ओवेरियन ऊतकों में बैक्टीरिया की लक्षण वर्णन और कार्यात्मक भविष्यवाणी
Summary
इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री स्टेनिंग और 16S रिबोसोमल आरएनए जीन (16S आरएनए जीन) अनुक्रमण को सीटू में कैंसर और गैरकैंसरस ओवेरियन ऊतकों में बैक्टीरिया को खोजने और अलग करने के लिए किया गया था। अबुक्षक राज्यों (PICRUSt) के पुनर्निर्माण द्वारा समुदायों के बगबेस और फिलोजेनेटिक जांच का उपयोग करके बैक्टीरिया के रचनात्मक और कार्यात्मक मतभेदों की भविष्यवाणी की गई थी।
Abstract
एक “बाँझ” महिला ऊपरी प्रजनन पथ के सिद्धांत बैक्टीरियल का पता लगाने में प्रगति के कारण बढ़ते विरोध का सामना कर रहा है । हालांकि, अंडाशय में बैक्टीरिया होते हैं या नहीं, इसकी अभी तक पुष्टि नहीं हुई है । इसके बाद, अंडाशय के ऊतकों में बैक्टीरिया का पता लगाने के लिए एक प्रयोग शुरू किया गया था । हमने कैंसर समूह में अंडाशय के कैंसर रोगियों और नियंत्रण समूह में गैर-कैंसर रोगियों को चुना। 16S rRNA जीन अनुक्रमण कैंसर और नियंत्रण समूहों से अंडाशय के ऊतकों में बैक्टीरिया अंतर करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । इसके अलावा, हमने बगबेस और PICRUSt का उपयोग करके पहचाने गए बैक्टीरिया की कार्यात्मक संरचना की भविष्यवाणी की। इस विधि का उपयोग अन्य आंत और ऊतकों में भी किया जा सकता है क्योंकि हाल के वर्षों में कई अंग बैक्टीरिया को बंदरगाह के लिए साबित हुए हैं। आंत और ऊतकों में बैक्टीरिया की उपस्थिति वैज्ञानिकों कैंसर और सामान्य ऊतकों का मूल्यांकन करने में मदद कर सकती है और कैंसर के इलाज में सहायता हो सकती है।
Introduction
हाल ही में, लेखों की बढ़ती संख्या प्रकाशित की गई है जो पेट के ठोस विसरा में बैक्टीरिया के अस्तित्व को साबित करते हैं, जैसे गुर्दे, तिल्ली, यकृत और अंडाशय1,2। गेलर एट अल अग्नाशय के ट्यूमर में बैक्टीरिया पाया, और इन बैक्टीरिया gemcitabine, एक कीमोथैरेपी दवा2के लिए प्रतिरोधी थे । एस मनफ्रेडो विएरा एट अल ने निष्कर्ष निकाला कि एंटोकोकस गैलिनार लिम्फ नोड्स, लिवर और प्लीहा के लिए पोर्टेबल था, और यह ऑटोइंयुमुइमेंट3चला सकता है।
चूंकि गर्भाशय ग्रीवा एक रक्षक के रूप में एक भूमिका निभाता है, ऊपरी महिला प्रजनन पथ में बैक्टीरिया, जिसमें गर्भाशय, फैलोपियन ट्यूब और अंडाशय होते हैं, पर न्यूनतम शोध किया गया है। हालांकि, हाल के वर्षों में कुछ नए सिद्धांत स्थापित किए गए हैं । मसिन 4,5में परिवर्तन के कारण मासिक धर्म चक्र के दौरान बैक्टीरिया की पहुंचगर्भाशयगुहा तक हो सकती है . इसके अतिरिक्त, Zervomanolakis एट अल की पुष्टि की है कि गर्भाशय, फैलोपियन ट्यूबों के साथ, अंडाशय के अंतःस्रावी प्रणाली द्वारा नियंत्रित एक परिष्टिक पंप है, और यह व्यवस्था बैक्टीरिया को एंडोमेट्रियम, फैलोपियन ट्यूब और अंडाशय6में प्रवेश करने में सक्षम बनाती है।
ऊपरी प्रजनन पथ अब बैक्टीरिया का पता लगाने के तरीकों के विकास के लिए धन्यवाद एक रहस्य नहीं है। वर्स्ट्रालेन एट अल ने 16S आरएनए जीन7के V1-2 अतिवर्य क्षेत्र में लक्षित करके गर्भाशय बैक्टीरिया की खोज करने के लिए एक बारकोडेड पेयड-एंड अनुक्रमण विधि का उपयोग किया। फेंग एट अल एंडोमेट्रियल जंतु के साथ रोगियों में बारकोडेड अनुक्रमण कार्यरत है और विविध अंतर्गर्भाशयी बैक्टीरिया8की उपस्थिति का पता चला । इसके अतिरिक्त, 16S आरएनए जीन, मीलों एट अल और चेन एट अल का उपयोग करके महिलाओं के जननांग प्रणाली में बैक्टीरिया पाया गया, जो क्रमशः5,9, 9साल्पिंगो-ओफोरेक्टॉमी और हिस्टेरेक्टॉमी से गुजरा था ।
ट्यूमर ऊतकों में बैक्टीरिया हाल के वर्षों में बढ़ती ध्यान प्राप्त किया है । बनर्जी एट अल की खोज की है कि माइक्रोबायोम हस्ताक्षर अंडाशय के कैंसर के रोगियों के बीच मतभेद और10 को नियंत्रितकरता है । एकनोक्सीनेट्रोनम सिबिरिकम ट्यूमर चरण से जुड़ा हुआ था, और मेथानोसेसिना वैक्यूलटा का उपयोग ओवेरियन कैंसर11का निदान करने के लिए किया जा सकता है। ओवेरियन कैंसर के अलावा, पेट, फेफड़े, प्रोस्टेट, स्तन, गर्भाशय ग्रीवा औरएंडोमेट्रियम जैसे अन्य कैंसर, बैक्टीरिया12, 13, 14,15,16,17, 18से जुड़े साबितहुएहैं। पोर एट अल. माइक्रोबियल आधारित ऑन्कोलॉजी निदान के एक नए वर्ग का प्रस्ताव, प्रारंभिक चरण के कैंसर स्क्रीनिंग19की उंमीद । इस प्रोटोकॉल में, हमने इन दोनों ऊतकों में बैक्टीरिया की संरचना और कार्य की तुलना करके कैंसर और सामान्य अंडाशय ऊतकों के बीच मतभेदों की जांच की।
अंडाशय में बैक्टीरिया की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री स्टेनिंग और 16S आरएनए जीन अनुक्रमण किया गया था। कैंसर और गैर कैंसर अंडाशय ऊतकों में अंडाशय बैक्टीरिया के मतभेदों और भविष्यवाणी कार्यों का अध्ययन किया गया । परिणामों में अंडाशय के ऊतकों में बैक्टीरिया के अस्तित्व को दिखाया गया । एनोक्सीनाट्रोनम सिबिरिकम और मेथानोसआरसीिना वैक्यूलटा क्रमशः मंच और अंडाशय के कैंसर के निदान से संबंधित थे। ४६ काफी अलग KEGG रास्ते है कि दोनों समूहों में मौजूद थे तुलना की गई ।
Protocol
Representative Results
Discussion
ओवेरियन कैंसर का महिलाओं की प्रजनन क्षमता25पर उल्लेखनीय प्रभाव पड़ता है । अधिकांश अंडाशय के कैंसर के रोगियों को देर से चरणों में निदान किया जाता है, और 5 साल की जीवित रहने की दर 30%18से कम ह…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को शीआन जियाओटोंग विश्वविद्यालय, चीन (XJTU1AF-2018-017, XJTU1AF-CRF-2019-002), शैनक्सी प्रांतीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग (2018JM7073, 2018JM7073, 2017ZDJC-11), शानक्सी प्रांतीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग की प्रमुख अनुसंधान और विकास परियोजना (2017ZDXM-SF-068, 2019QYPY-138), शानक्सी प्रांतीय सहयोगी प्रौद्योगिकी नवाचार परियोजना (2 017XT-026, 2018XT-002), और Xian सामाजिक विकास मार्गदर्शन योजना (2017117SF/YX011-3) की चिकित्सा अनुसंधान परियोजना । फंडर्स की अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने या पांडुलिपि तैयार करने के निर्णय में कोई भूमिका नहीं थी।
हम नमूने एकत्र करने में उनके योगदान के लिए Xian Jiaotong विश्वविद्यालय के पहले संबद्ध अस्पताल के स्त्री रोग विभाग में सहयोगियों को धन्यवाद देते हैं ।
Materials
| 2200 TapeStation Software | Agilgent United States |
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| AmpliSeq for Illumina Library Prep, Indexes, and Accessories | Illumina | ||
| Image-pro plus 7 | Media Cybernetics | ||
| Leica ASP 300S | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| Leica EG 1150 | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| Leica RM2235 | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| LPS Core monoclonal antibody, clone WN1 222-5 | Hycult Biotech | ||
| Mag-Bind RxnPure Plus magnetic beads | Omega Biotek | M1386-00 | |
| Mag-Bind Universal Pathogen 96 Kit | Omega Biotek | M4029-01 | |
| MiSeq | Illumina | SY-410-1003 | |
| Silva database | Max Planck Institute for Marine Microbiology and Jacobs University | ||
| the QuantiFluor dsDNA System | Promega | E2670 | |
| Trimmomatic | Björn Usadel | ||
| ZytoChem Plus (HRP) Anti-Rabbit (DAB) Kit | Zytomed Systems | HRP008DAB-RB |
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