난소 조직에서 박테리아의 특성화 및 기능적 예측
Summary
면역조직화학 염색 및 16S 리보소말 RNA 유전자(16S rRNA 유전자) 시퀀싱은 시투에서 암 및 비암 난소 조직에서 박테리아를 발견하고 구별하기 위해 수행되었다. 박테리아의 구성 및 기능적 차이는 관찰되지 않은 국가의 재건에 의해 지역 사회의 BugBase 및 Phylogenetic 조사를 사용하여 예측되었다 (PICRUSt).
Abstract
“멸균”여성 상부 생식 기관의 이론은 세균 검출의 발전으로 인해 증가 반대가 발생하고있다. 그러나 난소에 박테리아가 포함되어 있는지 여부는 아직 확인되지 않았습니다. 본명, 난소 조직에서 박테리아를 검출하는 실험이 도입되었다. 우리는 대조군에 있는 암 단에 있는 난소암 환자 및 비암 환자를 선택했습니다. 16S rRNA 유전자 염기서열 분석은 암 및 대조군으로부터 난소 조직에서 박테리아를 분화시키는 데 사용되었다. 또한, 우리는 BugBase및 PICRUSt를 사용하여 확인된 박테리아의 기능적 조성을 예측했습니다. 이 방법은 또한 많은 장기가 최근 몇 년 동안 박테리아를 항구 입증되었기 때문에 다른 내장 및 조직에서 사용될 수 있습니다. 내장과 조직에 박테리아의 존재는 과학자가 암과 일반적인 조직을 평가하는 것을 도울 수 있고 암의 처리에 있는 원조일 지도 모릅니다.
Introduction
최근에는 신장, 비장, 간 및 난소1,2와같은 복부 고체 내장에서 박테리아의 존재를 증명하는 기사가 증가하고 있습니다. 겔러 외. 췌장 종양에서 박테리아를 발견 하 고, 이러한 박테리아는 gemcitabine에 저항 했다, 화학 요법 약물2. S. 만프레도 비에이라 외. 엔테로 코커스 갈리나룸은 림프절, 간 및 비장에 이식하고, 자가 면역3을구동 할 수 있다는 결론을 내렸다.
자궁 경부는 수비수역할을하기 때문에 자궁, 나팔관 및 난소를 포함하는 상부 여성 생식 기관의 박테리아는 최소한으로 연구되었습니다. 그러나 최근 몇 년 동안 몇 가지 새로운 이론이 확립되었습니다. 박테리아는 mucins4,5의변화로 인해 생리 주기 동안 자궁 구멍에 접근할 수 있다. 또한, Zervomanolakis 외. 자궁, 나팔관과 함께, 난소의 내분비 시스템에 의해 제어 되는 연동 성 펌프, 이러한 배열은 박테리아가 내분비, 나팔관 및 난소6에들어갈 수 있도록.
상부 생식관은 더 이상 세균 검출 방법의 발달 덕분에 더 이상 신비가 아닙니다. Verstraelen 외는 16S RNA 유전자7의V1-2 하이퍼변수 영역을 대상으로 하 여 자궁 박테리아를 발견하기 위해 바코드 페어링-엔드 시퀀싱 방법을 사용했다. 팡 등은 자궁내막 폴립 환자에서 바코드 시퀀싱을 사용하였으며 다양한 자궁 내 세균8의존재를 밝혔다. 또한, 16S RNA 유전자를 이용하여, 마일즈 외 및 첸 외. 살핀고-oophorectomy 및 자군 절제술을 겪은 여성의 생식기 시스템에서 박테리아를 각각5,9.
종양 조직에 있는 박테리아는 최근 몇 년 동안에 있는 증가 관심을 얻고 있습니다. Banerjee 외. 미생물군유전체 시그니처가 난소암 환자와대조군 10사이에서 다르다는 것을 발견했다. noxynatronum sibiricum 종양 단계와 연관 되었다, 그리고 메타노 사르키나 vacuolata 난소암 진단 하는 데 사용할 수 있습니다11. 난소암 이외에, 위암, 폐, 전립선, 유방, 자궁경부 및 자궁내막과 같은 다른 암은 박테리아12,13,14,15,16,17,18과연관되는 것으로 입증되었다. Poore 외. 초기 단계 암 검진을 예견하는 미생물 기지를 둔 종양학 진단의 새로운 클래스를제안했습니다 19. 이 프로토콜에서, 우리는 이 두 조직에 있는 박테리아의 조성 그리고 기능을 비교해서 암과 일반적인 난소 조직 사이 다름을 조사했습니다.
면역히스토화학 염색 및 16S rRNA 유전자 염기서열분석은 난소에서 박테리아의 존재를 확인하기 위해 수행되었다. 암과 비암 난소 조직에서 난소 박테리아의 차이와 예측 된 기능을 연구하였다. 결과는 난소 조직에 있는 박테리아의 존재를 보여주었습니다. 안옥시나트로눔시비리쿰과 메타노사르시나 바쿠올라타는 각각 난소암의 단계와 진단과 관련이 있었다. 두 그룹에서 존재했던 46개의 상당히 다른 KEGG 통로를 비교했습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
난소암은 여성의 불임25에주목할 만한 영향을 미칩니다. 대부분의 난소암 환자는 후기 단계에서 진단되고, 5년 생존율은 30%18미만입니다. 간, 췌장 및 비장을 포함한 복부 고체 내장에서 박테리아의 확인이 발표되었습니다. 상부 생식기관에서 박테리아의 존재는자궁경부가2,3,4,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국 시안자오퉁대학교 제1부속병원 임상연구상(XJTU1AF-2018-017, XJTU1AF-CRF-2019-002), 산시성 과학기술부 자연과학 의 주요 기초연구프로젝트(2018JM707, 2018JM707,7073)의 임상연구상을 수상했다. 2017ZDJC-11), 산시성 과학기술부(2017ZDXM-SF-068, 2019QYPY-138), 산시성 협력기술 혁신 프로젝트(2) 017XT-026, 2018XT-002) 및 시안 사회 개발 지도 계획 (2017117SF / YX011-3)의 의학 연구 프로젝트. 기금은 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할이 없었습니다.
시안자오퉁대학교 제1부속병원의 산부인과 동료들에게 샘플 수집에 기여한 것에 대해 감사드립니다.
Materials
| 2200 TapeStation Software | Agilgent United States |
||
| AmpliSeq for Illumina Library Prep, Indexes, and Accessories | Illumina | ||
| Image-pro plus 7 | Media Cybernetics | ||
| Leica ASP 300S | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| Leica EG 1150 | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| Leica RM2235 | Leica Biosystems Division of Leica Microsystems | ||
| LPS Core monoclonal antibody, clone WN1 222-5 | Hycult Biotech | ||
| Mag-Bind RxnPure Plus magnetic beads | Omega Biotek | M1386-00 | |
| Mag-Bind Universal Pathogen 96 Kit | Omega Biotek | M4029-01 | |
| MiSeq | Illumina | SY-410-1003 | |
| Silva database | Max Planck Institute for Marine Microbiology and Jacobs University | ||
| the QuantiFluor dsDNA System | Promega | E2670 | |
| Trimmomatic | Björn Usadel | ||
| ZytoChem Plus (HRP) Anti-Rabbit (DAB) Kit | Zytomed Systems | HRP008DAB-RB |
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