Summary
本文详细介绍了在几个蚊子属（包括雌性和雄性）中成功和低噪声电图的分步方案。
Abstract
雌性蚊子是地球上最致命的动物，由于它们在获取血粉时传播的病原体，每年夺走超过100万人的生命。为了找到要觅食的宿主，蚊子依靠广泛的感官线索，包括视觉、机械、热和嗅觉。该研究详细介绍了一种技术，即电学（EAG），该技术使研究人员能够评估蚊子是否可以以浓度依赖性的方式检测单个化学物质和化学物质混合物。当与气相色谱（GC-EAG）结合使用时，该技术允许将触角暴露在完整的顶部空间/复杂混合物中，并确定蚊子可以检测到感兴趣的样品中存在的化学物质。这适用于宿主体味以及植物花束或其他与生态相关的气味（例如，产卵部位气味剂）。在这里，我们描述了一种协议，该协议允许长时间的制备反应时间，并且适用于来自多个属的雌性和雄性蚊子，包括 伊蚊， Culex，按 蚊和 弓形虫 蚊子。由于嗅觉在蚊子 - 宿主相互作用和蚊子生物学中起着重要作用，因此EAG和GC-EAG可以揭示感兴趣的化合物，以开发新的疾病媒介控制策略（例如诱饵）。辅以行为测定，可以确定每种化学物质的价态（例如引诱剂、驱虫剂）。
Introduction
蚊子是地球上最致命的生物，每年夺走超过100万人的生命，并使世界一半以上的人口面临接触其传播病原体的风险，同时叮咬1。这些昆虫依靠广泛的线索（即热、视觉、机械、嗅觉、听觉）来定位宿主（植物和动物）、交配和产卵，以及在幼虫和成虫阶段避开捕食者2，3。在这些感官中，嗅觉在上述行为中起着关键作用，特别是对于气味分子的中远程检测2，3。宿主或产卵部位发出的气味由位于蚊子触诊长鼻、跗骨和触角上的各种特异性嗅觉受体（例如 GR、OR、IR）检测2，3。
由于嗅觉是它们寻找宿主（植物和动物）、交配和产卵行为的关键组成部分，因此它构成了研究开发蚊子控制新工具的理想目标4。对驱虫剂（例如避蚊胺、IR3535、派卡瑞丁）和诱饵（例如BG哨兵人类诱饵）的研究非常多产5，但由于目前蚊子控制方面的挑战（例如，杀虫剂抗性，入侵物种），必须开发新的有效控制方法，了解蚊子生物学。
许多技术（例如，嗅觉计，着陆测定，电生理学）已被用于评估蚊子中化合物或化合物混合物的生物活性。其中，电图（或电图（EAGs））可用于确定气味是否被蚊子触角检测到。这项技术最初由施耐德6号开发，从那时起已被用于许多不同的昆虫属，包括飞蛾7，8，9，大黄蜂10，11，蜜蜂12，13和果蝇14，15等等。电学也已使用各种协议，包括蚊子16，17，18，19，20，21，22，23，24，25的单触角或多触角。
蚊子是相对较小和脆弱的昆虫，触角相当细。虽然对飞蛾或大黄蜂等较大的昆虫进行EAG相对容易，因为它们的尺寸更大，触角更厚，但在蚊子中进行EAG可能具有挑战性。特别是，保持良好的信噪比和持久的响应式制备是数据再现性和可靠性的两个主要要求。
此处提出的低噪声EAG分步指南直接提供了这些限制的解决方案，并使该协议适用于来自不同属的几种蚊子物种，包括 伊蚊， 按蚊， Culex和 弓形虫，并描述了雌性和雄性的技术。电学提供了一种快速而可靠的方法来筛选和确定生物活性化合物，然后在通过行为测定确定价后，可以利用这些化合物进行诱饵开发。
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Protocol
1. 盐水溶液制备
- 提前准备好生理盐水并存放在冰箱中。
- 按照Beyenbach和Masia26 准备解决方案。
注意：以mM为单位的盐水配方：150.0 NaCl，25.0 HEPES，5.0葡萄糖，3.4 KCl，1.8 NaHCO3，1.7 CaCl 2和1.0 MgCl2。用1M NaOH将pH调节至7.1。此时不要在制剂中添加葡萄糖或蔗糖，以增加货架储存。在运行EAG之前，将所需量添加到盐水中（每次实验约50 mL）。
2. 气味制备和储存
- 在1.5 mL琥珀色小瓶中提前制备加臭剂混合物或单一化合物稀释液，并储存在-20°C以防止化合物降解。
注意：浓度将取决于要进行的测试。0.1%或1%通常用于确定是否可以检测到化合物。对于剂量反应曲线，准备给定化学品的连续稀释液，并测试它们从最低到最高浓度。 - 根据被测化学品的溶解度，在水、乙醇、己烷、石蜡油或矿物油中制备稀释液。
- 确保为实验准备溶剂对照（仅包含溶剂的小瓶）。
- 在开始实验前30分钟从冰箱中取出气味剂，使其解冻。使用前涡旋每个小瓶，使化学品和溶剂充分混合。
- 将 10 μL 溶液移液到一张滤纸 （0.5 cm x 2 cm） 上，装入标记的玻璃注射器或巴斯德移液器内。
- 将每种化合物或混合物装入特定的巴斯德移液器或注射器中，以防止污染。
注意：在开始实验前10分钟加载，以便气味可以在注射器中扩散，但不会持续更长时间以防止降解。此时让巴斯德移液器或注射器保持封盖，以便在实验开始前使化学物质充分扩散。 - 每次EAG运行后，处理滤纸并更换新的滤纸，以防止纸张过度浸泡并有针头堵塞的风险。定期更换针头（每10次）。
3. 蚊虫分离
- 在实验当天隔离蚊子。
- 使用实验当天至少6天大的蚊子，以增加雌配的机会，以增强它们对宿主相关气味剂的反应。
注意：根据项目在测试时调整蚊龄。检查并协调生理状态（例如，血饲、饥饿、以前从未喂食等）。 - 使蚊子挨饿长达12小时（即无法获得糖分），以增加它们的动机和敏感性。
- 将蚊子容器放入冰箱（4°C）中，直到它们停止飞行，以便用镊子轻松地将个人小心地转移到单个杯子中。
注意：耐寒性较高的物种可以使用CO2 防蝇垫放下。确保蚊子不要长时间停留以防止干燥，这会降低蚊子EAG制剂的反应能力。 - 在进行EAG之前，将装有单个蚊子的杯子存放在室温下，并丢弃白天可能不使用的任何蚊子。
4. 电极支架和毛细管制备
- 毛细管拉拔、制备和储存
- 使用带细丝的硼硅酸盐毛细管（内径：0.78毫米，外径：1毫米）。根据设备拉动它们27.
注意：将拉动的毛细血管储存在培养皿中。将培养皿放在蜡片或无味的造型粘土上，以防止它们移动和断裂。 - 在进行EAG实验之前，在显微镜下用一对镊子轻轻地折断2个毛细管的尖端。
注意：确保一个略大于另一个，以适合颈部（较大的毛细管）或触角的尖端（较小的毛细管）。确保切口干净，毛细管壁上没有裂缝。这需要耐心和练习。 - 如果仍然完好无损，请在实验结束后用去离子（DI）水冲洗后重新使用这些毛细管。用清洁湿巾轻轻涂抹在尖端上，以去除多余的水。放回储存培养皿中。如果尖端弯曲，请丢弃毛细管。
- 使用带细丝的硼硅酸盐毛细管（内径：0.78毫米，外径：1毫米）。根据设备拉动它们27.
- 电极支架和毛细管安装
- 使用不同颜色的实验室胶带将两个电极支架标记为“记录”和“参考”。这将有助于指导蚊头和电极的安装。
- 确保电极支架内部透明，并且不存在硼硅酸盐碎屑。
- 氯化：将电极支架的银线浸泡在纯漂白剂中约5分钟。电线从闪亮的浅灰色变为哑光深灰色。
- 松开橡胶塞，并使用20G针头用10%盐水溶液填充毛细管内部。
- 使用注射器用盐溶液填充硼硅酸盐毛细管。确保电极支架和拉动的毛细管中均不存在气泡。
注意：为减少毛细管中出现气泡的机会，请继续推动毛细管中的盐水，同时轻轻拉出针头并使用带有细丝的毛细管。可以用由1：3电极凝胶和盐水溶液组成的溶液加载毛细管。这可以帮助防止盐水蒸发，并且在学习和练习EAG时特别有用，因为实验者需要更多时间来完成不同的步骤。 - 浸泡后，用去离子水冲洗银丝并将其插入两个毛细管中。确保电线尖端距离毛细管尖端小于 1 mm。确保毛细管通过电极支架内的橡胶圈而不会破裂。轻轻拧紧橡胶塞。验证是否存在气泡。
- 使用参比电极支架（颈部）上开口较宽的毛细管，记录电极支架（天线）上的开口较小。
- 将两个安装的电极支架放在湿清洁湿巾上，以防止吸头变干，直到准备安装头部。
5. EAG钻机准备（图1）
- 确保空气桌向上，航空公司没有堵塞。确保医用空气罐仍然充满，以避免在实验过程中更换它。确保加湿器中有气泡。
- 空气和脉冲输送系统
- 打开医用空气气罐。
- 检查两个流量计的液位。
注意：在整个实验过程中，控制洗浴制剂的主气流的流量计应为140 mL / min，其他与气味脉冲相关的流量计应读数为15 mL / min。
- 如果执行GC-EAD，请打开机器，气箱并创建/加载文件/方法。
- 打开计算机、软件应用程序、阀门电源，并验证互联网连接以使软件应用程序正常工作。
- 软件应用：可以编写一个简短的脚本来传递脉冲。
- EAG软件：使用任何电生理学软件。
- 在软件中实现参数（例如，放大器、记录持续时间、脉冲持续时间等）。
- 传递控制脉冲以验证传递脉冲的阀门是否正常工作。
- 将电源设置为 5.2 V。 验证放大器参数。
注意：此处显示的数据使用的参数是：0.1 Hz的低截止滤波器;500 Hz 的高截止滤波器;增益为 x100。
6. 蚊头的准备和安装（图2）
- 将铝板放在冰上，并在上面放一块湿清洁纸巾。
- 在角落里放一小团电极凝胶。
- 将蚊子杯放在冰上，让蚊子冷却几分钟，或直到它停止飞行。
注意：有些物种是耐寒的，可能需要在 CO2 飞垫上快速麻醉才能下降。蚊子停留的时间越少越好。 - 将蚊子放在背上，用微型剪刀夹住每个天线的尖端（仅最后一段的一小部分）。
- 使用镊子将蚊子拖到电极凝胶团旁边，然后将每个天线的尖端轻轻浸入凝胶中。避免浸渍电极凝胶中超过最后一个片段。
- 使用镊子将蚊子触角拉出，同时将它们彼此相邻。让他们一起从凝胶中出来。确保天线不要接触清洁湿巾的表面，否则它们可能会分离。
- 将蚊子侧放，用微型剪刀或剃须刀片切碎蚊子的头部。
注意：切头后，请快速执行后续步骤并转到EAG设备以开始录制。制剂应保持反应约30分钟。 - 取参比电极，将尖端轻轻深入凝胶中。与颈部组织保持接触，让头部粘在上面。
- 将电极支架移动到EAG显微镜下并通过显微镜观察，将头部（即参考）电极放在显微操纵器上。确保天线位于中心。
- 抓住记录电极，将其放在触角尖端的前面。使用显微操纵器将其移动并尽可能靠近吸头。使用显微镜将记录电极的尖端移向天线。
- 在插入尖端之前，将两个电极支架连接到放大器，以防止它们在插入后移动。
- 将天线尖端插入记录电极。确保它们仅接触盐水和电极凝胶，并且通过毛细管透明可见。天线通过“吸力效应”进入。
- 如果需要，在显微镜下用镊子调整头部和尖端的位置。
- 将航空管靠近蚊头准备（距离：1厘米）。
注意：如果头部脱落，请返回解剖站并重新安装头部，如果头部丢失或自头部被切断以来已超过 5 分钟，请准备新的头部。毛细管和颈部/触角之间的良好连接对于低噪声和可靠的记录至关重要。理想情况下，一旦插入，天线尖端将距离记录电极的电线不到 1 毫米。 - 关闭光源（如果使用）。
- 将真空管线放置在蚊头准备附近（距离：20 厘米），并与主航空公司对齐。
注意：真空将有助于在刺激后去除头部准备周围的化学物质，这可能会导致在施加脉冲后产生EAG反应。
7. 录音
- 插入天线尖端后，打开放大器和降噪器。观察基线信号并确保其没有噪音。
注意：观察电信号中是否存在较大的振荡。根据需要调整头部和触角尖端的位置，直到信号干净。使用鳄鱼夹将任何将噪音引入法拉第笼或空气台的东西接地。幅度小于0.01 mV的基线信号是检测和区分分钟EAG响应的理想选择。 - 一旦噪音水平令人满意，将第一个气味注射器插入空气孔中进行测试。
- 关闭法拉第笼。不要停留在准备前，以减少噪音。
- 点击 记录在EAG软件上。
- 使用软件应用程序传递脉冲。
注意：脉冲的数量和持续时间将根据实验而有所不同。在这里，每种气味剂使用了单个1 s.脉冲。加臭剂间隔45秒。 - 注意实验室笔记本中蚊子触角的反应。
注意：如果蚊子触角检测到气味，则观察到信号中有明显的偏转（见 图3A）。 - 继续下一个气味或浓度。不要忘记随机化气味剂的呈现，除非进行剂量反应曲线。
注意：实验中应使用阴性对照和阳性对照。这将确保观察到的反应确实是嗅觉反应，而不是由于机械或电噪声引起的。 - 在录制结束时，应用阳性对照以验证天线是否仍然响应。
注意：使用0.1%或1%苯甲醛，因为迄今为止测试的所有蚊子物种都对这种化合物有反应。 - 继续进行下一次蚊子准备工作。
8. 清洁
- 关闭放大器、降噪器、航空公司和计算机。
- 将加臭剂放回冰箱。
- 从玻璃注射器中取出滤纸，如果墙壁上可见残留物，则用 100% 乙醇清洁。用清洁纸擦干过夜。
- 用去离子水清洁电极支架，以去除任何可能的盐痕迹。轻轻涂抹在一块清洁湿巾上擦干。
- 将蚊子残留物放入冰箱中，24小时后处理。
注意：如果与受感染的蚊子一起工作，请遵循您所在机构的安全要求。
9. 数据分析
- 手动或自动测量EAG响应。
注意：EAG幅度（-mV）在这里测量。如果对每种化合物应用了多个脉冲，则取平均值。根据所使用的软件，可以自动检测和测量EAG。但是，必须单独检查每个响应，以验证响应的形状并评估可能的残留，延迟响应等。理想的EAG响应与脉冲对齐，显示出明显的偏转，并且在蚊子制备之间可重复（图3）。 - 呈现原始数据以显示最小的变异性、低噪声信号和清晰的响应（图 3B）。
注意：数据也可以归一化（例如，Z 分数）。阴性对照值（例如矿物油）（即基线）可以从响应中减去，如果没有，则应在图中列出。还应提供阳性对照。 - 使用任何统计软件进行统计分析28.
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Representative Results
电学是确定昆虫天线是否检测到化学物质或化学物质混合物的有力工具。它还可用于使用浓度的逐渐增加来确定给定化学品的检测阈值（即剂量曲线响应， 图4B）。此外，测试驱虫剂对宿主相关气味的反应的影响是有用的29。
EAG中应始终使用阳性和阴性对照。在这里，苯甲醛被用作阳性对照（图3B，3C，4A）。已发现该化合物在迄今为止测试的所有蚊子物种中引起触角反应24，25，29。还应使用阴性对照，并且可以由用于稀释化学品的溶剂（例如，矿物或石蜡油，己烷等）组成，并且不应引起反应（图3B，3C，4A）。
实际上，在进行EAG时，应用控件时不应注意偏转（图3B， 3C， 4A）。如果观察到反应，则注射器、溶剂对照和/或气味管可能被污染。如果是这种情况，应制备新的溶液，用100%乙醇清洁注射器并干燥和/或通过用100%乙醇冲洗并干燥来净化航空公司。如果所选对照引起响应（例如乙醇），则应从乙醇和被测化学品组合获得的值中减去对照组获得的值，以评估被测化学品对触角的影响。
蚊子种类对各种化合物的反应能力以及反应程度各不相同。例如，与埃及伊蚊，斯蒂芬西和五筋膜虫相比，弓形虫蚊子产生非常大的EAG（图3C，图4A）。
在EAG中，第二个脉冲和下一个脉冲通常会导致较小的EAG响应。一种气味剂的呈现也会影响对以下气味的反应，因此随机化气味顺序和多次测定以有效地测试一组气味剂非常重要（除非执行剂量反应曲线）。此外，分离脉冲（例如5秒）和气味剂（例如45秒）表示将有助于优化EAG响应。
被测化学品的挥发性各不相同，会影响嗅觉反应，如果被测化学品的挥发性非常低，则可能导致反应延迟。在进行EAG以优化测定之前，应了解化学挥发性和溶解度。用于制备稀释液的溶剂也应仔细选择（例如乙醇、己烷、矿物或石蜡油）。此外，应明智地选择浓度，理想情况下应与生态相关。经常使用1%或0.1%的浓度，但相对较高，不一定代表昆虫在自然界中可以经历的情况。然而，在某些情况下（例如，用于诱饵开发）筛选浓度相对较高的化合物是有用的。驱虫剂可以以其市售浓度进行测试（例如，避蚊胺通常以 40% 的浓度出售）。
如果与气相色谱（即GC-EAD）25偶联，则可以使用GC-MS鉴定引起反应的化合物，然后在各种浓度下或与EAG混合物中单独测试。值得一提的是，测试化学品的化合价不能用EAG确定。只有补充行为实验（例如，嗅觉计、摄食测定）才能评估触角检测到的化学物质对蚊子是否具有吸引力、驱避性或中性性。最后，EAG实验仅显示周围神经系统的反应。
图1：电图设置包括：A）显微镜：使用的显微镜应允许实验者清楚地看到准备工作，以便将蚊子触角尖端插入记录电极中。B）冷光灯：录音开始时应关闭灯。C）真空管路：这降低了气味剂在蚊头制备周围积聚的风险，这可能导致触角响应与实际刺激分离。D）显微操纵器（x2）：这些将允许非常精细的电极支架运动，这是将蚊子触角插入记录电极毛细管所必需的。E） 记录电极支架。F） 参比电极支架。G） 头部级：两个电极都插入头部级，然后连接到放大器。H）主要航空公司：恒定的清洁气流沐浴在蚊子头上。流量由流量计调节。I） 连接到电磁阀和流量计的用于气味输送的注射器;J）空气台：空气台将减少噪音。K）法拉第笼：法拉第笼将防止电噪声。请点击此处查看此图的大图。
图2：用于EAG记录的分步白纹伊蚊头准备。 A）雌性蚊子背在冰板上，以验证两个触角是否完好无损。B）用微型剪刀切除触角的最后一段。C）将触角浸入电极凝胶中。D）将触角拉出后粘在一起。每个天线的一个片段应仅在电极凝胶中。E）蚊头切除术。F） 头部安装在参比电极上。它应该足够稳定，可以移动到EAG钻机上。A'-F'。与上述男性EAG相同的步骤。请点击此处查看此图的大图。
图3：蚊子EAG和原始EAG痕迹的示意图。A）EAG示意图（左）和EAG响应的特征（右）。（左）蚊头安装在参比电极和连接到放大器的记录电极之间。触角沐浴在恒定的气流中，其中气味刺激被脉冲。检测到化学物质会导致信号偏转（以mV为单位）。（右）化学检测导致细胞去极化（DPR），然后是细胞复极化（RPR），直到恢复到基线。气味脉冲由灰色矩形表示。红线表示EAG响应的幅度。B）WinEDR软件的屏幕截图突出显示了整个EAG记录的Culex quinquefasciatus雌性蚊子的痕迹。顶部：未滤波（即原始）信号。中间：1 s气味脉冲用数字表示。底部：过滤（即 1.5 Hz 低通）信号到 3 种加臭剂和一个对照（矿物油）。注意响应 1% 1-己醇 （1）、1% 苯甲醛 （2） 和 1% 丁酸 （3） 的偏转。注意对阴性对照矿物油（4）没有反应。C） 从左到右：雌性埃及伊蚊、斯蒂芬按蚊、五筋膜库蚊和七叶弓形虫对 1% 苯甲醛（顶部）和矿物油对照（底部）的代表性 EAG 反应（以 mV 为单位）。一秒脉冲由EAG迹线上方的彩色矩形表示。请注意，对苯甲醛的响应较大的偏转和对矿物油的响应不足。另外，请注意弓形虫中不同的鳞片。请点击此处查看此图的大图。
图4：EAG结果及其统计分析的示例表示。五筋膜库蚊（N = 8）、斯蒂芬按蚊（N = 10）、埃及伊蚊（N = 8）和七叶弓形虫（N = 7）雌性对1%1-己醇（绿色）、1%丁酸（橙色）、1%苯甲醛（黄色）和矿物油（蓝色）的平均EAG反应。B.五筋膜库蚊雌性1-己醇（左）（N = 9）和苯甲醛（右）（N = 8）的EAG剂量反应曲线。条形表示均值的标准误差。误差线上方的字母表示统计差异（成对威尔科克森秩和检验与邦弗朗尼校正）。请点击此处查看此图的大图。
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Discussion
嗅觉介导的行为受许多因素影响，包括生理因素（例如年龄、一天中的时间）和环境（例如温度、相对湿度）30。因此，在进行EAG时，必须使用处于相同生理状态（即监测年龄，饥饿，交配）31 的昆虫，并在制剂周围保持温暖潮湿的环境以避免干燥。25°C左右的温度是理想的，主要航空公司的湿度为60%至80%。这可以通过在主航线上放置一个起泡器来轻松实现。
此外，重要的是要考虑每个物种的生态学，以获得与昆虫生物学相关的结果。例如，如果使用夜行动物，请考虑反转它们的光周期以测试它们在主观夜晚的反应。选择在一天中的特定时刻（即昆虫活跃时）进行EAG也很重要。例如，如果使用 埃及伊蚊 ，请考虑在该物种的活动高峰期（即当天早些时候和下午晚些时候）进行实验。同样，为了方便起见，可以使用气候室或灯箱轻松改变光周期，并使用可编程计时器32进行反向光程序。Eilerts等人33 和Krishnan等人34已经表明，对特定气味剂的敏感性在一天中变化。因此，对昆虫生态学和生物学的良好了解将保证更准确的结果。
EAG中可以很容易地引入噪声（电气或机械）。例如，AC系统将空气吹向EAG准备工作可以产生机械扰动。Humbug可以降低电噪声，但如果持续存在，可以通过插入元件并使用鳄鱼夹将它们接地到法拉第笼来追踪（图3B）。这适用于制剂周围存在的所有元素（即显微镜、灯、显微操纵器）。法拉第笼中的某些设备在录制前应拔下插头，因为它们可能仍会产生电噪声（例如冷光源）或放置在笼外。另一种类型的“噪音”具有嗅觉性质。实验者应避免使用香水或使用香味强烈的洗发水或洗涤剂。事实上，在这些化合物中发现的许多化合物可以被蚊子检测到（例如，芳樟醇，香茅醇，香叶醇，丁香酚），并可能干扰和影响实验结果。穿着实验室外套和手套对于限制对空气管路、注射器和电极的有害污染也是必不可少的。
所提出的方案的优点是易于适用于雄性和雌性的所有蚊子种类，同时延长制剂的寿命（>30分钟）并且制剂之间的变异性有限。这种方法导致EAG信号中的噪声非常小，从而可以在非常低的浓度下测试化学品。一旦掌握了解剖和安装步骤，该技术可以在相对较短的时间内产生可靠的数据，并进行直接的数据分析。
电图仅允许实验者评估蚊子是否可以检测到化学物质。然而，为了确定这种化学物质的价，补充行为测定，如嗅觉计测定，对于确定特定的气味剂或混合物是否具有吸引力、驱避性或中性至关重要，以便开发有效的蚊子控制工具35。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
我感谢克莱门特·维诺格博士和杰弗里·里费尔博士的有益讨论。以下试剂通过BEI Resources，NIAID，NIH获得： 按蚊斯蒂芬西，菌株STE2，MRA-128，由Mark Q. Benedict提供; 埃及伊蚊，Strain ROCK，MRA-734，由David W. Severson提供; 五筋膜库蚊，菌株JHB，卵，NR-43025。作者感谢Jake Tu博士，Nisha Duggal博士，James Weger博士和Jeffrey Marano提供 Culex quinquefasciatus 和 Anopheles stephensi （菌株：Liston）蚊卵。 白纹伊蚊 和 弓形虫鹦鹉螺 来自作者在新河谷地区（美国弗吉尼亚州）收集的田间蚊子。这项工作得到了生物化学系和弗拉林生命科学研究所的支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air table Clean Bench | TMC | https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess | Noise reducer |
| Analog-to-digital board | National Instruments | BNC-2090A | |
| Benchtop Flowbuddy Complete | Genesee Scientific | 59-122BC | To anesthesize mosquitoes |
| Borosillicate glass capillary | Sutter Instrument | B100-78-10 | To make the recording and references capillaries |
| Chemicals | Sigma Aldrich | Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L | Chemicals used for the experiments presented here |
| CO2 | Airgas or Praxair | N/A | To anesthesize mosquitoes |
| Cold Light Source | Volpi | NCL-150 | |
| Disposable syringes | BD | 1 mL (309628) / 3 mL (309657) | |
| Electrode cables | World Precision Instruments | 5371 | |
| Electrode gel salt free | Parkerlabs | 12-08-Spectra-360 | |
| Faraday cage | TMC | https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages | Noise reducer |
| Flowmeters | Bel-art | 65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075) | One of each |
| GCMS vials and caps | Thermo-fisher scientific | 2-SVWKA8-CPK | To prepare odorant dilutions |
| Glass syringes (Fortuna) | Sigma Aldrich | Z314307 | For odor delivery to the EAG prep |
| Humbug | Quest Scientific | http://www.quest-sci.com/ | Noise reducer |
| 2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire | A-M Systems | 675748 | Electrode holder |
| Magnetic bases | Kanetec | MB-FX | x 2 |
| MATLAB + Toolboxes | Mathworks | https://www.mathworks.com/products/matlab.html | For delivering the pulses |
| Medical air | Airgas or Praxair | N/A | For main airline |
| Microscope | Nikkon | SMZ-800N | |
| Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator | Narishige | MHW-3 | x 2 |
| Microelectrode amplifier with headstage | A-M Systems | Model 1800 | |
| Mosquito rearing supplies | Bioquip | https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp | |
| Needles | BD | 25G (305127) / 21G (305165) | |
| Pasteur pipettes | Fisher Scientific | 13-678-6A | For odor delivery to the EAG prep |
| PTFE Tubing of different diameters | Mc Master Carr | N/A | To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect. |
| 30V/5A DC Power Supply | Dr. Meter | PS-305DM | |
| R version 3.5.1 | R project | https://www.r-project.org/ | For data analyses |
| Relay for solenoid valve | N/A | Custom made | |
| Silver wire 0.01” | A-M Systems | 782500 | |
| Solenoid valve (3-way) | The Lee Company | LHDA0533115H | |
| WinEDR software | Strathclyde Electrophysiology Software | WinEDR V3.9.1 | For EAG recording |
| Whatman paper | Cole Parmer | UX-06648-03 | To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette |
References
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