Bu deneyde, kuyruk damarına kan damarlarını lekeleyebilen Rhodamine B izotiyosiyanat-dektran enjekte edilir. Karaciğer açığa çıktıktan ve sabitlendikten sonra multifotoğraf mikroskopisi kullanılarak canlı vücuttaki derin dokuyu gözlemlemek için karaciğerin belirli bir kısmı seçilebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare Karaciğer Dokusunda Damarların Multifotoğraf Mikroskobik Gözlemi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Fare karaciğer dokusunun intravasküler dinamiklerini gözlemlemek, fare karaciğerinin doku ile ilgili hastalıkları hakkında daha derinlemesine gözlemler ve çalışmalar yapmamızı sağlar. Bir fareye kan damarlarını lekeleyebilecek bir boya enjekte edilir. Fare karaciğerini in vivo olarak gözlemlemek için, bir çerçeveye maruz kalır ve sabitlenir. Karaciğer dokusundaki kan damarlarının iki ve üç boyutlu görüntüleri çoktoğraf mikroskop kullanılarak elde edilir. Seçilen yerlerdeki dokuların görüntüleri, uzun süreli değişiklikleri gözlemlemek için sürekli olarak elde edilir; karaciğer dokularındaki kan damarlarının dinamik değişimleri de gözlenir. Multifotoğraf mikroskopisi, derin doku bölümlerinde veya organlarda hücre ve hücre fonksiyonlarını gözlemlemek için kullanılan bir yöntemdir. Multifotoğraf mikroskopisi doku mikroyapısına duyarlıdır ve biyolojik dokuların yüksek mekansal çözünürlükte in vivo olarak görüntülenmesini sağlayarak kuruluşun biyokimyasal bilgilerini yakalama olanağı sağlar. Multifotoğraf mikroskopisi karaciğerin bir kısmını gözlemlemek için kullanılır, ancak görüntüyü daha kararlı hale getirmek için karaciğeri sabitlemek sorunludur. Bu deneyde, karaciğeri düzeltmek ve mikroskop altında karaciğerin daha istikrarlı bir görüntüsünü elde etmek için özel bir vakum emme kabı kullanılır. Ek olarak, bu yöntem, bu tür maddeleri boyalarla işaretleyerek karaciğerdeki belirli maddelerin dinamik değişikliklerini gözlemlemek için kullanılabilir.
Giriş
Kan damarları insan vücudunun çeşitli organ dokuları için besin sağlayabilir ve madde alışverişi yapabilir. Aynı zamanda, birçok sitokin, hormon, ilaç ve hücre de belirli yerlere damar nakli yoluyla çalışır. Karaciğer dokusundaki damar değişikliklerinin gözlemlenmesi, karaciğer dokusundaki kan akışının dağılımını ve maddelerin taşınmasını anlamaya yardımcı olabilir ve bazı damarla ilgili hastalıkların analizine yardımcı olabilir1,2.
Farelerde karaciğerin kan damarlarını gözlemlemenin birçok yolu vardır. Bunlar arasında optik mikroskopinin opak vasküler dokuyu gözlemlemede birçok sın....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan bakım ve prosedürleri, heath ve refah için Çin Nanfang Hastanesi politikalarına uygundu (uygulama No: NFYY-2019-73).
1. Fare hazırlığı
- Fareyi uyuştur.
- Bir şırıngamda sodyum pentobarbital (50 mg/kg) hazırlayın.
- Fareyi (8 haftalık erkek C57BL/6) sol elle tutun, böylece karnı yukarı bakacak ve başı kuyruğundan daha düşük olacaktır. Karın derisini% 75 alkolle dezenfekte edin.
- Şırıngayı sağ elde tutarak, karın beyaz çizgisini iğne ile cildin sağ tarafına hafifçe 3-5 mm delin. Şırınga iğnesinin ve cildin 45° açıyla olduğundan emin olun, pentobarbital'ı yavaşça karın boşluğuna enjekte edin. Tıraş....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Karaciğerdeki kan damarlarının dağılımı, multifotoğraf mikroskopisi kullanılarak elde edilen Şekil 1'degörülebilir. Kan damarı, bir gövdeden yayılan dalların çoğulluğuna ayrılır ve çevredeki alana dağıtılır. Kan damarının dış çevresi kırmızı, iç boşluğu karanlık ve içinde birçok şey var. Görüntü ne kadar netse, gözlem düzlemine o kadar yakın olur. Ayrıca etrafta bazı kırmızı lekeler vardır, muhtemelen boya diğer maddeleri lekelamak için çevredeki dokuya nüfuz ettiği için. Video 1
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Belirli bir canlı dokuyu gözlemlemek, dokunun içindeki malzemenin değişikliklerini, lokalizasyonunu ve biyolojik etkilerini anlamanın etkili bir yoludur17. Bu deneyde, önemli adımlar karaciğeri solunum ve kalp atışlarına bağlı hareket eserleri sorununu çözebilen bir organ görüntüleme fikstürü ile sabitlemek ve gözlem için çoktoğraf mikroskobu kullanmaktır. Bu yöntem kullanılarak, karaciğer in vivo iç dokuları multifotoğraf mikroskop ile gözlenir ve kan damarları konumlarını ve üç boyutlu yapıların.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81772133, 81902444), Guangdong Doğa Bilimleri Fonu (2020A1515010269, 2020A1515011367), Guangzhou Yurttaş Sağlık Bilim ve Teknoloji Araştırma Projesi (201803010034, 201903010072) ve Askeri Tıbbi İnovasyon Projesi (17CXZ008).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 mL şırınga x 2 | Hunan Pinan Tıbbi Cihazlar Teknolojisi | YA0551 | |
| 5 W ısıtma yastığı | BiolinkOptics Teknolojisi | BL336 | |
| %75 mutlak etanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Emici pamuk topu | Sağlıklı Sanitasyon Krallığı | ||
| Fare cerrahi aleti | RWD Yaşam Bilimleri | SP0001-G | Makas ve cımbız dahil |
| Multifoton mikroskobu | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ görüntüleme fikstürü | BiolinkOptics Teknolojisi | BL336 | Vantuz, hortum, negatif basınç pompası ve braket dahil |
| Rhodamine B izotiyosiyanat– Dextran | Sigma | R9379 | |
| Tıraş makinesi | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodyum pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
Kaynaklar
- Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
- Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report. Medicine (Baltimore)
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
