Il saggio ex vivo descritto in questo studio utilizzando estratti di omogenato intestinale e colorazione ad immunofluorescenza rappresenta un nuovo metodo per esaminare la morfogenesi iftale degli albicani Candida nel tratto GASTROINTESTINALe. Questo metodo può essere utilizzato per indagare i segnali ambientali che regolano la transizione morfogenetica nell'intestino.
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Articolo metodologico
Un saggio ex vivo per studiare Candida albicans Morphogenesi ifale nel tratto gastrointestinale
In questo articolo
Sommario
Abstract
La morfogenesi ifobica candida albicans nel tratto gastrointestinale (IG) è strettamente controllata da vari segnali ambientali e svolge un ruolo importante nella diffusione e nella patogenesi di questo patogeno fungino opportunistico. Tuttavia, i metodi per visualizzare l'ife fungina nel tratto GASTROINTESTINAL in vivo sono impegnativi che limita la comprensione dei segnali ambientali nel controllo di questo processo di morfogenesi. Il protocollo qui descritto dimostra un nuovo metodo ex vivo per la visualizzazione della morfogenesi ifale negli estratti di omogenato intestinale. Utilizzando un saggio ex vivo, questo studio dimostra che il contenuto di cecal da topi trattati con antibiotici, ma non da topi di controllo non trattati, promuove la morfogenesi ifale C. albicans nel contenuto intestinale. Inoltre, l'aggiunta di gruppi specifici di metaboliti intestinali al contenuto di cecal da topi trattati con antibiotici regola in modo differenziato la morfogenesi ifogenesi ex vivo. Nel complesso, questo protocollo rappresenta un nuovo metodo per identificare e indagare i segnali ambientali che controllano la morfogenesi ifale di C. albicans nel tratto GASTROINTESTINALe.
Introduzione
Candida albicans è un patogeno fungino opportunistico e polimorfico che normalmente è commensale, ma può subire un cambiamento morfologico in una forma virulento in grado di causare infezioni potenzialmente letali in individui immunocompromati1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,
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Protocollo
Tutti i protocolli sugli animali sono stati approvati dal Midwestern University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) come descritto primadel 57. Il Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali della Midwest University ha approvato questo studio nell'ambito del protocollo MWU IACUC #2894. Le politiche di assistenza agli animali del MWU seguono la politica del Servizio sanitario pubblico (PHS) sulla cura e l'uso umano degli animali da laboratorio e le politiche stabilite nella legge sul benessere degli animali (AWA).
1. I topi studiano il protocollo standard
- Utilizzare topi C57BL/6J....
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Risultati
Questi risultati, insieme ai precedenti risultati del laboratorio Thangamani60, indicano che quando C. albicans viene coltivato ex vivo in estratti di omogenato intestinale prelevati dallo stomaco, dall'intestino tenue e dall'intestino crasso di controllo non trattato e topi trattati con antibiotici, C. albicans si sviluppa generalmente con una morfologia del lievito(figura 1B). Tuttavia, se coltivato nell'estratto cecale di topi trattati con antibio.......
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Discussione
Il metodo qui descritto presenta un nuovo modo per indagare l'effetto degli impatti antibiotici, dietetici, xenobiotici e terapeutici sulla morfogenesi ifale di C. albicans nel tratto GASTROINTESTINALe. Poiché la maggior parte delle infezioni sistemiche proviene dal trattogastrointestinale 21,22,23,24,25,26,
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti o altri conflitti di interesse.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono le risorse e il supporto della midwest University Cellular and Molecular Core Research facility.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 1 - 10 µ L Punte per pipette | Fisher Scientific | 02-707-454 | Misc |
| 100 - 1000 µ L Punte per pipette | Fisher Scientific | 02-707-400 | Misc |
| 20 - 200 µ L Punte per pipette | Fisher Scientific | 02-707-451 | Acido misc |
| 2-metilbutirrico | Sigma | 193070-25G | composto inibitorio dell'ifa |
| 488 capra anti-coniglio | IgG Invitrogen (Fisher) | A11008 | IF Colorazione secondaria ab |
| Agar | Fisher | BP1423-500 | YPD componente agar |
| Microscopio per immagini automatizzato | Keyence | BZX700 | |
| Candida Albicans Anticorpo | Invitrogen (Fisher) | PA1-27158 | IF Colorazione primaria ab |
| cefoperazone | Cayman | 16113 | antibiotico |
| acido desossicolico | Sigma | 30960 | composto inibitorio dell'ifa |
| D-glucosio | Fisher | D16-500 | pinza del composto che promuove l'ifa |
| Fisher | 08-885 | ||
| acido lattico | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | composto inibitorio dell'ifa |
| acido litocolico | Sigma | L6250-10G | composto inibitorio dell'ifa |
| acido palmitico | Sigma | P5585-10G | composto inibitorio dell'ifa |
| Paraformaldeide | Alfa Aesar | A11313 | IF Fissativo colorante |
| Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), 10x | Alfa Aesar | J62692 | PBS componente |
| acido p-tolilacetico | SCBT | sc-257959 | composto inibitorio dell'ifa |
| acido sebacico | Sigma | 283258-250G | composto inibitorio dell'ifa |
| forbici affilate | Fisher | 28301 | |
| acqua sterile Milli-Q | N/A | N/A | Brodo |
| YPD | BD Biosciences | 242810 | Componente di agar YPD |
Riferimenti
- Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
- Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis o....
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Ristampe e permessi
