Glioma kök hücreleri (GSC’ ler), en yaygın ve yıkıcı primer beyin tümörü olan glioblastomda (GBM) tümör başlatma, anjiogenez ve ilaç direncinde önemli roller oynayan kanser hücrelerinin küçük bir kısmıdır. GSC’lerin varlığı GBM’yi hedeflenen ajanların çoğu için çok refrakter hale getirir, bu nedenle potansiyel etkili kombinasyon terapötiklerini tanımlamak için yüksek verimli tarama yöntemleri gerekir. Protokol, sinerjik etkileşim ile potansiyel kombinasyon tedavisi için hızlı tarama sağlamak için basit bir iş akışını açıklar. Bu iş akışının genel adımları luciferaz etiketli GSC’lerin kurulması, matrigel kaplamalı plakaların hazırlanması, kombinasyon ilaç taraması, analiz ve sonuçların doğrulaştırılmasından oluşur.
Glioma kök hücreleri (GSC’ ler), en yaygın ve yıkıcı primer beyin tümörü olan glioblastomda (GBM) tümör başlatma, anjiogenez ve ilaç direncinde önemli roller oynayan kanser hücrelerinin küçük bir kısmıdır. GSC’lerin varlığı GBM’yi hedeflenen ajanların çoğu için çok refrakter hale getirir, bu nedenle potansiyel etkili kombinasyon terapötiklerini tanımlamak için yüksek verimli tarama yöntemleri gerekir. Protokol, sinerjik etkileşim ile potansiyel kombinasyon tedavisi için hızlı tarama sağlamak için basit bir iş akışını açıklar. Bu iş akışının genel adımları luciferaz etiketli GSC’lerin kurulması, matrigel kaplamalı plakaların hazırlanması, kombinasyon ilaç taraması, analiz ve sonuçların doğrulaştırılmasından oluşur.
Glioblastoma (GBM) primer beyin tümörünün en sık görülen ve agresif tipidir. Şu anda, maksimal tedavi (cerrahi, kemoterapi ve radyoterapi kombinasyonu) alan GBM hastalarının genel sağkalımları hala 15 aydan kısadır; bu nedenle GBM için yeni ve etkili tedaviler acilen gereklidir.
GBM’de glioma kök hücrelerinin (GSC) varlığı, bu kök benzeri hücreler tümör mikroçevrimi, ilaç direnci ve tümör nüks1’insürdürülmesinde pivot roller oynadığından geleneksel tedavi için önemli bir zorluk oluşturmaktadır. Bu nedenle, GSC’leri hedeflemek GBM tedavisi için umut verici bir strateji olabilir2. Bununla birlikte, GBM’deki ilaç etkinliğinin en büyük dezavantajı, genetik mutasyonlar, karışık alt tipler, epigenetik regülasyon ve tümör mikroçevrimi arasındaki fark dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere heterojen doğasıdır ve bu da onları tedavi için çok refrakter hale getirir. Birçok başarısız klinik çalışmadan sonra, bilim adamları ve klinik araştırmacılar, tek ajan hedefli tedavinin muhtemelen GBM gibi yüksek heterojen kanserlerin ilerlemesini tam olarak kontrol edemediğini fark ettiler. Oysa özenle seçilmiş ilaç kombinasyonları, sinerjik olarak birbirlerinin etkisini artırarak etkinliği için onaylanmıştır, böylece GBM tedavisi için umut verici bir çözüm sağlanmıştır.
Bir ilaç kombinasyonunun ilaç-ilaç etkileşimlerini değerlendirmenin birçok yolu olmasına rağmen, CI (Kombinasyon İndeksi), HSA (En Yüksek Tek Ajan) ve Saadet değerlerivb. Gerçekten de, bu yöntemler ilaç-ilaç etkileşiminin olumlu değerlendirmesini sağlayabilir, ancak yüksek verimli taramada uygulanırsa çok zahmetli olabilir. Süreci basitleştirmek için, hasta GBM’nin cerrahi biyopsilerinden kaynaklanan GSC’lerin büyümesini engelleyen potansiyel ilaç kombinasyonlarını hızlı bir şekilde tanımlamak için bir tarama iş akışı geliştirilmiştir. Her ilacın sinerjik etkisini ölçmek için bu yönteme beklenen kombine etkinin ve gözlenen kombine etkinin farkını yansıtan bir duyarlılık Endeksi (SI) getirilmiştir, böylece potansiyel adaylar SI sıralaması ile kolayca tanımlanabilir. Bu arada, bu protokol, 20 küçük moleküler inhibitör arasında GBM tedavisi için birinci basamak kemoterapi olan temozolomid ile anti-glioma etkisini sinerjiye sokabilecek potansiyel aday(lar) tanımlamak için örnek bir ekran göstermektedir.
Bu çalışmada, hasta kaynaklı GSC’ler kullanılarak GBM için potansiyel kombinasyon tedavisini tanımlamak için uygulanabilecek bir protokol tanımlanmıştır. Loewe, BLISS veya HSA yöntemleri gibi standart sinerji/ekleme ölçüm modelinin aksine, bir ilaç çiftinin geleneksel yöntemler olarak tam bir faktöryel şekilde birden fazla konsantrasyonda birleştirilmesini gerektirmeyen basit ve hızlı bir iş akışı kullanılmıştır. Bu iş akışında, iki küçük moleküler inhibitörün sinerjik ilaç etki…
The authors have nothing to disclose.
Desteklerinden dolayı Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81672962), Jiangsu İl İnovasyon Ekibi Programı Vakfı ve Güneydoğu Üniversitesi ve Nanjing Tıp Üniversitesi Ortak Anahtar Proje Vakfı’na teşekkür ediyoruz.
B-27 | Gibco | 17504-044 | 50X |
EGF | Gibco | PHG0313 | 20 ng/ml |
FGF | Gibco | PHG0263 | 20 ng/ml |
Gluta Max | Gibco | 35050061 | 100X |
Neurobasal | Gibco | 21103049 | 1X |
Penicillin-Streptomycin | HyClone | SV30010 | P: 10,000 units/ml S: 10,000 ug/ml |
Sodium Pyruvate | Gibco | 2088876 | 100 mM |
Table 1. The formulation of GSC complete culture medium. | |||
ABT-737 | MCE | Selective and BH3 mimetic Bcl-2, Bcl-xL and Bcl-w inhibitor | |
Adavosertib (MK-1775) | MCE | Wee1 inhibitor | |
Axitinib | MCE | Multi-targeted tyrosine kinase inhibitor | |
AZD5991 | MCE | Mcl-1 inhibitor | |
A 83-01 | MCE | Potent inhibitor of TGF-β type I receptor ALK5 kinase | |
CGP57380 | Selleck | Potent MNK1 inhibitor | |
Dactolisib (BEZ235) | Selleck | Dual ATP-competitive PI3K and mTOR inhibitor | |
Dasatinib | MCE | Dual Bcr-Abl and Src family tyrosine kinase inhibitor | |
Erlotinib | MCE | EGFR tyrosine kinase inhibitor | |
Gefitinib | MCE | EGFR tyrosine kinase inhibitor | |
Linifanib | MCE | Multi-target inhibitor of VEGFR and PDGFR family | |
Masitinib | MCE | Inhibitor of c-Kit | |
ML141 | Selleck | Non-competitive inhibitor of Cdc42 GTPase | |
OSI-930 | MCE | Multi-target inhibitor of Kit, KDR and CSF-1R | |
Palbociclib | MCE | Selective CDK4 and CDK6 inhibitor | |
SB 202190 | MCE | Selective p38 MAP kinase inhibitor | |
Sepantronium bromide (YM-155) | MCE | Survivin inhibitor | |
TCS 359 | Selleck | Potent FLT3 inhibitor | |
UMI-77 | MCE | Selective Mcl-1 inhibitor | |
4-Hydroxytamoxifen(Afimoxifene) | Selleck | Selective estrogen receptor (ER) modulator | |
Table 2. The information of 20 targeted agents used in the test screen. All of these are target selective small molecular inhibitors. The provider, name, and targets were given in the table. |