एक ओपन-सोर्स, मॉड्यूलर फ्लोरीमीटर बनाने के लिए विस्तृत निर्देश प्रदान किए जाते हैं जो वास्तविक समय, मात्रात्मक आइसोथर्मल न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन करने के लिए कई कम लागत वाले हीटर के साथ संगत है।
न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए पारंपरिक तरीके पॉलीमरेज चेन रिएक्शन (पीसीआर) पर भरोसा करते हैं और एम्प्लिकॉन के एकीकृत फ्लोरेसेंस डिटेक्शन के साथ महंगे थर्मोसाइकिलर्स के उपयोग की आवश्यकता होती है। आइसोथर्मल न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकियां थर्मल साइकिलिंग की आवश्यकता को खत्म करते हैं; हालांकि, वास्तविक समय, मात्रात्मक परिणामों के लिए उत्पादों का फ्लोरेसेंस-आधारित पता लगाना अभी भी आवश्यक है। एकीकृत फ्लोरेसेंस डिटेक्शन के साथ कई पोर्टेबल आइसोथर्मल हीटर अब व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं; हालांकि, इन उपकरणों की लागत संसाधन-सीमित सेटिंग्स में व्यापक गोद लेने के लिए एक महत्वपूर्ण बाधा बनी हुई है। यहां वर्णित एक मॉड्यूलर, कम लागत वाले फ्लोरीमीटर के डिजाइन और असेंबली के लिए एक प्रोटोकॉल है जो ऑफ-द-शेल्फ घटकों से बनाया गया है। एक कॉम्पैक्ट 3 डी मुद्रित आवास में संलग्न, फ्लोरीमीटर को पीसीआर ट्यूब रखने वाले व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हीट ब्लॉक के ऊपर रखा जाना डिज़ाइन किया गया है। यहां वर्णित फ्लोरीमीटर फ्लोरोसिन आइसोथियोसायनेट (फिटसी) डाई का पता लगाने के लिए अनुकूलित किया गया था, लेकिन सिस्टम को वास्तविक समय न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं में संवाददाताओं के रूप में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले रंगों के साथ उपयोग के लिए संशोधित किया जा सकता है। प्रणाली की नैदानिक प्रयोज्यता दो आइसोथर्मल प्रवर्धन प्रौद्योगिकियों के साथ वास्तविक समय न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के द्वारा प्रदर्शित की जाती है: एसएएसएस-सीओवी-2 आरएनए के नैदानिक रूप से सार्थक स्तरों का पता लगाने के लिए एक वाणिज्यिक किट और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन लूप-मध्यस्थता आइसोथर्मल प्रवर्धन (आरटी-लैंप) में प्रदान किए गए सकारात्मक नियंत्रण डीएनए का पता लगाने के लिए पॉलीमरेज प्रवर्धन (आरपीए) का पुनर्संयोजन करें।
आइसोथर्मल प्रवर्धन प्रौद्योगिकियों का व्यापक रूप से नाभिक एसिड का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। थर्मोसाइक्लिंग की आवश्यकता वाले पारंपरिक पीसीआर दृष्टिकोणों की तुलना में, आइसोथर्मल प्रवर्धन न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन को एक ही तापमान पर होने की अनुमति देता है, इस प्रकार तेजी से समय-से-परिणाम और अवरोधकों की बेहतर सहनशीलता1,2सक्षम होती है। आइसोथर्मल प्रवर्धन का एक और प्रमुख लाभ कम इंस्ट्रूमेंटेशन जटिलता है। अधिकांश इसोथर्मल प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं के लिए केवल एक हीट ब्लॉक और एक डिटेक्शन मोडलेमी-या तो वास्तविक समय का पता लगाने की आवश्यकता होती है फ्लोरेसेंस मॉनिटरिंग या एंडपॉइंट डिटेक्शन के माध्यम से, उदाहरण के लिए पार्श्व प्रवाह या जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस3,4। वास्तविक समय फ्लोरेसेंस का पता लगाने के माध्यम से पूरा किया जाता है, जो उन रंगों को इंटरकैलेट करके उत्पादित फ्लोरेसेंस का पता लगाया जाता है जो दोहरे फंसे डीएनए या शमन फ्लोरोसेंट जांच की उपस्थिति में सक्रिय होते हैं जो विशिष्ट डबल-फंसे डीएनए दृश्यों की उपस्थिति में सक्रिय होते हैं।
जबकि व्यावसायिक रूप से उपलब्ध बेंचटॉप इसोथर्मल फ्लोरीमीटर मौजूद है, कई परख कार्यान्वयन के लिए अनुकूलन की कमी है। उदाहरण के लिए, कई उपकरणों के लिए विशिष्ट या कंपनी द्वारा प्रदान किए गए उपभोग्य वस्तुओं की आवश्यकता होती है, पसंदीदा विक्रेताओं की सिफारिश करते हैं, या विज्ञापित परिणाम प्राप्त करने के लिए मालिकाना सॉफ्टवेयर का उपयोग करते हैं। इनमें से अधिकांश प्रणालियों की लागत $ 5,000 USD से अधिक है, जो संसाधन-सीमित सेटिंग्स में व्यापक उपयोग के लिए एक महत्वपूर्ण बाधा का प्रतिनिधित्व करती है। इसके अलावा, कम संसाधन सेटिंग्स में उपयोगकर्ताओं को कठोर पर्यावरणीय स्थितियों, स्पेयर पार्ट्स के लिए कमजोर आपूर्ति श्रृंखला, और रखरखाव और मरम्मत 5 के लिए आवश्यक विशेष उपकरणों के कारण उच्च संसाधन सेटिंग्स के लिए डिजाइन किए गए उपकरणों को बनाए रखने के लिए चुनौतियों कासामनाकरना पड़ता है। इस आवश्यकता को पूरा करने के लिए, यहां वर्णित एक मॉड्यूलर और कम लागत वाले फ्लोरीमीटर का डिजाइन और असेंबली है जो दो वैकल्पिक विन्यास के साथ कॉम्पैक्ट 3 डी मुद्रित आवास(आंकड़े 1A–सी)में संलग्न ऑफ-द-शेल्फ घटकों से निर्मित है। इस डिवाइस का पहला विन्यास अतिरिक्त पृष्ठभूमि प्रकाश को ब्लॉक करने के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ग्लास फिल्टर और एक डिक्रोइक मिरर का उपयोग करता है और इसमें $ 830 USD की असेंबली की कुल लागत है। जबकि इन फिल्टरों का उपयोग आमतौर पर फ्लोरेसेंस-आधारित इमेजिंग सिस्टम में किया जाता है, महंगी उच्च ग्रेड ऑप्टिकल फिल्टर फॉयल की जगह पहले न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन6के लिए अनुमति देने के लिए दिखाया गया है। फ्लोरीमीटर का दूसरा विन्यास इन सस्ती फिल्टर को शामिल करता है और डिक्रोइक दर्पण को φ1/2 “बीम स्प्लिटर के साथ बदलता है, जिससे सिस्टम की समग्र लागत $ 830 से $ 450 USD तक कम हो जाएगी।
विधानसभा के प्रतिनिधि चित्र चित्र 1 और चित्रा 2 में पहले विन्यास के लिए दिखाए जाते हैं, लेकिन दूसरे विन्यासके लिए अनुरूप छवियां पूरक फ़ाइल 6में पाई जा सकती हैं। विशेष ऑप्टिकल संरेखण की आवश्यकता से बचने के लिए, ऑप्टिकल सिस्टम ने प्रत्येक ऑप्टिकल घटक को रखने के लिए क्षेत्रों को नामित किया है और डिजाइन के व्यापक उपयोग के लिए अपेक्षाकृत कम अंत 3 डी प्रिंटर के साथ बनाया जा सकता है। दो विन्यास के लिए निर्माण और विधानसभा में केवल अंतर 3 डी प्रिंटिंग और बाड़े में रखे ऑप्टिकल घटकों के लिए उपयोग की जाने वाली फाइलें हैं। दोनों प्रणालियों के लिए 3 डी मुद्रित बाड़े के बाहरी आयाम एक ही हैं। दोनों प्रणालियों की लागत तुलना तालिका 1में दिखाई गई है।
जैसा कि चित्रा 1Aमें दिखाया गया है, एक छोटे रूप कारक को बनाए रखने के लिए, फ्लोरीमीटर में Φ1/2 “(~ 12.5 मिमी) प्रकाशिकी शामिल हैं, जो कॉम्पैक्ट रोशनी और पता लगाने के साथ मिलकर पीसीआर ट्यूब के शीर्ष के माध्यम से संकेत को मापने के लिए रखे जाते हैं। चित्रा 1 में प्रणाली को क्रमशः 490 एनएम और 525 एनएम के पास पीक उत्तेजना और उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य के साथ रंगों का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया है, जिसमें फिटसी और सिबीआर और एसटीईटीओ-9 जैसे बारीकी से संबंधित रंग शामिल हैं, जो आमतौर पर वास्तविक समय न्यूक्लिक एसिडेशन प्रतिक्रियाओं7,8में संवाददाताओं के रूप में उपयोग किए जाते हैं। उत्तेजन स्रोत, ऑप्टिकल फिल्टर, और डिटेक्टर आसानी से वांछित के रूप में विभिन्न फ्लोरोसेंट रंगों के साथ संगत घटकों के लिए प्रतिस्थापित किया जा सकता है। न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं को आम तौर पर पीसीआर ट्यूबों में किया जाता है, और फ्लोरीमीटर को किसी भी व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हीट ब्लॉक के ऊपर रखा जा सकता है जो पीसीआर ट्यूब(चित्रा 1D) रखताहै जो इसोथर्मल प्रतिक्रियाओं की वास्तविक समय निगरानी के लिए अनुमति देता है। उपयुक्त हीट ब्लॉक अधिकांश जैव चिकित्सा प्रयोगशालाओं में उपलब्ध हैं और $ 500 USD से कम के लिए खरीदे जा सकते हैं।
इमेजिंग प्रौद्योगिकियों को नियंत्रित करने के लिए कम लागत, देखभाल विकल्प के बिंदु प्रदान करने के लिए एकल बोर्ड कंप्यूटरों का उपयोग पहले9का प्रदर्शन किया गया है । उस काम को बंद करना, इस प्रोटोकॉल में एक एकल-बोर्ड कंप्यूटर-संचालित ग्राफिकल यूजर इंटरफेस(चित्रा 1D)का उपयोग वास्तविक समय डेटा लॉगिंग और देखभाल के बिंदु पर परिणामों के प्रदर्शन को सुविधाजनक बनाने के लिए किया जाता है, जिससे डेटा को संसाधित करने या कल्पना करने के लिए लैपटॉप कंप्यूटर की आवश्यकता को समाप्त किया जा सके। फ्लोरेसेंस माप को आई2सी प्रोटोकॉल के माध्यम से प्रकाश सेंसर से माइक्रोकंट्रोलर में स्थानांतरित कर दिया गया था, और फिर धारावाहिक संचार के माध्यम से एकल बोर्ड कंप्यूटर को उपलब्ध कराया गया था। विशेष मुद्रित सर्किट बोर्डों (पीसीबी) की आवश्यकता को नकारते हुए, लघुकृत ब्रेडबोर्ड पर सरलीकृत तारों और टांका के माध्यम से रोशनी और डेटा हस्तांतरण के लिए विद्युत कनेक्शन प्रदान किए गए थे। फ्लोरीमीटर चलाने के लिए आवश्यक सॉफ्टवेयर ओपन-सोर्स सॉफ्टवेयर फ्रेमवर्क के माध्यम से उपलब्ध है और डिवाइस को चलाने के लिए आवश्यक कोड पूरक कोडिंग फाइलोंमें प्रदान किया जाता है। पूर्ण फ्लोरीमीटर $ 450 से $ 830 USD के बीच इकट्ठा किया जा सकता है, और परिणाम बताते हैं कि यह न्यूक्लिक एसिड के वास्तविक समय के आइसोथर्मल प्रवर्धन की निगरानी करने के लिए सटीक और विश्वसनीय फ्लोरेसेंस माप प्रदान करता है।
यहां वर्णित एक ओपन-सोर्स, कम लागत, मॉड्यूलर, पोर्टेबल फ्लोरीमीटर है जो इसोथर्मल प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं का मात्रात्मक फ्लोरेसेंस डिटेक्शन के लिए है। ओपन-सोर्स परियोजनाएं आसानी से उपलब्ध प्रतिस्थापन भागों के साथ तेजी से और सस्ती रखरखाव की सुविधा प्रदान करती हैं और उपयोगकर्ताओं को मॉड्यूलर डिजाइन के आधार पर सिस्टम को उनकी आवश्यकताओं के अनुकूल बनाने की छूट देती हैं। यह प्रोटोकॉल यांत्रिक, ऑप्टिकल और विद्युत घटकों को कोडांतरण करने और ऑप्टिकल प्रदर्शन को मान्य करने की प्रक्रिया का वर्णन करता है। इसके अलावा, फ्लोरीमीटर के लचीलेपन को दो अलग-अलग प्रकार के आइसोथेमल प्रवर्धन परखने के लिए काफी अलग तापमान, मात्रा और फ्लोरेसेंस आवश्यकताओं, आरपीए एक्सो और आरटी-लैंप के साथ प्रदर्शित किया गया था। आरपीए 50 माइक्रोन प्रतिक्रियाओं में 39 डिग्री सेल्सियस पर किया जाता है जो फ्लोरेसेंस जनरेशन के लिए अनुक्रम-विशिष्ट एफएएम-टैग की गई जांच का उपयोग करता है, जबकि आरटी-लैंप 25 माइक्रोन प्रतिक्रिया मात्रा में 65 डिग्री सेल्सियस पर किया जाता है और प्रवर्धित डीएनए की उपस्थिति की रिपोर्ट करने के लिए एक इंटरकैलिंग डाई का उपयोग करता है। क्योंकि फ्लोरेसेंस माप फ्लैट टोपियां के साथ पीसीआर ट्यूबों के शीर्ष के माध्यम से किए जाते हैं, फ्लोरीमीटर दोनों परख की मात्रा से फ्लोरेसेंस का पता लगाने में सक्षम है, और गर्मी की आवश्यकताएं केवल वाणिज्यिक गर्मी ब्लॉक द्वारा सीमित हैं। इसके अलावा, आरटी-लैंप में उत्पादित फ्लोरेसेंस तीव्रता लगभग आरपीए में उत्पादित परिमाण से अधिक के क्रम में है, क्योंकि फ्लोरेसेंस सिग्नल उत्पादन के डाई बनाम जांच-आधारित तरीकों के कारण। हालांकि, चुने गए ऑप्टिकल सेंसर की गतिशील रेंज दोनों संकेतों का पता लगा सकती है और मात्रा निर्धारित कर सकती है, और इन मतभेदों के लिए बेसलाइन घटाव एल्गोरिदम खाते हैं ताकि विश्वसनीय फ्लोरेसेंस रीडिंग का उत्पादन किया जा सके।
प्रौद्योगिकी प्रसार को सुविधाजनक बनाने और संभावित रखरखाव लागत को कम करने के लिए, एक मॉड्यूलर डिजाइन जो विभिन्न सेटिंग्स में व्यापक रूप से उपलब्ध हीटर के साथ संगत है, नियोजित किया गया था। वर्तमान प्रोटोकॉल में, एक आम ड्राई ब्लॉक हीटर का उपयोग किया गया था; एक ही ऑप्टिकल और विद्युत डिजाइन आसानी से अन्य व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हीटर के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। यदि एक और ड्राई ब्लॉक हीटर का उपयोग किया जाना है, तो 3 डी आवास डिजाइन में न्यूनतम परिवर्तन की आवश्यकता होगी। विशेष रूप से, ऑप्टिकल बाड़े एसटीएल फाइलों के नीचे खूंटे को अन्य वाणिज्यिक गर्मी ब्लॉकों के कुओं के साथ उचित संरेखण सुनिश्चित करने के लिए संशोधित किया जाना चाहिए। जबकि उदाहरणों में दिखाए गए बाड़ों को अपेक्षाकृत कम-अंत 3डी प्रिंटर (सामग्री की तालिकादेखें) पर मुद्रित किया गया था, यह सुनिश्चित करने के लिए देखभाल की जानी चाहिए कि प्रिंटर संकल्प और/या प्रिंट सहिष्णुता ऑप्टिकल घटकों और थ्रेड्ड आवेषण को समायोजित करने के लिए पर्याप्त हैं । प्रदान की गई एसटीएल फाइलों में, निर्माता द्वारा निर्दिष्ट आयामों के आधार पर रेडियल और अक्षीय दिशाओं में ऑप्टिकल घटकों के दोनों ओर 0.01-0.02 इंच की सहिष्णुता जोड़ी गई थी। यह सुनिश्चित करता है कि सभी ऑप्टिकल घटक प्रिंट के भीतर सुरक्षित रूप से फिट होते हैं और बाड़े पूरी तरह से अतिरिक्त प्रकाश को प्रवेश करने या बचने से रोकता है। पिरोए गए आवेषण के लिए एक उचित प्रेस फिट सुनिश्चित करने के लिए, सीएडी फ़ाइल में निर्माता द्वारा प्रदान किए गए व्यास से 0.01-0.02 इंच की समान सहिष्णुता को घटाया गया था।
आरपीए प्रतिक्रियाओं को पहले फ्लोरीमीटर विन्यास का उपयोग करके सफलतापूर्वक निगरानी की गई थी, जबकि आरटी-लैंप प्रतिक्रियाओं को या तो विन्यास का उपयोग करके निगरानी की जा सकती थी। आरपीए प्रतिक्रियाओं में फ्लोरोजेनिक जांच द्वारा उत्पादित फ्लोरोसेंस के निम्न स्तर की निगरानी के लिए पहले विन्यास की बेहतर आवारा प्रकाश अस्वीकृति आवश्यक थी। इसके विपरीत, आरटी-लैंप सिग्नल उत्पादन के लिए एक इंटरकैलिटिंग डाई का उपयोग करता है, जिसके परिणामस्वरूप उच्च फ्लोरेसेंस तीव्रता होती है जो फोटोग्राफिक फ़िल्टर फॉयल का उपयोग करके दूसरे विन्यास की कम गतिशील रेंज के साथ संगत होती है। उपयोगकर्ताओं को फ्लोरीमीटर विन्यास का चयन करना चाहिए जो फ्लोरेसेंस सिग्नल से मेल खाता है जो तत्व-इंटरकैलिटिंग डाई या फ्लोरोजेनिक प्रोब-ऑफ उनकी परख से मेल खाता है।
इस प्रणाली की एक सीमा यह है कि हीटिंग एक मानक दीवार आउटलेट के माध्यम से संचालित एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध गर्मी ब्लॉक द्वारा प्रदान की जाती है । इस प्रणाली को अन्यसमूहोंद्वारा दिखाए गए पोर्टेबल और रिचार्जेबल बैटरी पैक को शामिल करके बिजली तक विश्वसनीय पहुंच वाले क्षेत्रों में उपयोग के लिए और विकसित किया जा सकता है । एक और सीमा प्रणाली का अपेक्षाकृत कम थ्रूपुट है, जो एक समय में केवल दो नमूनों के एक साथ फ्लोरेसेंस माप की अनुमति देता है। थ्रूपुट बढ़ाने के लिए बाड़े के कई प्रिंट एक ही हीट ब्लॉक के ऊपर रखे जा सकते हैं; हालांकि, उपयोग किए गए प्रकाश सेंसर में केवल चार अद्वितीय I2C पते हैं। यह नमूनों की अधिकतम संख्या को प्रतिबंधित करता है जिसे एक साथ चार तक मापा जा सकता है। थ्रूपुट को और बढ़ाने के लिए बड़ी संख्या में अद्वितीय I2C पतों के साथ एक अलग प्रकाश सेंसर की आवश्यकता है।
The authors have nothing to disclose.
नमूना तैयार करने के साथ उनकी सहायता के लिए चेल्सी स्मिथ, मेगन चांग, एमिली न्यूशम, साई पॉल और क्रिस्टोफर गोह को विशेष धन्यवाद। लेखक पांडुलिपि संशोधन के लिए कैरोलीन नोक्सन का शुक्रिया अदा करते हैं । इस काम के लिए धन USAVI द्वारा अमेरिकी लोगों से पुरस्कार सहायता के तहत एक IAVI अनुसंधान अनुदान CCID 9204 के माध्यम से प्रदान किया गया था-A16-A16-00032 IAVI और यूएसएड के बीच.
1/4-inch-long 4-40 threaded insert | McMaster-Carr | 90742A116 | Used to secure the two sides of the 3D printed optical enclosure together. |
10v power supply | GlobTek, Inc. | WR9HU1800CCP-F(R6B) | AC/DC Wall Mount Adapter 10V 18W |
15 mm focal length lens | Thorlabs | LA 1074 | Two total are used for the fluorimeter. This lens is used to focus the LED illumination. |
1-inch-long 4-40 screws | McMaster-Carr | ||
20 mm focal length lens | Thorlabs | LA 1540 | Four total are used for the fluorimeter. |
2x WarmStart LAMP Master Mix | New England Biolabs, Inc | E1700 | Master mix was used to create the LAMP reactions shown in Figure 3C |
3.5” Touch Screen | Uctronics | BO10601 | |
3/16-inch-long 4-40 screw | McMaster-Carr | 90128A105 | |
3/16-inch-long 4-40 threaded insert | McMaster-Carr | 90742A115 | Used to secure the OPT3002 test board onto the 3D printed enclosure |
3/8-inch-long 4-40 screws | McMaster-Carr | 90128A108 | Used to secure the two sides of the 3D printed optical enclosure together. |
3D printer filament | 3D Universe | UMNFC-PC285-BLACK | Black or another dark color preferred |
3D printer used | Ultimaker | Ultimaker 2+ | |
8-tube PCR strips | BioRad | #TLS0801 | |
Advanced Mini Dry Block Heater | VWR International | 10153-320 | The following heat blocks are acceptable substitutes without the need for redesigning the optical assembly: 949VWMNLUS, 949VWMHLUS, and 949VWMHLEU |
barrel jack to two-pin adapter | SparkFun Electronics | 1568-1238-ND | |
Blue Excitation Filter Foil | LEE | LE071S | Selected for use with FITC – other fluorescent dyes may require different filters. |
Blue LED – 460 nm | Mouser | LZ1-30DB00-0100 | Selected for use with FITC – other fluorescent dyes may require different parts |
Dichroic Mirror | Thorlabs | DMLP505T | Selected for use with FITC – other fluorescent dyes may require different parts |
Emission Filter | Edmunds Optics | OG-515 | Selected for use with FITC – other fluorescent dyes may require different parts. The arrow on the part points away from the illumination source. |
Excitation Filter | Omega Filters | 490AESP | Selected for use with FITC – other fluorescent dyes may require different parts |
LED Driver | LEDdynamics | 3021-D-I-700 | |
M2.5 Hex Shaped insert | McMaster-Carr | 91292A009 | Used to secure the Raspberry Pi to the 3D printed LCD Screen Holder |
Microcontroller | Arduino | Nano | |
Mini Breadboard | Adafruit | 65 | |
Molecular biology-grade mineral oil | Sigma Aldrich | 69794 | |
OPT3002EVM – Light-to-Digital Sensor | Texas Instruments | OPT3002EVM: | Light-to-digital sensor used. Consists of two PCBs: a SM-USB_DIG board and the OPT3002 test board; only the OPT3002 test board is needed for this device. |
Purchased oligonucleotides | Integrated DNA Technologies | ||
RPA kit positive control DNA | TwistDx Limited | CONTROL01DNAE | |
SARS-CoV-2 RNA Control | Twist Biosciences | MN908947.3 | |
Single board computer | Raspberry Pi | Raspberry Pi 3 | |
TwistAmp RPA exo kit | TwistDx Limited | TAEXO02KIT | |
Ultraclear flat caps | BioRad | #TCS0803 | |
Yellow Emmission Filter Foil | LEE | LE767S | Selected for use with FITC – other fluorescent dyes may require different parts |