השתלה תת-רשתית של רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע עובריים אנושיים במודל של בעלי חיים גדולים אצל חתולים
Summary
מוצגת כאן טכניקה כירורגית להשתלת רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) בחלל התת-רשתית של מודל בעל חיים גדול.
Abstract
מצבים ניווניים ברשתית (RD) הקשורים לאובדן קולטני אור כגון ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD), רטיניטיס פיגמנטוזה (RP) ואמאורוזיס מולד Leber (LCA) גורמים לאובדן ראייה מתקדם ומתיש. יש צורך בלתי מסופק בטיפולים שיכולים לשחזר את הראייה לאחר פוטורצפטורים אבדו. השתלת רקמת רשתית (אורגנואידים) שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) בחלל התת-רשתית של עין עם RD מתקדם מביאה יריעות רקמת רשתית עם אלפי פוטורצפטורים בריאים ללא מוטציות ויש לה פוטנציאל לטפל ברוב/כל המחלות המסנוורות הקשורות לניוון קולטני אור עם פרוטוקול מאושר אחד. השתלת רקמת רשתית עוברית בחלל התת-רשתית של מודלים של בעלי חיים ואנשים עם RD מתקדם פותחה בהצלחה אך אינה יכולה לשמש כטיפול שגרתי בשל חששות אתיים ואספקת רקמות מוגבלת. מודלים של ניוון רשתית תורשתי בעין גדולה (IRD) הם בעלי ערך לפיתוח טיפולים לשיקום ראייה תוך שימוש בגישות כירורגיות מתקדמות להשתלת תאים/רקמות רשתית בחלל התת-רשתית. הדמיון בגודל כדור הארץ, ובפיזור קולטני האור (למשל, נוכחות של אזור מרכזי דמוי מקולה) והזמינות של מודלי IRD המסכמים מקרוב IRD אנושי יאפשרו תרגום מהיר של טיפול מבטיח למרפאה. מוצגת כאן טכניקה כירורגית של השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC בחלל התת-רשתית של מודל בעל חיים גדול, המאפשרת הערכה של גישה מבטיחה זו במודלים של בעלי חיים.
Introduction
מיליוני אנשים ברחבי העולם מושפעים מניוון רשתית (RD) עם ליקוי ראייה או עיוורון כתוצאה מכך הקשורים לאובדן קולטני האור קולטי האור (PRs). ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD) הוא גורם עיקרי לעיוורון הנובע משילוב של גורמי סיכון גנטיים וגורמים סביבתיים / אורח חיים. בנוסף, מעל 200 גנים ואתרים נמצאו כגורמים ל- RD תורשתי (IRD)1. רטיניטיס פיגמנטוזה (RP), ה-IRD הנפוץ ביותר, הוא הטרוגני מבחינה גנטית עם יותר מ-3,000 מוטציות גנטיות בכ-70 גנים המדווחים 2,3,4. Leber Congenital Amaurosis (LCA), הגורם לעיוורון בילדות הוא גם הטרוגני גנטית 5,6. טיפול בהגדלת גנים פותח ונמצא בניסויים קליניים לטיפול במספר קטן של IRDs 3,7. עם זאת, יש לפתח טיפול נפרד לטיפול בכל צורה גנטית נפרדת של IRD ובכך לטפל רק בתת-קבוצה קטנה של חולים. יתר על כן, הגדלת גנים מסתמכת על נוכחות של אוכלוסייה של פוטורצפטורים הניתנים להצלה ולכן אינה ישימה לניוון מתקדם.
יש, אם כן, צורך קליני דחוף ועדיין לא מסופק בפיתוח טיפולים המטפלים ומטפלים ב- RDs מתקדמים ובעיוורון עמוק עד סופני. במהלך 2 העשורים האחרונים שתלים נוירו-תותבים פותחו ונבדקו במודלים גדולים של בעלי חיים, כגון החתול, לפני השימוש האנושי 8,9,10,11,12,13,14. כמו כן, ב-20 השנים האחרונות פותחו טיפולים בתחליפי רשתית באמצעות יריעות רשתית עוברית או אפילו בוגרת של יונקים שהושתלו באופן תת-רשתי 15,16,17,18,19,20,21,22 ואף נבדקו בהצלחה בחולי RD 23,24,25. שתי הגישות משתמשות ברעיון של החדרת חיישנים חדשים (פוטודיודות סיליקון פוטו-וולטאיות במקרה של התקנים נוירו-תותבים26,27, ופוטורצפטורים בריאים ללא מוטציות המאורגנים ביריעות, במקרה של השתלת יריעות רשתית) לרשתית עם PRs מנוונים. מחקרים אחרונים חקרו את השימוש בגישות מבוססות תאי גזע כגון השתלת תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) שמקורם באבות רשתית28,29, hPSC-photoreceptors 30 ואורגנואידים hPSC-רשתית31,32,33. אורגנואידים ברשתית מאפשרים היווצרות רקמת רשתית בצלוחית וגזירה של יריעות קולטי אור עם אלפי PRs נטולי מוטציות, הדומים לשכבת קולטי האור ברשתית העובר האנושית המתפתחת 34,35,36,37,38,39,40 . השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים) בחלל התת-רשתית של חולים עם תנאי RD היא אחת הגישות החדשות והמבטיחות לטיפול תאי ניסיוני, הננקטת על ידי מספר צוותים 31,32,41,42. בהשוואה להשתלת תרחיף התא (של פוטורצפטורים צעירים או אבות רשתית), יריעות מושתלות של פוטורצפטורים עובריים הוכחו כמביאות לשיפור בראייה בניסויים קליניים23,24.
הפרוטוקול המוצג כאן מתאר, בפירוט, הליך השתלה למסירה תת-רשתית של אורגנואידים רשתית שלמים (במקום שולי אורגנואיד33,41) כדרך טובה יותר להציג יריעות רשתית שלמות עם PRs, כדי להגדיל את הישרדות השתל ולשפר את שימור היריעה. למרות שהליכים להחדרת חתיכה שטוחה של רשתית אנושית וגם מדבקות RPE פותחו 43,44,45, השתלת שתלים תלת ממדיים גדולים יותר לא נחקרה. אורגנואידים ברשתית שמקורם בתאי גזע מספקים מקור בלתי נדלה של יריעות קולטי אור לפיתוח טכנולוגיות שיקום ראייה, חופשיים ממגבלות אתיות, ונחשבים למקור מצוין של רקמת רשתית אנושית לטיפולים המתמקדים בטיפול ב- RD מתקדם ובעיוורון סופני46. פיתוח שיטות כירורגיות להשתלה תת-רשתית מדויקת של אורגנואידים ברשתית עם פגיעה מינימלית בנישת הרשתית המארחת (רשתית עצבית, אפיתל פיגמנט רשתית וכלי דם רשתית וכורואידיים) הוא אחד הצעדים הקריטיים לקידום טיפול כזה לקראת יישומים קליניים31,32. מודלים גדולים של בעלי חיים כגון חתולים, כלבים, חזירים וקופים הוכיחו את עצמם כמודלים טובים לחקר שיטות מסירה כירורגיות, כמו גם כדי להדגים את הבטיחות של יריעות רקמה מושתלות (תאי אפיתל פיגמנט ברשתית (RPE) ולחקור את השימוש באורגנואידים 41,44,45,47,48,49,50 . לעין החיה הגדולה יש גודל גלובוס דומה לאדם, כמו גם אנטומיה דומה כולל נוכחות של אזור בעל צפיפות פוטורצפטור גבוהה, כולל מדוכים (האזור centralis), הדומה למקולה האנושית 6,51,52.
בכתב יד זה מתוארת טכניקה להשתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים) בחלל התת-רשתי של מודלים של חיות גדולות של חתולים (הן חתולי בר והן חתולי CrxRdy/+), אשר יחד עם תוצאות יעילות מבטיחות32,53 בונה בסיס לפיתוח נוסף של טיפול ניסיוני כזה לקראת יישומים קליניים לטיפול במצבי RD.
Protocol
Representative Results
Discussion
השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים ברשתית) בחלל התת-רשתית היא גישה ניסיונית מבטיחה להשבת הראייה למחלות ניווניות של הרשתית בשלב מאוחר הנגרמות על ידי מוות של תאי PR (עיוורון עמוק או סופני). הגישה המוצגת מתבססת על טיפול ניסיוני מוקדם יותר שפותח ונבדק בהצלחה המבוסס על השתלה תת-רשתית של פי…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו מומנה על ידי NEI Fast-Track SBIR grant R44-EY027654-01A1 ומענק SBIR 3 R44 EY 027654 – 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; ד”ר פיטרסן-ג’ונס הוא co-PI). המחברים רוצים להודות לגב’ ג’ניס קרובין (MSU RATTS) על עזרתה בהרדמה ובטיפול כללי בבעלי החיים שנכללו במחקר זה, כמו גם על עזרתה בהכנה / עיקור של מכשירים כירורגיים. המחברים רוצים להודות לד”ר פייג’ וינקלר על העזרה בקבלת האורגנואידים והצבתם במדיה ביום שלפני ההשתלה ועל העזרה ביום ההשתלה. המחברים אסירי תודה גם למר רנדי גרצ’ר (LCTX) על משלוח חרוץ של אורגנואידים ברשתית, הרכבת השולח והורדת רשומות טמפרטורה ומתח G לאחר כל משלוח. עבודה זו בוצעה בזמן שהסופר איגור נסונקין הועסק על ידי Biotime (כיום Lineage).
Materials
| 0.22 µm pore syringe filter with PES membrane | Cameo | NA | can be found by various suppliers |
| 23G subretinal injector with extendable 41 G cannula | DORC | 1270.EXT | |
| 250 µL hamilton gas tight luer lock syringe | Hamilton | NA | can be found by various suppliers |
| 6-0 Silk suture | Ethicon | 707G | |
| 6-0/7-0 polyglactin suture | Ethicon | J570G | |
| Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject) | Henry Schein Animal Health | NA | can be found by various suppliers |
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | Par Pharmaceutical | NA | can be found by various suppliers |
| cSLO + SD-OCT | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA+ OCT | |
| Cyclosporine | Novartis | NA | can be found by various suppliers |
| Dexamethasone 2mg/mL (Azium) | Vetone | NA | can be found by various suppliers |
| Doxycyline 25mg/5mL | Cipla | NA | can be found by various suppliers |
| Fatal Plus solution (pentobarnital solution) | Vortech | NA | can be found by various suppliers |
| Gentamicin 20mg/2mL | Hospira | NA | can be found by various suppliers |
| Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing | World Precision Instruments | TW150-4 | |
| Methylprednisolone actetate 40 mg/mL | Pfizer | NA | can be found by various suppliers |
| Microscope | Zeiss | NA | |
| OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound) | Sakura | 4583 | |
| Olympic Vac-Pac Size 23 | Natus | NA | can be found by various suppliers |
| Paraformaldehyde 16% solution | EMS | 15719 | |
| Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution | Akorn | NA | can be found by various suppliers |
| Prednisolone 15mg/5mL | Akorn | NA | can be found by various suppliers |
| Propofol 5000mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28) | Zoetis | NA | can be found by various suppliers |
| RetCam II video fundus camera | Clarity Medical Systems | NA | can be found by various suppliers |
| Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40) | Bristol -Myers Squibb Company | NA | can be found by various suppliers |
| Tropicamide 1% ophthalmic solution | Akorn | NA | can be found by various suppliers |
| Vitrectomy 23G port | Alcon | Accurus systems | |
| Vitrectomy machine | Alcon | Accurus systems | |
| Vitreo-retinal vertical 80° scissors with squeeze handle | Frimen | FT170206T |
References
- Veleri, S., et al. Biology and therapy of inherited retinal degenerative disease: insights from mouse models. Disease Models and Mechanisms. 8 (2), 109-129 (2015).
- Dias, M. F., et al. Molecular genetics and emerging therapies for retinitis pigmentosa: Basic research and clinical perspectives. Progress in Retinal and Eye Research. 63, 107-131 (2018).
- Petersen-Jones, S. M., et al. Patients and animal models of CNGbeta1-deficient retinitis pigmentosa support gene augmentation approach. The Journal of Clinical Investigation. 128 (1), 190-206 (2018).
- Winkler, P. A., et al. A large animal model for CNGB1 autosomal recessive retinitis pigmentosa. PLoS One. 8 (8), 72229 (2013).
- Occelli, L. M., Tran, N. M., Narfstrom, K., Chen, S., Petersen-Jones, S. M. CrxRdy Cat: A large animal model for CRX-associated leber congenital amaurosis. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (8), 3780-3792 (2016).
- Mowat, F. M., et al. Early-onset progressive degeneration of the area centralis in RPE65-deficient dogs. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (7), 3268-3277 (2017).
- Occelli, L. M., et al. Gene supplementation rescues rod function and preserves photoreceptor and retinal morphology in dogs, leading the way towards treating human PDE6A-retinitis pigmentosa. Human Gene Therapy. 28 (12), 1189-1201 (2017).
- Eckhorn, R., et al. Visual resolution with retinal implants estimated from recordings in cat visual cortex. Vision Research. 46 (17), 2675-2690 (2006).
- Pardue, M. T., et al. Status of the feline retina 5 years after subretinal implantation. Journal of Rehabilitation Research and Development. 43 (6), 723-732 (2006).
- Chow, A. Y., et al. Subretinal implantation of semiconductor-based photodiodes: durability of novel implant designs. Journal of Rehabilitation Research and Development. 39 (3), 313-321 (2002).
- Volker, M., et al. In vivo assessment of subretinally implanted microphotodiode arrays in cats by optical coherence tomography and fluorescein angiography. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 242 (9), 792-799 (2004).
- Chow, A. Y., et al. Implantation of silicon chip microphotodiode arrays into the cat subretinal space. Institute of Electrical and Electronics Engineering Transactions on Neural Systems and Rehabilitation Engineering. 9 (1), 86-95 (2001).
- Sachs, H. G., et al. Subretinal implantation and testing of polyimide film electrodes in cats. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 243 (5), 464-468 (2005).
- Villalobos, J., et al. A wide-field suprachoroidal retinal prosthesis is stable and well tolerated following chronic implantation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (5), 3751-3762 (2013).
- Bragadottir, R., Narfstrom, K. Lens sparing pars plana vitrectomy and retinal transplantation in cats. Veterinary Ophthalmology. 6 (2), 135-139 (2003).
- Narfstrom, K., Holland Deckman, K., Menotti-Raymond, M. The domestic cat as a large animal model for characterization of disease and therapeutic intervention in hereditary retinal blindness. Journal of Ophthalmology. , 906943 (2011).
- Seiler, M. J., et al. Functional and structural assessment of retinal sheet allograft transplantation in feline hereditary retinal degeneration. Veterinary Ophthalmology. 12 (3), 158-169 (2009).
- Aramant, R. B., Seiler, M. J. Transplanted sheets of human retina and retinal pigment epithelium develop normally in nude rats. Experimental Eye Research. 75 (2), 115-125 (2002).
- Lin, B., McLelland, B. T., Mathur, A., Aramant, R. B., Seiler, M. J. Sheets of human retinal progenitor transplants improve vision in rats with severe retinal degeneration. Experimental Eye Research. 174, 13-28 (2018).
- Seiler, M. J., Aramant, R. B. Cell replacement and visual restoration by retinal sheet transplants. Progress in Retinal and Eye Research. 31 (6), 661-687 (2012).
- Seiler, M. J., et al. Vision recovery and connectivity by fetal retinal sheet transplantation in an immunodeficient retinal degenerate rat model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (1), 614-630 (2017).
- Lorach, H., et al. Transplantation of mature photoreceptors in rodents with retinal degeneration. Translational Vision Science and Technology. 8 (3), 30 (2019).
- Radtke, N. D., et al. Vision improvement in retinal degeneration patients by implantation of retina together with retinal pigment epithelium. American Journal of Ophthalmology. 146 (2), 172-182 (2008).
- Radtke, N. D., Aramant, R. B., Seiler, M. J., Petry, H. M., Pidwell, D. Vision change after sheet transplant of fetal retina with retinal pigment epithelium to a patient with retinitis pigmentosa. Archives of Ophthalmology. 122 (8), 1159-1165 (2004).
- Radtke, N. D., Seiler, M. J., Aramant, R. B., Petry, H. M., Pidwell, D. J. Transplantation of intact sheets of fetal neural retina with its retinal pigment epithelium in retinitis pigmentosa patients. American Journal of Ophthalmology. 133 (4), 544-550 (2002).
- Lorach, H., Palanker, E. Retinal prostheses: High-resolution photovoltaic implants. Medical Science (Paris). 31 (10), 830-831 (2015).
- Mathieson, K., et al. Photovoltaic retinal prosthesis with high pixel density. Nature Photonics. 6 (6), 391-397 (2012).
- Banin, E., et al. Retinal incorporation and differentiation of neural precursors derived from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24 (2), 246-257 (2006).
- Hambright, D., et al. Long-term survival and differentiation of retinal neurons derived from human embryonic stem cell lines in un-immunosuppressed mouse retina. Molecular Vision. 18, 920-936 (2012).
- Lamba, D. A., Gust, J., Reh, T. A. Transplantation of human embryonic stem cell-derived photoreceptors restores some visual function in Crx-deficient mice. Cell Stem Cell. 4 (1), 73-79 (2009).
- Singh, R. K., Occelli, L. M., Binette, F., Petersen-Jones, S. M., Nasonkin, I. O. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in the subretinal space of the cat eye. Stem Cells and Development. 28 (17), 1151-1166 (2019).
- McLelland, B. T., et al. Transplanted hESC-derived retina organoid sheets differentiate, integrate, and improve visual function in retinal degenerate rats. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 59 (6), 2586-2603 (2018).
- Assawachananont, J., et al. Transplantation of embryonic and induced pluripotent stem cell-derived 3D retinal sheets into retinal degenerative mice. Stem Cell Reports. 2 (5), 662-674 (2014).
- Eiraku, M., et al. Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture. Nature. 472 (7341), 51-56 (2011).
- Nakano, T., et al. Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs. Cell Stem Cell. 10 (6), 771-785 (2012).
- Singh, R. K., et al. Characterization of three-dimensional retinal tissue derived from human embryonic stem cells in adherent monolayer cultures. Stem Cells and Development. 24 (23), 2778-2795 (2015).
- Wahlin, K. J., et al. Photoreceptor outer segment-like structures in long-term 3D retinas from human pluripotent stem cells. Scientific Reports. 7 (1), 766 (2017).
- Zhong, X., et al. Generation of three-dimensional retinal tissue with functional photoreceptors from human iPSCs. Nature Communications. 5, 4047 (2014).
- Capowski, E. E., et al. Reproducibility and staging of 3D human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines. Development. 146 (1), 171686 (2019).
- Meyer, J. S., et al. Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (39), 16698-16703 (2009).
- Shirai, H., et al. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in two primate models of retinal degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (1), 81-90 (2016).
- Mandai, M., et al. iPSC-derived retina transplants improve vision in rd1 end-stage retinal-degeneration mice. Stem Cell Reports. 8 (4), 1112-1113 (2017).
- Scruggs, B. A., et al. Optimizing donor cellular dissociation and subretinal injection parameters for stem cell-based treatments. Stem Cells Translational Medicine. 8 (8), 797-809 (2019).
- Singh, R., et al. Pluripotent stem cells for retinal tissue engineering: Current status and future prospects. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (4), 463-483 (2018).
- Sharma, R., et al. Clinical-grade stem cell-derived retinal pigment epithelium patch rescues retinal degeneration in rodents and pigs. Science Translational Medicine. 11, 475 (2019).
- Ghosh, F., Engelsberg, K., English, R. V., Petters, R. M. Long-term neuroretinal full-thickness transplants in a large animal model of severe retinitis pigmentosa. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245 (6), 835-846 (2007).
- Koss, M. J., et al. Subretinal implantation of a monolayer of human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium: a feasibility and safety study in Yucatan minipigs. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (8), 1553-1565 (2016).
- da Cruz, L., et al. Phase 1 clinical study of an embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium patch in age-related macular degeneration. Nature Biotechnology. 36 (4), 328-337 (2018).
- Kashani, A. H., et al. Subretinal implantation of a human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer in a porcine model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1185, 569-574 (2019).
- Kashani, A. H., et al. Surgical method for implantation of a biosynthetic retinal pigment epithelium monolayer for geographic atrophy: Experience from a Phase 1/2a study. Ophthalmology. Retina. 4 (3), 264-273 (2020).
- Petersen-Jones, S. M., Komaromy, A. M. Dog models for blinding inherited retinal dystrophies. Human Gene Therapy. Clinical Development. 26 (1), 15-26 (2015).
- Beltran, W. A., et al. Canine retina has a primate fovea-like bouquet of cone photoreceptors which is affected by inherited macular degenerations. PLoS One. 9 (3), 90390 (2014).
- Nasonkin, I. O., et al. Transplantation of human embryonic stem cell derived retinal tissue in the subretinal space of immunodeficient rats with retinal degeneration (RD). Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (9), 3109 (2019).
- Singh, R. K., et al. Development of a protocol for maintaining viability while shipping organoid-derived retinal tissue. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (2), 388-394 (2020).
- Petersen-Jones, S. M. Drug and gene therapy of hereditary retinal disease in dog and cat models. Drug Discovery Today. Disease Models. 10 (4), 215-223 (2013).
- Machemer, R., Buettner, H., Norton, E., Parel, J. M. Vitrectomy: a pars plana approach. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 75 (4), 813-820 (1972).
- Machemer, R., Norton, E. W. Vitrectomy, a pars plana approach. II. Clinical experience. Modern Problems in Ophthalmology. 10, 178-185 (1972).
- Machemer, R., Parel, J., Norton, E. Vitrectomy: a pars plana approach. Technical improvements and further results. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 76 (2), 462-466 (1972).
- O’Malley, C., Heintz, R. M. Vitrectomy with an alternative instrument system. Annals of Ophthalmology. 7 (4), 585-588 (1975).
- Machemer, R., Hickingbotham, D. The three-port microcannular system for closed vitrectomy. American Journal of Ophthalmology. 100 (4), 590-592 (1985).
- Petersen-Jones, S. M., et al. AAV retinal transduction in a large animal model species: comparison of a self-complementary AAV2/5 with a single-stranded AAV2/5 vector. Molecular Vision. 15, 1835-1842 (2009).
- Annear, M. J., et al. Successful gene therapy in older Rpe65-deficient dogs following subretinal injection of an adeno-associated vector expressing RPE65. Human Gene Therapy. 24 (10), 883-893 (2013).
- Beltran, W. A., et al. Optimization of retinal gene therapy for X-linked retinitis pigmentosa due to RPGR mutations. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 25 (8), 1866-1880 (2017).
- Bainbridge, J. W. B., et al. Long-term effect of gene therapy on Leber’s Congenital Amaurosis. The New England Journal of Medicine. 372 (20), 1887-1897 (2015).
