JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Neuroscience

Subretinal transplantasjon av humant embryonalt stamcelleavledet retinalvev i en katt stor dyremodell

Published: August 05, 2021
doi:
10.3791/61683
, , , , ,
1College of Veterinary Medicine, Department of Small Animal Clinical Sciences,Michigan State University, 2Lineage Cell Therapeutics, Inc.

Summary

Presentert her er en kirurgisk teknikk for transplantasjon av humant pluripotent stamcelle (hPSC) -avledet retinalt vev inn i det subretinale rommet til en stor dyremodell.

Abstract

Retinal degenerative (RD) forhold assosiert med fotoreceptortap som aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD), retinitis pigmentosa (RP) og Leber medfødt amaurose (LCA) forårsaker progressivt og svekkende synstap. Det er et udekket behov for terapier som kan gjenopprette syn når fotoreceptorer har gått tapt. Transplantasjon av humant pluripotent stamcelle (hPSC) -avledet retinalvev (organoider) inn i det subretinale rommet i et øye med avansert RD bringer retinale vevsark med tusenvis av sunne mutasjonsfrie fotoreceptorer og har potensial til å behandle de fleste / alle blindende sykdommer forbundet med fotoreceptordegenerasjon med en godkjent protokoll. Transplantasjon av føtal retinalvev i det subretinale rommet til dyremodeller og personer med avansert RD har blitt utviklet vellykket, men kan ikke brukes som rutinemessig terapi på grunn av etiske bekymringer og begrenset vevsforsyning. Store øyearvelige retinal degenerasjon (IRD) dyremodeller er verdifulle for å utvikle visjonsrestaureringsterapier ved hjelp av avanserte kirurgiske tilnærminger for å transplantere retinale celler / vev inn i subretinalrommet. Likhetene i klodestørrelse og fotoreseptorfordeling (f.eks. Tilstedeværelse av makulalignende regionområde centralis) og tilgjengeligheten av IRD-modeller som nøye rekapitulerer human IRD, vil lette rask oversettelse av en lovende terapi til klinikken. Presentert her er en kirurgisk teknikk for transplantasjon av hPSC-avledet retinalvev i subretinalrommet til en stor dyremodell som tillater vurdering av denne lovende tilnærmingen i dyremodeller.

Introduction

Millioner av mennesker rundt om i verden er påvirket av retinal degenerasjon (RD) med resulterende synshemming eller blindhet forbundet med tap av lysfølsomme fotoreceptorer (PR). Aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD) er en viktig årsak til blindhet som følge av en kombinasjon av genetiske risikofaktorer og miljø- / livsstilsfaktorer. I tillegg har over 200 gener og loci blitt funnet å forårsake arvelig RD (IRD) 1. Retinitis pigmentosa (RP), den vanligste IRD, er genetisk heterogen med mer enn 3000 genetiske mutasjoner i omtrent 70 gener som rapporteres 2,3,4. Leber medfødt amaurose (LCA), som forårsaker blindhet i barndommen, er også genetisk heterogen 5,6. Genforstørrelsesterapi er utviklet og er i kliniske studier for behandling av et lite antall IRDer 3,7. Imidlertid må en separat terapi utvikles for behandling av hver distinkte genetiske form for IRD og dermed bare behandle en liten undergruppe av pasienter. Videre er genforstørrelse avhengig av tilstedeværelsen av en populasjon av redningsbare fotoreceptorer og er derfor ikke anvendelig for avansert degenerasjon.

Det er derfor et presserende og ennå uoppfylt klinisk behov for utvikling av terapier som adresserer og behandler avanserte RDs og dyp til terminal blindhet. I løpet av de siste 2 tiårene har nevroprostetiske implantater blitt utviklet og testet i store dyremodeller, som katten, før menneskelig bruk 8,9,10,11,12,13,14. På samme måte har de siste 20 årene retinal erstatningsterapier som bruker ark av embryonale eller til og med modne pattedyrs retina podet subretinalt, blitt utviklet 15,16,17,18,19,20,21,22 og til og med testet vellykket hos RD-pasienter 23,24,25. Begge tilnærmingene utnytter ideen om å introdusere nye sensorer (fotovoltaiske silisiumfotodioder når det gjelder nevroproteser26,27, og sunne mutasjonsfrie fotoreceptorer organisert i ark, i tilfelle retinalarkimplantasjon) i netthinnen med degenerert PR. Nylige studier har undersøkt bruken av stamcellebaserte tilnærminger som transplantasjon av humane pluripotente stamceller (hPSC) -avledede retinale progenitorer28,29, hPSC-fotoreceptorer 30 og hPSC-retinale organoider31,32,33. Retinale organoider muliggjør dannelse av retinalt vev i en tallerken og derivasjon av fotoreseptorark med tusenvis av mutasjonsfrie PR-er, som ligner fotoreseptorlaget i den utviklende humane føtale netthinnen 34,35,36,37,38,39,40 . Transplantasjon av hPSC-avledet retinalvev (organoider) i det subretinale rommet hos pasienter med RD-tilstander er en av de nye og lovende undersøkelsescelleterapitilnærmingene, som forfølges av en rekke lag31,32,41,42. Sammenlignet med transplantasjon av cellesuspensjonen (av unge fotoreceptorer eller retinale progenitorer), ble transplanterte ark av føtale fotoreceptorer vist å resultere i synforbedringer i kliniske studier23,24.

Protokollen som presenteres her beskriver i detalj en transplantasjonsprosedyre for subretinal levering av hele retinale organoider (i stedet for organoide felger33,41) som en potensielt bedre måte å introdusere intakte retinalark med PR, for å øke transplantatoverlevelsen og forbedre arkbevaringen. Selv om prosedyrer for å introdusere et flatt stykke menneskelig retina og også RPE-patcher har blitt utviklet43,44,45, har transplantasjon av større 3D-transplantater ikke blitt undersøkt. Stamcelleavledede retinale organoider gir en uuttømmelig kilde til fotoreceptorark for å utvikle visjonsgjenopprettingsteknologier, er fri for etisk begrensning, og regnes som en utmerket kilde til humant retinalvev for terapier fokusert på behandling av avansert RD og terminal blindhet46. Utvikling av kirurgiske metoder for presis subretinal implantasjon av retinale organoider med minimal skade på vertsretinal nisje (nevral retina, retinalt pigmentepitel og retinal og koroidal vaskulatur) er et av de kritiske trinnene for å fremme slik behandling mot kliniske anvendelser31,32. Store dyremodeller som katter, hunder, griser og aper har vist seg å være gode modeller for å undersøke kirurgiske leveringsmetoder, samt å demonstrere sikkerheten til implanterte ark av vev (retinal pigmentepitel (RPE) celler) og undersøke bruken av organoider 41,44,45,47,48,49,50 . Det store dyreøyet har en lignende klodestørrelse som menneskelig, så vel som lignende anatomi, inkludert tilstedeværelsen av et område med høy fotoreseptortetthet, inkludert kjegler (området centralis), som ligner den menneskelige makulaen 6,51,52.

I dette manuskriptet beskrives en teknikk for implantasjon av hPSC-avledet retinalt vev (organoider) i det subretinale rommet til store kattemodeller (både villtype og CrxRdy/+ katter), som sammen med lovende effektresultater32,53 bygger et grunnlag for videreutvikling av slik undersøkelsesterapi mot kliniske anvendelser for å behandle RD-tilstander.

Protocol

Prosedyrer ble utført i samsvar med Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) uttalelse for bruk av dyr i oftalmisk og synsforskning. De ble også godkjent av Michigan State University Institutional Animal Care and Use Committee. Villtype og CrxRdy/+ katter fra en koloni av katter opprettholdt ved Michigan State University ble brukt i denne studien. Dyrene ble plassert under 12 timer: 12 timers lys-mørke sykluser og matet en kommersiell komplett kattediett. <p class="j…

Representative Results

Denne prosedyren muliggjør vellykket og reproduserbar implantasjon av hPSC-avledede retinale organoider i det subretinale rommet til en stor øyedyrmodell (demonstrert her ved hjelp av 2 eksempler: villtypekatter med sunne fotoreseptorer (PR) og CrxRdy / + katter med degenererende PR og netthinnen). Ved hjelp av trinnene som er angitt i figur 1 , klargjør og last de hPSC-deriverte retinale organoidene inn i borosilikatglasskanylen på injeksjonsanordningen slik…

Discussion

Implantasjon av hPSC-avledet retinalvev (retinale organoider) i det subretinale rommet er en lovende eksperimentell tilnærming for å gjenopprette visjon for sent stadium retinal degenerative sykdommer forårsaket av PR-celledød (dyp eller terminal blindhet). Den presenterte tilnærmingen bygger på en tidligere utviklet og vellykket testet eksperimentell terapi basert på subretinal poding av et stykke humant føtalt retinalvev23,24,25<sup class="xr…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbeidet ble finansiert av NEI Fast-track SBIR grant R44-EY027654-01A1 og SBIR grant 3 R44 EY 027654 – 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; Dr. Petersen-Jones er en co-PI). Forfatterne vil gjerne takke Janice Querubin (MSU RATTS) for hennes hjelp med anestesi og generell omsorg for dyrene som er inkludert i denne studien, samt hjelp med kirurgisk setting og instrumentforberedelse / sterilisering. Forfatterne vil gjerne takke Dr. Paige Winkler for hjelpen med å motta organoider og plassere dem i media dagen før implantasjonen og for hjelpen på implantasjonsdagen. Forfatterne er også takknemlige for Mr. Randy Garchar (LCTX) for flittig forsendelse av retinale organoider, montering av avsenderen og nedlasting av temperatur og G-stress-poster etter hver forsendelse. Dette arbeidet ble utført mens forfatteren Igor Nasonkin var ansatt i Biotime (nå Lineage).

Materials

0.22 µm pore syringe filter with PES membrane Cameo NA can be found by various suppliers
23G subretinal injector with extendable 41 G cannula DORC 1270.EXT
250 µL hamilton gas tight luer lock syringe Hamilton NA can be found by various suppliers
6-0 Silk suture Ethicon 707G
6-0/7-0 polyglactin suture Ethicon J570G
Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject) Henry Schein Animal Health NA can be found by various suppliers
Buprenorphine 0.3 mg/mL Par Pharmaceutical NA can be found by various suppliers
cSLO + SD-OCT Heidelberg Engineering Spectralis HRA+ OCT
Cyclosporine Novartis NA can be found by various suppliers
Dexamethasone 2mg/mL (Azium) Vetone NA can be found by various suppliers
Doxycyline 25mg/5mL Cipla NA can be found by various suppliers
Fatal Plus solution (pentobarnital solution) Vortech NA can be found by various suppliers
Gentamicin 20mg/2mL Hospira NA can be found by various suppliers
Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing World Precision Instruments TW150-4
Methylprednisolone actetate 40 mg/mL Pfizer NA can be found by various suppliers
Microscope Zeiss NA
OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound) Sakura 4583
Olympic Vac-Pac Size 23 Natus NA can be found by various suppliers
Paraformaldehyde 16% solution EMS 15719
Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution Akorn NA can be found by various suppliers
Prednisolone 15mg/5mL Akorn NA can be found by various suppliers
Propofol 5000mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28) Zoetis NA can be found by various suppliers
RetCam II video fundus camera Clarity Medical Systems NA can be found by various suppliers
Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40) Bristol -Myers Squibb Company NA can be found by various suppliers
Tropicamide 1% ophthalmic solution Akorn NA can be found by various suppliers
Vitrectomy 23G port Alcon Accurus systems
Vitrectomy machine Alcon Accurus systems
Vitreo-retinal vertical 80° scissors with squeeze handle Frimen FT170206T
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Veleri, S., et al. Biology and therapy of inherited retinal degenerative disease: insights from mouse models. Disease Models and Mechanisms. 8 (2), 109-129 (2015).
  2. Dias, M. F., et al. Molecular genetics and emerging therapies for retinitis pigmentosa: Basic research and clinical perspectives. Progress in Retinal and Eye Research. 63, 107-131 (2018).
  3. Petersen-Jones, S. M., et al. Patients and animal models of CNGbeta1-deficient retinitis pigmentosa support gene augmentation approach. The Journal of Clinical Investigation. 128 (1), 190-206 (2018).
  4. Winkler, P. A., et al. A large animal model for CNGB1 autosomal recessive retinitis pigmentosa. PLoS One. 8 (8), 72229 (2013).
  5. Occelli, L. M., Tran, N. M., Narfstrom, K., Chen, S., Petersen-Jones, S. M. CrxRdy Cat: A large animal model for CRX-associated leber congenital amaurosis. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (8), 3780-3792 (2016).
  6. Mowat, F. M., et al. Early-onset progressive degeneration of the area centralis in RPE65-deficient dogs. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (7), 3268-3277 (2017).
  7. Occelli, L. M., et al. Gene supplementation rescues rod function and preserves photoreceptor and retinal morphology in dogs, leading the way towards treating human PDE6A-retinitis pigmentosa. Human Gene Therapy. 28 (12), 1189-1201 (2017).
  8. Eckhorn, R., et al. Visual resolution with retinal implants estimated from recordings in cat visual cortex. Vision Research. 46 (17), 2675-2690 (2006).
  9. Pardue, M. T., et al. Status of the feline retina 5 years after subretinal implantation. Journal of Rehabilitation Research and Development. 43 (6), 723-732 (2006).
  10. Chow, A. Y., et al. Subretinal implantation of semiconductor-based photodiodes: durability of novel implant designs. Journal of Rehabilitation Research and Development. 39 (3), 313-321 (2002).
  11. Volker, M., et al. In vivo assessment of subretinally implanted microphotodiode arrays in cats by optical coherence tomography and fluorescein angiography. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 242 (9), 792-799 (2004).
  12. Chow, A. Y., et al. Implantation of silicon chip microphotodiode arrays into the cat subretinal space. Institute of Electrical and Electronics Engineering Transactions on Neural Systems and Rehabilitation Engineering. 9 (1), 86-95 (2001).
  13. Sachs, H. G., et al. Subretinal implantation and testing of polyimide film electrodes in cats. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 243 (5), 464-468 (2005).
  14. Villalobos, J., et al. A wide-field suprachoroidal retinal prosthesis is stable and well tolerated following chronic implantation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (5), 3751-3762 (2013).
  15. Bragadottir, R., Narfstrom, K. Lens sparing pars plana vitrectomy and retinal transplantation in cats. Veterinary Ophthalmology. 6 (2), 135-139 (2003).
  16. Narfstrom, K., Holland Deckman, K., Menotti-Raymond, M. The domestic cat as a large animal model for characterization of disease and therapeutic intervention in hereditary retinal blindness. Journal of Ophthalmology. , 906943 (2011).
  17. Seiler, M. J., et al. Functional and structural assessment of retinal sheet allograft transplantation in feline hereditary retinal degeneration. Veterinary Ophthalmology. 12 (3), 158-169 (2009).
  18. Aramant, R. B., Seiler, M. J. Transplanted sheets of human retina and retinal pigment epithelium develop normally in nude rats. Experimental Eye Research. 75 (2), 115-125 (2002).
  19. Lin, B., McLelland, B. T., Mathur, A., Aramant, R. B., Seiler, M. J. Sheets of human retinal progenitor transplants improve vision in rats with severe retinal degeneration. Experimental Eye Research. 174, 13-28 (2018).
  20. Seiler, M. J., Aramant, R. B. Cell replacement and visual restoration by retinal sheet transplants. Progress in Retinal and Eye Research. 31 (6), 661-687 (2012).
  21. Seiler, M. J., et al. Vision recovery and connectivity by fetal retinal sheet transplantation in an immunodeficient retinal degenerate rat model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (1), 614-630 (2017).
  22. Lorach, H., et al. Transplantation of mature photoreceptors in rodents with retinal degeneration. Translational Vision Science and Technology. 8 (3), 30 (2019).
  23. Radtke, N. D., et al. Vision improvement in retinal degeneration patients by implantation of retina together with retinal pigment epithelium. American Journal of Ophthalmology. 146 (2), 172-182 (2008).
  24. Radtke, N. D., Aramant, R. B., Seiler, M. J., Petry, H. M., Pidwell, D. Vision change after sheet transplant of fetal retina with retinal pigment epithelium to a patient with retinitis pigmentosa. Archives of Ophthalmology. 122 (8), 1159-1165 (2004).
  25. Radtke, N. D., Seiler, M. J., Aramant, R. B., Petry, H. M., Pidwell, D. J. Transplantation of intact sheets of fetal neural retina with its retinal pigment epithelium in retinitis pigmentosa patients. American Journal of Ophthalmology. 133 (4), 544-550 (2002).
  26. Lorach, H., Palanker, E. Retinal prostheses: High-resolution photovoltaic implants. Medical Science (Paris). 31 (10), 830-831 (2015).
  27. Mathieson, K., et al. Photovoltaic retinal prosthesis with high pixel density. Nature Photonics. 6 (6), 391-397 (2012).
  28. Banin, E., et al. Retinal incorporation and differentiation of neural precursors derived from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24 (2), 246-257 (2006).
  29. Hambright, D., et al. Long-term survival and differentiation of retinal neurons derived from human embryonic stem cell lines in un-immunosuppressed mouse retina. Molecular Vision. 18, 920-936 (2012).
  30. Lamba, D. A., Gust, J., Reh, T. A. Transplantation of human embryonic stem cell-derived photoreceptors restores some visual function in Crx-deficient mice. Cell Stem Cell. 4 (1), 73-79 (2009).
  31. Singh, R. K., Occelli, L. M., Binette, F., Petersen-Jones, S. M., Nasonkin, I. O. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in the subretinal space of the cat eye. Stem Cells and Development. 28 (17), 1151-1166 (2019).
  32. McLelland, B. T., et al. Transplanted hESC-derived retina organoid sheets differentiate, integrate, and improve visual function in retinal degenerate rats. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 59 (6), 2586-2603 (2018).
  33. Assawachananont, J., et al. Transplantation of embryonic and induced pluripotent stem cell-derived 3D retinal sheets into retinal degenerative mice. Stem Cell Reports. 2 (5), 662-674 (2014).
  34. Eiraku, M., et al. Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture. Nature. 472 (7341), 51-56 (2011).
  35. Nakano, T., et al. Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs. Cell Stem Cell. 10 (6), 771-785 (2012).
  36. Singh, R. K., et al. Characterization of three-dimensional retinal tissue derived from human embryonic stem cells in adherent monolayer cultures. Stem Cells and Development. 24 (23), 2778-2795 (2015).
  37. Wahlin, K. J., et al. Photoreceptor outer segment-like structures in long-term 3D retinas from human pluripotent stem cells. Scientific Reports. 7 (1), 766 (2017).
  38. Zhong, X., et al. Generation of three-dimensional retinal tissue with functional photoreceptors from human iPSCs. Nature Communications. 5, 4047 (2014).
  39. Capowski, E. E., et al. Reproducibility and staging of 3D human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines. Development. 146 (1), 171686 (2019).
  40. Meyer, J. S., et al. Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (39), 16698-16703 (2009).
  41. Shirai, H., et al. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in two primate models of retinal degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (1), 81-90 (2016).
  42. Mandai, M., et al. iPSC-derived retina transplants improve vision in rd1 end-stage retinal-degeneration mice. Stem Cell Reports. 8 (4), 1112-1113 (2017).
  43. Scruggs, B. A., et al. Optimizing donor cellular dissociation and subretinal injection parameters for stem cell-based treatments. Stem Cells Translational Medicine. 8 (8), 797-809 (2019).
  44. Singh, R., et al. Pluripotent stem cells for retinal tissue engineering: Current status and future prospects. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (4), 463-483 (2018).
  45. Sharma, R., et al. Clinical-grade stem cell-derived retinal pigment epithelium patch rescues retinal degeneration in rodents and pigs. Science Translational Medicine. 11, 475 (2019).
  46. Ghosh, F., Engelsberg, K., English, R. V., Petters, R. M. Long-term neuroretinal full-thickness transplants in a large animal model of severe retinitis pigmentosa. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245 (6), 835-846 (2007).
  47. Koss, M. J., et al. Subretinal implantation of a monolayer of human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium: a feasibility and safety study in Yucatan minipigs. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (8), 1553-1565 (2016).
  48. da Cruz, L., et al. Phase 1 clinical study of an embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium patch in age-related macular degeneration. Nature Biotechnology. 36 (4), 328-337 (2018).
  49. Kashani, A. H., et al. Subretinal implantation of a human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer in a porcine model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1185, 569-574 (2019).
  50. Kashani, A. H., et al. Surgical method for implantation of a biosynthetic retinal pigment epithelium monolayer for geographic atrophy: Experience from a Phase 1/2a study. Ophthalmology. Retina. 4 (3), 264-273 (2020).
  51. Petersen-Jones, S. M., Komaromy, A. M. Dog models for blinding inherited retinal dystrophies. Human Gene Therapy. Clinical Development. 26 (1), 15-26 (2015).
  52. Beltran, W. A., et al. Canine retina has a primate fovea-like bouquet of cone photoreceptors which is affected by inherited macular degenerations. PLoS One. 9 (3), 90390 (2014).
  53. Nasonkin, I. O., et al. Transplantation of human embryonic stem cell derived retinal tissue in the subretinal space of immunodeficient rats with retinal degeneration (RD). Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (9), 3109 (2019).
  54. Singh, R. K., et al. Development of a protocol for maintaining viability while shipping organoid-derived retinal tissue. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (2), 388-394 (2020).
  55. Petersen-Jones, S. M. Drug and gene therapy of hereditary retinal disease in dog and cat models. Drug Discovery Today. Disease Models. 10 (4), 215-223 (2013).
  56. Machemer, R., Buettner, H., Norton, E., Parel, J. M. Vitrectomy: a pars plana approach. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 75 (4), 813-820 (1972).
  57. Machemer, R., Norton, E. W. Vitrectomy, a pars plana approach. II. Clinical experience. Modern Problems in Ophthalmology. 10, 178-185 (1972).
  58. Machemer, R., Parel, J., Norton, E. Vitrectomy: a pars plana approach. Technical improvements and further results. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 76 (2), 462-466 (1972).
  59. O’Malley, C., Heintz, R. M. Vitrectomy with an alternative instrument system. Annals of Ophthalmology. 7 (4), 585-588 (1975).
  60. Machemer, R., Hickingbotham, D. The three-port microcannular system for closed vitrectomy. American Journal of Ophthalmology. 100 (4), 590-592 (1985).
  61. Petersen-Jones, S. M., et al. AAV retinal transduction in a large animal model species: comparison of a self-complementary AAV2/5 with a single-stranded AAV2/5 vector. Molecular Vision. 15, 1835-1842 (2009).
  62. Annear, M. J., et al. Successful gene therapy in older Rpe65-deficient dogs following subretinal injection of an adeno-associated vector expressing RPE65. Human Gene Therapy. 24 (10), 883-893 (2013).
  63. Beltran, W. A., et al. Optimization of retinal gene therapy for X-linked retinitis pigmentosa due to RPGR mutations. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 25 (8), 1866-1880 (2017).
  64. Bainbridge, J. W. B., et al. Long-term effect of gene therapy on Leber’s Congenital Amaurosis. The New England Journal of Medicine. 372 (20), 1887-1897 (2015).

Tags

Subretinal TransplantationFeline Large Animal ModelRetinal DegenerationAge-related Macular DegenerationRetinitis PigmentosaLeber Congenital AmaurosisLateral CanthotomyBarraquer Eyelid SpeculumCastroviejo Corneal Tying ForcepsMosquito HemostatSilk SuturesTenon’s CapsuleSclerotomyPolyglactin Sutures
check_url/61683?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Occelli, L. M., Marinho, F., Singh, R. K., Binette, F., Nasonkin, I. O., Petersen-Jones, S. M. Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model. J. Vis. Exp. (174), e61683, doi:10.3791/61683 (2021).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image