자동 혈액의 이중 주입에 의한 대규모 폰틴 출혈
Summary
우리는 자가 혈액의 이중 주입을 통해 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제시한다.
Abstract
우리는 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제공합니다. 약 250 그램의 무게 쥐는이 연구에서 사용 되었다. 백 마이크로리터의 자가 혈액은 꼬리 정맥에서 가져와 입체적으로 폰에 주입되었습니다. 주사 과정은 2단계로 나뉘었다: 첫째, 10 μL의 혈액은 특정 위치, anteroposterior 위치 (AP) -9.0 mm로 주입되었다; 측면(Lat) 0mm; 수직(Vert) -9.2 mm, AP-9.0 mm에 위치한 잔류 혈액의 제2 주입; 위도 0mm; 20분 간격으로 -9.0mm를 정점하십시오. 밸런스 빔 테스트, 사지 배치 테스트 및 수정된 Voestch 신경 점수는 신경 기능을 평가하는 데 사용되었습니다. 자기 공명 화상 진찰 (MRI)는 생체 내출혈의 부피를 평가하기 위하여 이용되었습니다. 이 모형의 현상은 거대한 pontine 출혈을 가진 환자와 일치했습니다.
Introduction
인트레이스레브랄 출혈은 뇌졸중 환자의 1/5을 차지합니다. 무추적 출혈의 예후는 출혈1,2의속도, 볼륨 및 위치에 따라 달라집니다. 뇌출혈과 비교하여 뇌간 출혈은 사망률이 높고이환율3이더 높습니다. 뇌간 출혈의 약 40%는 폰4에서발생합니다. pontine 출혈의 병인학 및 병리학은 뇌 출혈5보다매우 다르고 덜 연구된다.
퐁틴 출혈 동물 모델의 두 종류가 있습니다. 하나는폰6,7,8에서세균 콜라게나아제의 주입에 의해 유도된 자발적인 출혈 모델이다. 이 모델의 가장 큰 장점은 출혈이 자발적이라는 것입니다. 그러나 콜라게나아제는 소량의 폰틴 출혈만 유발할 수 있습니다. 게다가, 콜라게나아제는 두뇌에 그밖 상해를 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 다른 모델은 폰9에자가 혈액의 스테레오테 삽입에 의해 유도된다. 이 모델의 장점은 높은 성공률로 마스터하기 쉽다는 것입니다. 이론적으로, 연구원은 폰의 어떤 위치에 혈액의 어떤 볼륨을 주입할 수 있습니다. 그러나, 바늘 경로를 통한 백 누설로 인해 주입된 부피가 제한됩니다. 최근에는 이중 주입 방법이배분방지9를감소시키는 방법을 추진하고 있다. 이 방법은 주사 사이의 20 분 간격으로 두 번 자가 혈액을 주입합니다. 이중 분사 방법은 온화한(30 μL) 및 중간(60 μL) 폰틴 출혈을 유도하기 위해 적용되지만 대규모 폰틴 출혈은 유발되지 않습니다. 클리닉에서, 가난한 예후를 가진 pontine 출혈 환자의 대다수는 거대한 출혈이 있습니다 (10 mL 이상).
이전 연구에서는, 우리는 쥐10에서pontine 허혈성 뇌졸중 모델을 설정하는 프로토콜을 제공했다. 본 연구에서는, 기존의 이중 주입 방법을 수정하고, 폰의 두 개의 다른 위치에서 100 μL 자가 혈액의 이중 주입에 의해 쥐에서 대규모 pontine 출혈을 유도하는 상세한 프로토콜을 제공한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
본 연구에서는, 우리는 거대한 pontine 출혈 쥐 모형을 생성하는 프로토콜을 제공했습니다. 이 모형은 거대한 pontine 출혈의 병리학 적인 기계장치 그리고 예후에 대한 연구에 사용될 수 있습니다.
실험 내내 25마리의 쥐가 사용되었고, 그 중 한 마리만 죽었습니다. MRI의 확인, 총 해부학, 그리고 HE 염색이 방법은 매우 낮은 사망률과 높은 성공률을 가지고 있음을 나타냈다. 거대한…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 중국 국립 과학 재단 (81471181 및 81870933)과 광저우 의과 대학 (0506308)의 오프닝 랩 프로그램 (0506308)과 중국 국립 과학 재단 (81701471)과 광저우 시 보건위원회 (20191A011083)의 과학 프로그램 및 중국 국립 과학 재단 (81501009)에 의해 재정적으로 지원되었습니다.
Materials
| 100ml Saline solution | Guangdong yixiang | 191222201 C1 | Preparing heparin diluent |
| 100μl Microinjector | Shanghai Gaoge | Injection of autologous blood | |
| 1ml Syringe | Jiangsu Zhiyu | 20191014 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| 75% Alcohol | Shandong Lierkang | Disinfection of rat tail | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | R510-31S-6 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Balance beam | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Blades | Shanghai Feiying | 74-C | For gross anatomy |
| Bone cement | Shanghai Xinshiji | 20180306 | Surgicl instruments |
| Brain tank | Shenzhen LEIYEA | For gross anatomy | |
| Butorphanol tartrate | Jiangsu Hengrui | For pain management | |
| Electric cranial drill | Nanjing Darwin biotechnology | 20180090018 | Making a burr hole on the skull |
| EP tube | Nantong Surui | Transfer autologous blood | |
| Erythromycin eye cream | Yunnan pharmacy | Eyes protection | |
| HE dye liquor | Solarbio | G1120 | For HE staining |
| Heating pad | Dangerous Jungle | JR01 | Keeping warm |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmacal Company | 190701 | Preparing heparin diluent |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 20080701 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Light dark box | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Micro-injection pump | Baoding Leifu | TFD03-01-C | Injection of autologous blood |
| MRI system | Philips | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | J32020 | Surgicl instruments |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Q-tips | Jiangxi Songhe | Surgicl instruments | |
| Scalp heedle | Jiangxi Hongda | 20200313 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| Scalpel | Shanghai Kaiyuan | 170902 | Surgicl instruments |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Y00040 | Surgicl instruments |
| Stereotaxic apparatus | RWD | 900-00001-00 | for surgical positioning |
| Surgical towel | Xinxiang Huakangweicai | 20070601 | Surgicl instruments |
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Suture scissors | Shanghai Jinzhong | J25041 | Surgicl instruments |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | J31080 | Surgicl instruments |
References
- Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
- Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
- Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
- Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
- Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
- Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
- Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
- Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
- Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
- Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
