permet de tester des thérapies adjuvantes tout en considérant l’effet du stress chirurgical et de la cicatrisation des plaies. Des modèles chirurgicaux similaires de résection incomplète ont été utilisés dans un certain nombre d’études par plusieurs groupes et se sont avérés reproductibles et efficaces11,12,13. Ici, nous fournissons une description détaillée de ce protocole.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous fournissons un protocole pour un modèle de souris de résection chirurgicale incomplète du sarcome de tissu mou pour tester des thérapies péri-opératoires. Nous avons également normalisé l’incision chirurgicale pour permettre l’évaluation de la cicatrisation de blessure entre les souris suivant le traitement.
Le placement de tumeur est une partie importante de ce protocole. Nous avons opté pour un modèle de tumeur sous-cutanée pour permettre un accès chirurgical facile au …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail est soutenu par des subventions de la Sock it au Sarcome! Fondation, l’Australian and New Zealand Sarcoma Association, la Children’s Leukemia & Cancer Research Foundation et Perpetual Philanthropy. W.J.L est soutenu par une bourse Simon Lee et une bourse de recherche du National Health and Medical Research Council et du Cancer Council WA.
Materials
| 26 gauge 0.5 mL insulin syringe | Becton Dickinson, Australia | 326769 | None |
| 2-Mercaptoethanol | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21985023 | None |
| Anaestetic gas machine | Darvall Vet, Australia | SKU: 2848 | None |
| Anti-CTLA-4 | BioXcell, USA | BE0164 | None |
| Anti-PD-1 | BioXcell, USA | BP0273 | None |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL | RB healthcare UK Limited, UK | 55175 | Prescription order |
| Chlorhexidine Surgical Scrub 4% | Perigo Australia, Australia | CHL01449F(scrub | None |
| Fetal Bovine serum | CellSera, Australia | AU-FBS-PG | None |
| Forceps Fine 10.5 cm | Surgical house, Western Australia | CC74110 | None |
| Forceps Fine 12 cm Serrated | Surgical house, Western Australia | CC74212 | None |
| Forceps Halsted 14 cm | Surgical house, Western Australia | CD01114 | None |
| Heating chamber | Datesand Ltd, UK | Mini-Thermacage | None |
| HEPES (1M) | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15630080 | None |
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health, Australia | SKU: 29405 | Prescription order |
| Lubricating Eye Ointment | Alcon | n/a | None |
| Penicillin/streptomycin 1000X | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15140122 | None |
| Phosphate Buffered Solution 10x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 70013-032 | None |
| Reflex 7mm Clips | Able scientific, Australia | AS59038 | None |
| Reflex 7mm Wound Clip Applicator | Able scientific, Australia | AS59036 | None |
| Reflex Wound Clip Remover | Able scientific, Australia | AS59037 | None |
| Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit | Darvall Vet, Australia | #7885 | None |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21870092 | None |
| Scissors Iris STR 11 cm | Surgical house, Western Australia | KF3211 | None |
| Scissors Iris STR 9 cm | Surgical house, Western Australia | JH4209 | None |
| Small Induction Chamber | Darvall Vet, Australia | SKU: 9630 | None |
| TrypLE express 1x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 12604-021 | None |
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