Massiv pontinsk blödning genom dubbel injektion av autologt blod

Summary

Vi presenterar ett protokoll för att upprätta en massiv pontinska blödning modell i en råtta via dubbla injektion av autolog blod.

Abstract

Vi tillhandahåller ett protokoll för att etablera en massiv pontinsk blödningsmodell hos en råtta. Råttor som väger cirka 250 gram användes i denna studie. Hundra mikroliter autologt blod togs från svans venen och stereotaxically injiceras i pons. Injektionsprocessen delades in i 2 steg: Först injicerades 10 μL blod på en specifik plats, anteroposterior position (AP) -9, 0 mm; sido (Lat) 0 mm; vertikal (Vert) -9,2 mm, följt av en andra injektion av restblodet vid AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm med 20 minuters intervall. Balansstråletestet, limb placering test och den modifierade Voestch neuroscore användes för att utvärdera neurologiska funktion. Magnetic Resonance Imaging (MRT) användes för att bedöma volymen av blödning in vivo. Symptomen på denna modell var i linje med patienter med massiva pontinska blödning.

Introduction

Intracerebral blödning står för en femtedel av strokepatienterna. Prognosen för intrakraniell blödning beror på blödningens hastighet, volym och placering av blödning^1,2. Jämfört med förhjärnblödningen har hjärnstammen blödning högre dödlighet och sjuklighet³. Cirka 40% av hjärnstammen blödning förekommer i pons⁴. Etiologin och patofysiologin hos pontinblödning är helt annorlunda och mindre studerade än förhjärnblödning⁵.

Det finns två typer av pontinska blödningsdjurmodeller. Den ena är spontan blödningsmodell inducerad genom infusion av bakteriella kollagenaser i ponsna^6,7,8. Den största fördelen med denna modell är att blödningen är spontan. Kollagenas kan dock bara inducera en liten volym pontinblödning. Dessutom kan kollagenas orsaka andra skador på hjärnan. Den andra modellen induceras genom stereotaktisk injektion av autologt blod i pons⁹. Fördelen med denna modell är att det är lätt att behärska med en hög framgångsgrad. Teoretiskt sett kan forskare injicera vilken mängd blod som helst på vilken plats som helst av pons. På grund av ryggläckaget genom nålvägen är dock den injicerade volymen begränsad. Nyligen har dubbelinjektionsmetoden främjats för att minska ryggläckaget⁹. Denna metod injicerar autologt blod två gånger med 20 minuters intervall mellan injektionerna. Dubbelinsprutningsmetoden används för att inducera mild (30 μL) och måttlig (60 μL) pontinblödning men inte massiv pontinblödning. I kliniken har majoriteten av pontinska blödningspatienter med dålig prognos massiv blödning (mer än 10 ml).

I den tidigare studien tillhandahöll vi ett protokoll för att upprätta en pontinsk ischemisk strokemodell hos råtta¹⁰. I denna studie ändrar vi den befintliga dubbla injektionsmetoden och ger ett detaljerat protokoll för att inducera massiv pontin blödning hos en råtta genom dubbel injektion av 100 μL autologt blod på två olika platser i pons.

Protocol

Protokollet granskades och godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee vid det andra anslutna sjukhuset i Guangzhou Medical University. Råttor tillhandahölls av Animal Center of Southern Medical University. Den experimentella designen visas i figur 1. 1. Djur och instrument Använd 8 veckor gamla hanråttor som väger 250 ± 10 g. Inhys råttorna i minst 7 dagar före operationen under kontrollerade miljöförhållanden med en o…

Representative Results

Totalt användes 25 djur, 3 för kontroll, 6 för 30 μL, 6 för 60 μL och 10 för 100 μL blodinjektioner. En råtta som fick en 100 μL injektion av autologt blod (1/10) dog inom 24 timmar efter kirurgi. Beteendetester utfördes dag 1, dag 3, dag 7 och dag 14 efter operationen. Poängen för kontrollgruppen och blodinjektionsgrupperna på olika tidpunkter efter operationen presenteras i tabell 2. Pontin blöd…

Discussion

I den nuvarande studien tillhandahöll vi ett protokoll för att generera en massiv pontinsk blödning råtta modell. Denna modell kan användas för forskning om patofysiologisk mekanism och prognos av massiva pontin blödning.

Under hela experimentet användes 25 råttor, varav endast en dog. Verifieringen av MRI, brutto anatomi och HE färgning anges att denna metod hade en mycket låg dödlighet och en hög framgång. För att fastställa massiv pontinblödningsmodell måste två problem l…

Materials

100ml Saline solution	Guangdong yixiang	191222201 C1	Preparing heparin diluent
100μl Microinjector	Shanghai Gaoge		Injection of autologous blood
1ml Syringe	Jiangsu Zhiyu	20191014	Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol	Shandong Lierkang		Disinfection of rat tail
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Animal anesthesia system	RWD	R510-31S-6	Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Blades	Shanghai Feiying	74-C	For gross anatomy
Bone cement	Shanghai Xinshiji	20180306	Surgicl instruments
Brain tank	Shenzhen LEIYEA		For gross anatomy
Butorphanol tartrate	Jiangsu Hengrui		For pain management
Electric cranial drill	Nanjing  Darwin biotechnology	20180090018	Making a burr hole on the skull
EP tube	Nantong Surui		Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream	Yunnan pharmacy		Eyes protection
HE dye liquor	Solarbio	G1120	For HE staining
Heating pad	Dangerous Jungle	JR01	Keeping warm
Heparin sodium injection	Chengdu Haitong Pharmacal Company	190701	Preparing heparin diluent
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	20080701	Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Micro-injection pump	Baoding Leifu	TFD03-01-C	Injection of autologous blood
MRI system	Philips		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong	J32020	Surgicl instruments
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Q-tips	Jiangxi Songhe		Surgicl instruments
Scalp heedle	Jiangxi Hongda	20200313	Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel	Shanghai Kaiyuan	170902	Surgicl instruments
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong	Y00040	Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus	RWD	900-00001-00	for surgical positioning
Surgical towel	Xinxiang Huakangweicai	20070601	Surgicl instruments
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Suture scissors	Shanghai Jinzhong	J25041	Surgicl instruments
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong	J31080	Surgicl instruments