نزيف بونتين ضخمة عن طريق الحقن المزدوج للدم الذاتي
Summary
نقدم بروتوكولا لإنشاء نموذج نزيف بونتين ضخم في الفئران عن طريق الحقن المزدوج للدم الذاتي.
Abstract
نحن نقدم بروتوكول لإنشاء نموذج نزيف بونتين ضخمة في الفئران. استخدمت الفئران التي تزن حوالي 250 غراما في هذه الدراسة. تم أخذ مائة ميكرولتر من الدم الذاتي من الوريد الذيل وحقنها بشكل ستيريوتكاكسيكالي في المهور. تم تقسيم عملية الحقن إلى خطوتين: أولا، تم حقن 10 ميكرولتر من الدم في مكان معين، وضعية الأمامي (AP) -9.0 مم. الجانبي (لات) 0 مم؛ عمودي (فيرت) -9.2 ملم، تليها حقنة ثانية من الدم المتبقي الموجود في AP -9.0 مم؛ اللات 0 مم; Vert -9.0 مم مع فاصل زمني مدته 20 دقيقة. تم استخدام اختبار شعاع التوازن واختبار موضع الطرفين وعصب Voestch المعدل لتقييم الوظيفة العصبية. تم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) لتقييم حجم النزيف في الجسم الحي. وكانت أعراض هذا النموذج تمشيا مع المرضى الذين يعانون من نزيف بونتين ضخمة.
Introduction
النزيف داخل المخ يمثل خمس مرضى السكتة الدماغية. يعتمد تشخيص النزيف داخل المخ على سرعة وحجم وموقع النزيف1،2. بالمقارنة مع نزيف الدماغ الأمامي ، فإن نزيف جذع الدماغ لديه معدل وفيات واعتلال أعلى3. حوالي 40٪ من نزيف جذع الدماغ يحدث في المهور4. المسببات والفيزيولوجيا المرضية لنزيف بونتين مختلفة تماما وأقل دراسة من نزيف الدماغ الأمامي5.
هناك نوعان من النماذج الحيوانية نزيف بونتين. واحد هو نموذج نزيف عفوي الناجمة عن ضخ الكولاجين البكتيري في المهور6،7،8. أكبر ميزة لهذا النموذج هو أن النزيف هو عفوي. ومع ذلك، الكولاجيناز يمكن أن تحفز سوى حجم صغير من نزيف بونتين. الى جانب ذلك، الكولاجيناز قد يسبب إصابات أخرى في الدماغ. يتم تحريض النموذج الآخر عن طريق الحقن المجسم للدم الذاتي في المهور9. ميزة هذا النموذج هو أنه من السهل لإتقان مع نسبة نجاح عالية. نظريا، يمكن للباحثين حقن أي حجم من الدم في أي مكان من المهور. ومع ذلك ، بسبب التسرب الخلفي من خلال مسار الإبرة ، فإن الحجم المحقون محدود. في الآونة الأخيرة ، تم الترويج لطريقة الحقن المزدوج للحد من التسرب الخلفي9. هذه الطريقة تحقن الدم الذاتي مرتين مع فاصل زمني لمدة 20 دقيقة بين الحقن. يتم تطبيق طريقة الحقن المزدوج للحث على نزيف بونتين خفيف (30 ميكرولتر) ومعتدل (60 ميكرولتر) ولكن ليس نزيف بونتين هائل. في العيادة، فإن غالبية المرضى الذين يعانون من نزيف بونتين يعانون من سوء التكهن لديهم نزيف هائل (أكثر من 10 مل).
في الدراسة السابقة، قدمنا بروتوكولا لإنشاء نموذج السكتة الدماغية بونتين في الفئران10. في هذه الدراسة، نقوم بتعديل طريقة الحقن المزدوج القائمة، وتوفير بروتوكول مفصل للحث على نزيف بونتين ضخمة في الفئران عن طريق الحقن المزدوج من الدم الذاتي 100 ميكرولتر في موقعين مختلفين في المهور.
Protocol
Representative Results
Discussion
في هذه الدراسة، قدمنا بروتوكولا لتوليد نموذج فئران نزيف بونتين ضخمة. ويمكن استخدام هذا النموذج للبحث في آلية المرضية والتكهن بنزيف بونتين ضخمة.
وطوال التجربة، استخدم 25 فأرا، توفي منها جرذ واحد فقط. وقد أشار التحقق من التصوير بالرنين المغناطيسي، والتشريح الإجمالي، وتلطيخ HE…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم هذه الدراسة ماليا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم في الصين (81471181 81870933) وبرنامج المختبر الافتتاحي لجامعة قوانغتشو الطبية (0506308) إلى Y Jiang ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الصينية (81701471) والبرنامج العلمي للجنة الصحة البلدية في قوانغتشو (20191A01083) إلى Z Qiu ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الصينية (81501009) إلى L Wu.
Materials
| 100ml Saline solution | Guangdong yixiang | 191222201 C1 | Preparing heparin diluent |
| 100μl Microinjector | Shanghai Gaoge | Injection of autologous blood | |
| 1ml Syringe | Jiangsu Zhiyu | 20191014 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| 75% Alcohol | Shandong Lierkang | Disinfection of rat tail | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | R510-31S-6 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Balance beam | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Blades | Shanghai Feiying | 74-C | For gross anatomy |
| Bone cement | Shanghai Xinshiji | 20180306 | Surgicl instruments |
| Brain tank | Shenzhen LEIYEA | For gross anatomy | |
| Butorphanol tartrate | Jiangsu Hengrui | For pain management | |
| Electric cranial drill | Nanjing Darwin biotechnology | 20180090018 | Making a burr hole on the skull |
| EP tube | Nantong Surui | Transfer autologous blood | |
| Erythromycin eye cream | Yunnan pharmacy | Eyes protection | |
| HE dye liquor | Solarbio | G1120 | For HE staining |
| Heating pad | Dangerous Jungle | JR01 | Keeping warm |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmacal Company | 190701 | Preparing heparin diluent |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 20080701 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Light dark box | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Micro-injection pump | Baoding Leifu | TFD03-01-C | Injection of autologous blood |
| MRI system | Philips | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | J32020 | Surgicl instruments |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Q-tips | Jiangxi Songhe | Surgicl instruments | |
| Scalp heedle | Jiangxi Hongda | 20200313 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| Scalpel | Shanghai Kaiyuan | 170902 | Surgicl instruments |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Y00040 | Surgicl instruments |
| Stereotaxic apparatus | RWD | 900-00001-00 | for surgical positioning |
| Surgical towel | Xinxiang Huakangweicai | 20070601 | Surgicl instruments |
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Suture scissors | Shanghai Jinzhong | J25041 | Surgicl instruments |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | J31080 | Surgicl instruments |
References
- Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
- Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
- Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
- Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
- Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
- Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
- Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
- Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
- Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
- Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
