Bu deneyde, kuyruk damarına kan damarlarını lekeleyebilen Rhodamine B izotiyosiyanat-dektran enjekte edilir. Karaciğer açığa çıktıktan ve sabitlendikten sonra multifotoğraf mikroskopisi kullanılarak canlı vücuttaki derin dokuyu gözlemlemek için karaciğerin belirli bir kısmı seçilebilir.
Fare karaciğer dokusunun intravasküler dinamiklerini gözlemlemek, fare karaciğerinin doku ile ilgili hastalıkları hakkında daha derinlemesine gözlemler ve çalışmalar yapmamızı sağlar. Bir fareye kan damarlarını lekeleyebilecek bir boya enjekte edilir. Fare karaciğerini in vivo olarak gözlemlemek için, bir çerçeveye maruz kalır ve sabitlenir. Karaciğer dokusundaki kan damarlarının iki ve üç boyutlu görüntüleri çoktoğraf mikroskop kullanılarak elde edilir. Seçilen yerlerdeki dokuların görüntüleri, uzun süreli değişiklikleri gözlemlemek için sürekli olarak elde edilir; karaciğer dokularındaki kan damarlarının dinamik değişimleri de gözlenir. Multifotoğraf mikroskopisi, derin doku bölümlerinde veya organlarda hücre ve hücre fonksiyonlarını gözlemlemek için kullanılan bir yöntemdir. Multifotoğraf mikroskopisi doku mikroyapısına duyarlıdır ve biyolojik dokuların yüksek mekansal çözünürlükte in vivo olarak görüntülenmesini sağlayarak kuruluşun biyokimyasal bilgilerini yakalama olanağı sağlar. Multifotoğraf mikroskopisi karaciğerin bir kısmını gözlemlemek için kullanılır, ancak görüntüyü daha kararlı hale getirmek için karaciğeri sabitlemek sorunludur. Bu deneyde, karaciğeri düzeltmek ve mikroskop altında karaciğerin daha istikrarlı bir görüntüsünü elde etmek için özel bir vakum emme kabı kullanılır. Ek olarak, bu yöntem, bu tür maddeleri boyalarla işaretleyerek karaciğerdeki belirli maddelerin dinamik değişikliklerini gözlemlemek için kullanılabilir.
Kan damarları insan vücudunun çeşitli organ dokuları için besin sağlayabilir ve madde alışverişi yapabilir. Aynı zamanda, birçok sitokin, hormon, ilaç ve hücre de belirli yerlere damar nakli yoluyla çalışır. Karaciğer dokusundaki damar değişikliklerinin gözlemlenmesi, karaciğer dokusundaki kan akışının dağılımını ve maddelerin taşınmasını anlamaya yardımcı olabilir ve bazı damarla ilgili hastalıkların analizine yardımcı olabilir1,2.
Farelerde karaciğerin kan damarlarını gözlemlemenin birçok yolu vardır. Bunlar arasında optik mikroskopinin opak vasküler dokuyu gözlemlemede birçok sınırlaması vardır3. Multifotoğraf mikroskopisi, canlı karaciğerlerin kan damarlarını noninvaziv yüksek çözünürlüklü olarak görüntülemek için kullanılabilir4. Sadece kan damarlarının üç boyutlu görüntüleri elde etmekle kalmaz, aynı zamanda teknik, buradaki biyolojik etkileri gözlemlemek için dokuyu düzenlemeye yardımcı olmak için de kullanılabilir; ayrıca, bilgisayarlı tomografi ve manyetik rezonans görüntülemede olduğu gibi sadece mikrovesseller yerine tüm doku görüntülenebilir5.
Multifotoğraf mikroskopisi, derin canlı dokudaki dağınık floresan sinyallerini daha az fototoksikite ile etkili bir şekilde tespit etmek için kullanılabilir6. Bu nedenle, canlı dokunun aktivitesi sağlanabilir ve hasar miktarı azaltılabilir. Multifon mikroskopi, konfokal mikroskopiden daha iyi nüfuz gücüne sahiptir ve daha derin katmanların gözlenmesine izin verir7, benzersiz 3D görüntüleme sağlar. Multifotoğraf mikroskopisi artık kraniyal sinirlerin8 görüntülenmesinde sıklıkla kullanılmaktadır ve canlı farelerde nöronal dinamiklerin incelenmesine kadar genişletilmiştir9,10,11.
Bu deneyde fare kan damarlarının floresan etiketlenerek bir çerçeveye sabitlenmiş olması ve canlı karaciğer dokusundaki kan damarlarının dinamikleri multifotoğraf mikroskopisi kullanılarak görülebilir. Bu deney, belirli maddelerin nasıl işaretlenerek, doku içindeki bir konumu gözlemlemeye yardımcı olmak için multifotoğraf mikroskopisinin nasıl kullanılacağını, hücreler arası dokudaki hücresel olayları gözlemlemeyi, fotokimyasal ölçümlerin12 , 13,14ve canlı dokunun içindeki malzeme dinamiklerini gözlemlemeyi göstermektedir15. Örneğin, tümör endotel belirteci 1 (TEM1), birçok katı tümörde kan damarlarında ve stromada yukarı doğru sıralanmış, tek zincirli değişken parça (scFv) 78’i TEM1’e karşı işaretleyen yeni bir yüzey belirteci olarak tanımlanmıştır ve daha sonra fare hemanjiomunun yeri ve tümörlerin değerlendirilmesi için multifotoni mikroskopisi kullanılabilir16.
Belirli bir canlı dokuyu gözlemlemek, dokunun içindeki malzemenin değişikliklerini, lokalizasyonunu ve biyolojik etkilerini anlamanın etkili bir yoludur17. Bu deneyde, önemli adımlar karaciğeri solunum ve kalp atışlarına bağlı hareket eserleri sorununu çözebilen bir organ görüntüleme fikstürü ile sabitlemek ve gözlem için çoktoğraf mikroskobu kullanmaktır. Bu yöntem kullanılarak, karaciğer in vivo iç dokuları multifotoğraf mikroskop ile gözlenir ve kan damarları k…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81772133, 81902444), Guangdong Doğa Bilimleri Fonu (2020A1515010269, 2020A1515011367), Guangzhou Yurttaş Sağlık Bilim ve Teknoloji Araştırma Projesi (201803010034, 201903010072) ve Askeri Tıbbi İnovasyon Projesi (17CXZ008).
1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |