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Medicine

एक मिनी-लिपोसक्शन तकनीक का उपयोग करके मानव चमड़े के नीचे वसा ऊतक नमूनाकरण

Published: September 27, 2021 doi: 10.3791/62635
Automatic Translation
1, 1, 2, 1, 1, 1
1Physiology, Exercise and Nutrition Research Group, University of Stirling, 2Department of Diabetes and Endocrinology, Forth Valley Royal Hospital

Summary

पांडुलिपि और संबंधित वीडियो नाभि के आसपास के क्षेत्रों से चमड़े के नीचे के वसा ऊतक के नमूने प्राप्त करने के लिए एक पर्क्यूटेनियस बायोप्सी तकनीक का प्रदर्शन करते हैं। यह विधि वसा ऊतक के भीतर मापदंडों (जैसे, जीन या प्रोटीन अभिव्यक्ति, एंजाइम गतिविधि, लिपिड सामग्री) की एक श्रृंखला की जांच करने का एक कम जोखिम और कुशल तरीका है।

Abstract

वसा ऊतक पर अध्ययन चयापचय और अन्य स्थितियों को समझने में उपयोगी हैं। मानव चमड़े के नीचे वसा ऊतक सुलभ है। उचित प्रशिक्षण और सड़न रोकनेवाला तकनीक के सख्त पालन के साथ, चमड़े के नीचे वसा नमूने सुरक्षित रूप से और कुशलता से शोधकर्ताओं द्वारा एक गैर-नैदानिक सेटिंग में प्राप्त किए जा सकते हैं। नाभि के लिए स्थानीय संवेदनाहारी पार्श्व के प्रशासन के बाद, 5 या 10 मिलीलीटर सिरिंज से जुड़ी 14 जी सुई चमड़े के नीचे के ऊतकों में त्वचा के माध्यम से डाली जाती है। चूषण के तहत, सिरिंज को वसा ऊतक के टुकड़ों को अलग करने के लिए एक पारस्परिक, टुकड़ा करने की क्रिया गति में ले जाया जाता है। सवार को वापस लेना यह सुनिश्चित करने के लिए पर्याप्त है कि वसा ऊतक के टुकड़े सुई के माध्यम से सिरिंज में आकांक्षा रखते हैं। एक बायोप्सी लगभग 200 मिलीग्राम ऊतक एकत्र कर सकती है। यह बायोप्सी तकनीक प्रतिभागियों और अनुसंधान कर्मचारियों दोनों के लिए बहुत सुरक्षित है। बायोप्सी के बाद, प्रतिभागी अधिकांश रोजमर्रा की गतिविधियों को फिर से शुरू कर सकते हैं, हालांकि उन्हें अत्यधिक रक्तस्राव से बचने के लिए 48 घंटे के लिए तैराकी और अत्यधिक ज़ोरदार गतिविधियों से बचना चाहिए। प्रतिभागी सुरक्षित रूप से एक दिन के भीतर 2 बायोप्सी से गुजर सकते हैं, जिसका अर्थ है कि तकनीक को तीव्र हस्तक्षेप अध्ययनों से पहले लागू किया जा सकता है।

Introduction

वसा ऊतक मनुष्यों के चयापचय समारोह पर उपयोगी जानकारी प्रदान कर सकता है। मानव चमड़े के नीचे वसा ऊतक आसानी से सुलभ है। चमड़े के नीचे वसा ऊतक निष्कर्षण के लिए एक तकनीक पहली बार 80 के दशक के मध्य में वर्णित कीगई थी 1; तब से, प्रारंभिक प्रोटोकॉल उपज बढ़ाने और अध्ययन प्रतिभागी सहनशीलता में सुधार करने के लिए सुधार किया गया है। चमड़े के नीचे वसा ऊतक कई साइटों से प्राप्त किया जा सकता है, आमतौर पर ग्लूटी1 और पेट क्षेत्र2 से। उत्तरार्द्ध के नमूने अधिक वांछनीय हो सकते हैं क्योंकि वे चयापचय रोग से संबंधितसंदर्भों में अधिक मूल्यवान जानकारी प्रदान करते हैं 3.

मिनी-लिपोसक्शन विधि का उपयोग करके चमड़े के नीचे वसा ऊतक बायोप्सी को गैर-नैदानिक सेटिंग में सुरक्षित और कुशलता से किया जा सकता है। बोर्ड-प्रमाणित चिकित्सक द्वारा उचित प्रशिक्षण के बाद और सख्त सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग करके, शोधकर्ता नियमित रूप से प्रतिभागी और जांचकर्ताओं दोनों के लिए न्यूनतम जोखिम के साथ इन बायोप्सी का प्रदर्शन कर सकते हैं। बायोप्सी टीम में कम से कम 2 व्यक्ति शामिल होने चाहिए: वह व्यक्ति जो बायोप्सी करेगा और एक सहायक।

बायोप्सी के लिए जिम्मेदार व्यक्ति को प्रतिभागी की पहचान की पुष्टि करने का काम सौंपा जाता है, प्रतिभागी की जांच सुरक्षित रूप से प्रक्रिया से गुजर सकती है (नीचे प्रोटोकॉल चरण 2.1-2.4 देखें), यह सुनिश्चित करना कि प्रतिभागी पूरी प्रक्रिया में आरामदायक है, यह सुनिश्चित करना कि बाँझ तकनीक पूरी प्रक्रिया में बनाए रखी जाती है, प्रक्रिया को पूरा करती है, और प्रतिभागी को मौखिक और लिखित देखभाल प्रक्रियाओं के साथ प्रदान करती है। सहायक की भूमिका बाद के विश्लेषण और / या भंडारण के लिए प्राप्त वसा ऊतक को संभालना और तेजी से संसाधित करना है। सहायक "गैर-बाँझ हाथ" होने और यह सुनिश्चित करने में भी मदद करता है कि प्रतिभागी पूरी प्रक्रिया में आसानी से है। इस वीडियो और पेपर का उद्देश्य पेट क्षेत्र से चमड़े के नीचे वसा ऊतक को सुरक्षित रूप से प्राप्त करने के लिए चरण-दर-चरण बायोप्सी प्रक्रिया का वर्णन करना है।

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Protocol

नोट: स्टर्लिंग एनएचएस विश्वविद्यालय, आक्रामक, या नैदानिक अनुसंधान समिति ने नीचे वर्णित बायोप्सी प्रक्रिया को मंजूरी दे दी। इस प्रक्रिया का उपयोग करने वाले सभी शोध अध्ययनों को उपयुक्त स्वतंत्र नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए। बायोप्सी लेने वाले ने अपनी संस्था की आवश्यकताओं के अनुसार वर्णित तकनीक में औपचारिक प्रशिक्षण पूरा किया होगा। आमतौर पर, इसमें बोर्ड-प्रमाणित चिकित्सक द्वारा वर्णित वसा ऊतक बायोप्सी तकनीक का प्रदर्शन करना शामिल है, इसके बाद पर्यवेक्षित अभ्यास होता है। एक बार प्रशिक्षु ने पर्यवेक्षण के तहत स्वयंसेवक विषयों पर 10 अभ्यास वसा ऊतक बायोप्सी का प्रदर्शन किया है, तो प्रक्रिया के अच्छे ज्ञान और अभ्यास को सुनिश्चित करने के लिए बोर्ड-प्रमाणित चिकित्सक द्वारा उनकी जांच की जाएगी। बोर्ड-प्रमाणित चिकित्सक तब व्यक्ति को एक हस्ताक्षरित परीक्षा फॉर्म प्रदान करता है।

1. प्रयोगशाला कक्ष की तैयारी

  1. सुनिश्चित करें कि प्रयोगशाला में साफ, पोंछने योग्य गैर-छिद्रपूर्ण सतहों और एक साफ, आरामदायक (अधिमानतः गैर-छिद्रपूर्ण) बिस्तर के साथ एक उचित निजी कमरा है जिस पर प्रतिभागी लापरवाह झूठ बोल सकता है। 70% इथेनॉल स्प्रे और साफ कागज तौलिए का उपयोग करके बायोप्सी प्रक्रिया के लिए सभी आवश्यक सतहों को साफ करें। यदि आवश्यक हो तो प्रतिभागी का समर्थन करने के लिए साफ तकिए या कुशन प्रदान करें।
  2. उपयुक्त शार्प डिस्पोजल डिब्बे और बायोहाज़र्ड अपशिष्ट बैग को उस क्षेत्र की आसान पहुंच के भीतर रखें जहां बायोप्सी की जा रही है और बायोप्सी लेने वाले व्यक्ति की आसान पहुंच के भीतर।
  3. प्रक्रिया के लिए आवश्यक उपकरण तैयार करें और प्रयोगशाला (चित्रा 1) में आने वाले प्रतिभागी से पहले एक ताजा साफ सामान्य मेडिकल ट्रॉली पर स्थापित करें। आवश्यक उपभोग्य सामग्रियों की पूरी सूची के लिए, सामग्री की तालिका देखें।

2. प्रतिभागी की तैयारी

  1. सुनिश्चित करें कि सभी प्रतिभागी संस्थान की स्वतंत्र नैतिकता समिति द्वारा आवश्यक प्रोटोकॉल के अनुसार प्रक्रिया से गुजरने से पहले लिखित सूचित सहमति प्रदान करते हैं। इसके अतिरिक्त, प्रतिभागियों को यह सुनिश्चित करने के लिए एक लिखित प्रश्नावली पूरी करने के लिए कहें कि उन्हें प्रक्रिया में उपयोग की जाने वाली किसी भी सामग्री (अर्थात्, निकल, क्रोमियम, स्थानीय संवेदनाहारी, आयोडीन, शेलफिश और प्लास्टर) से एलर्जी नहीं है।
  2. प्रतिभागी की पहचान की पुष्टि करें। सुनिश्चित करें कि प्रतिभागी की जाने वाली प्रक्रिया और संभावित माध्यमिक प्रभावों को समझता है, जिसमें चोट, दर्द और संक्रमण (तालिका 1) शामिल हैं। पहले से प्राप्त लिखित सूचित सहमति के अलावा मौखिक सहमति इकट्ठा करें।
  3. प्रतिभागी को वर्णन करें कि प्रक्रिया कैसे की जाएगी, इस बात पर जोर देने के साथ कि संवेदनाहारी और बायोप्सी का प्रशासन स्वयं कैसा महसूस करेगा। सुनिश्चित करें कि प्रतिभागी आगे बढ़ने में सहज है।
    नोट: स्थानीय चमड़े के नीचे संवेदनाहारी एक चुभने वाली सनसनी पैदा करेगा, जो छोटी अवधि के मधुमक्खी के डंक के समान है। कई प्रतिभागी संवेदनाहारी प्रशासन को तकनीक के सबसे असुविधाजनक हिस्से के रूप में रिपोर्ट करते हैं। एक बार संवेदनाहारी प्रभावी हो जाने के बाद, प्रतिभागी को बायोप्सी के दौरान थोड़ी टगिंग सनसनी से अधिक महसूस नहीं करना चाहिए।
  4. सुनिश्चित करें कि प्रतिभागी को स्थानीय संवेदनाहारी (विशेष रूप से अमीनो-एमाइड प्रकार से, यदि लिडोकेन या इसी तरह का उपयोग कर रहे हैं), कुछ धातुओं (निकल और क्रोमियम), और शेलफिश (यदि आयोडीन-आधारित समाधानों का उपयोग कर रहे हैं) से कोई एलर्जी नहीं है। इसके अतिरिक्त, सुनिश्चित करें कि प्रतिभागी थक्कारोधी दवा का कोई रूप नहीं ले रहे हैं।
  5. यदि आवश्यक हो तो प्रतिभागी को अपने मूत्राशय को जाने और खाली करने का अवसर प्रदान करें, यह सुनिश्चित करने के लिए कि उन्हें प्रक्रिया को बाधित करने या चरण 4.1 में अनुचित असुविधा का अनुभव करने की आवश्यकता नहीं है।

3. बायोप्सी प्रक्रिया - बायोप्सी लेने वाले के लिए निर्देश

  1. एक बार जब प्रतिभागी लापरवाह स्थिति में झूठ बोल रहा है, तो बायोप्सी साइट को नाभि के लगभग 5-10 सेमी पार्श्व की पहचान करें।
    नोट: यदि प्रतिभागी को एक ही दिन में कई बायोप्सी से गुजरना है, तो प्रत्येक बायोप्सी के लिए नाभि के विरोधी पक्षों पर बायोप्सी साइटों की पहचान करें। यह प्रत्येक बायोप्सी साइट के बीच अधिकतम दूरी सुनिश्चित करेगा।
  2. मानक चिकित्सा दिशानिर्देशों के अनुसार साबुन और गर्म पानी से हाथ धोएं4.
  3. साफ ट्रॉली या कार्य क्षेत्र पर बाँझ शीट रखें, केवल शीट के बाहरी किनारों को छूने का ध्यान रखें।
  4. उचित सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग कर बाँझ सर्जिकल दस्ताने पर रखो। सहायक को बाकी उपकरणों को इस तरह से खोलें कि यह उपकरण को छूने / दूषित किए बिना तैयार बाँझ शीट पर गिर जाए। सुनिश्चित करें कि सहायक अपने बाँझ रैपिंग से उपकरण निकालते समय वस्तुओं को छूने के लिए ध्यान न दें।
  5. सहायक को काम की सतह पर कुछ बाँझ धुंध (धुंध को अतिरंजित किए बिना) पर आयोडीन-आधारित समाधान की एक छोटी मात्रा को वितरित करने का निर्देश दें।
  6. बाँझ धुंध और आयोडीन आधारित समाधान का उपयोग कर चुने हुए बायोप्सी साइट के चारों ओर लगभग 5-10 सेमी2 निष्फल करें। सुनिश्चित करें कि प्रस्तावित बायोप्सी साइट से बाहर की ओर बढ़ने वाली सर्पिल गति में त्वचा को साफ किया गया है। त्वचा की सफाई प्रक्रिया को दो बार दोहराएं। ताजा बाँझ धुंध के साथ पोंछकर अतिरिक्त तरल (जैसे, बाँझ क्षेत्र से चल रहा है) निकालें।
  7. सहायक के साथ, मौखिक रूप से स्थानीय संवेदनाहारी शीशी (इस प्रोटोकॉल में 2% लिडोकेन) की सामग्री की पुष्टि करें और यह इसकी समाप्ति तिथि के भीतर है। सहायक को खुली शीशी को उल्टा पकड़ने और 21 जी सुई का उपयोग करके एक सिरिंज में 5 मिलीलीटर स्थानीय संवेदनाहारी खींचने का निर्देश दें। शार्प बिन में सुई का निपटान करें, और सुनिश्चित करें कि सिरिंज हवा के बुलबुले से मुक्त है।
  8. सिरिंज के लिए एक 26 जी सुई लागू करें और किसी भी हवा के बुलबुले निष्कासित। धीरे पेट की त्वचा और वसा ऊतक चुटकी, इसे पेट की दीवार से दूर ले जा रहा है। फिर, सुई को त्वचा की सतह के सापेक्ष 10 ° से अधिक कोण पर चमड़े के नीचे के ऊतकों में क्षैतिज रूप से डालें।
    1. सिरिंज के सवार को अतिरिक्त 0.5 एमएल वापस लें (यह सुनिश्चित करने के लिए कि सुई रक्त वाहिका में नहीं है)। यदि सिरिंज में रक्त दिखाई देता है, तो सुई को एक अलग कोण पर वापस लें और फिर से डालें।
    2. सम्मिलन क्षेत्र को संवेदनाहारी करने के लिए 2-4 मिमी व्यास का एक ब्लेब उठाएं।
    3. चमड़े के नीचे के ऊतकों में सुई को आगे बढ़ाएं और एक प्रशंसक के आकार के पैटर्न (चित्रा 2) में ~ 1 एमएल लिडोकेन का प्रशासन करें, संवेदनाहारी इंजेक्शन लगाने से पहले हर बार सवार को वापस लेने का ख्याल रखें।
    4. निकालें और 26 जी सुई का निपटान करें, सिरिंज पर 21 जी सुई लागू करें, किसी भी हवा के बुलबुले को निष्कासित करें, और एक प्रशंसक के आकार के पैटर्न (चित्रा 2) में लिडोकेन के शेष ~ 4 मिलीलीटर का प्रशासन करें, संवेदनाहारी इंजेक्शन लगाने से पहले हर बार सवार को वापस लेने का ख्याल रखें।
  9. स्थानीय संवेदनाहारी को प्रभावी होने के लिए लगभग 5 मिनट प्रतीक्षा करें। बायोप्सी क्षेत्र को धीरे-धीरे प्रोड करने के लिए एक बाँझ स्केलपेल का उपयोग करें i) यह सुनिश्चित करने के लिए कि स्थानीय संवेदनाहारी प्रभावी हो गई है और ii) संवेदनाहारी क्षेत्र की सीमाओं की पहचान करें। यदि आवश्यक हो, तो एक या दो मिनट प्रतीक्षा करें और पुनर्मूल्यांकन करें।
  10. एक बार संतुष्ट हो जाने के बाद कि स्थानीय संवेदनाहारी काम कर रहा है, धीरे-धीरे त्वचा और वसा ऊतक (चरण 3.8 के रूप में) चुटकी लें और त्वचा में एक छोटा 1-2 मिमी पंचर बनाने के लिए एक बाँझ स्केलपेल का उपयोग करें।
    नोट: यह केवल 14 जी सुई के प्रवेश को कम करने के लिए काफी बड़ा होना चाहिए और इसे बंद करने के लिए कोई सिवनी की आवश्यकता नहीं है कि पर्याप्त छोटा होना चाहिए। इस बिंदु से कुछ रक्तस्राव होना आम बात है, जिसे बाँझ धुंध के टुकड़े से नियंत्रित किया जा सकता है।
  11. सबसे पहले, 5 या 10 मिलीलीटर सिरिंज पर 14 जी सुई लागू करें। फिर, धीरे-धीरे त्वचा और वसा ऊतक को चुटकी लेते हुए, धीरे-धीरे पंचर के माध्यम से सुई को वसा ऊतक में लगभग केंद्रीय रूप से संवेदनाहारी क्षेत्र में और त्वचा की सतह के सापेक्ष 10 ° से अधिक कोण पर डालें।
    नोट: चरण 3.11 में सुई की उन्नति के सभी मामलों के लिए, 10 ° से अधिक का सिरिंज कोण बनाए रखा जाना चाहिए।
    1. लगभग 2.5 एमएल निशान पर सवार को वापस लेकर चूषण लागू करें। वसा ऊतक के टुकड़ों को टुकड़ा करने के लिए एक त्वरित पीछे और आगे की गति में सुई को स्थानांतरित करके बायोप्सी लें। लगभग 30 एस के बाद, सुई और सिरिंज को 90 ° के माध्यम से मोड़ें और वसा ऊतक के टुकड़ों को तोड़ने के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएं, जो तब चूषण द्वारा सिरिंज में आकांक्षा रखते हैं।
      नोट: अन्य सिरिंज आकार का उपयोग किया जा सकता है। यह आवश्यक है कि शोधकर्ता एक सिरिंज आकार का चयन करता है जो सिरिंज पर एक अच्छी पकड़ दोनों की अनुमति देता है और वैक्यूम के रखरखाव के लिए आराम से सवार वापसी को बनाए रखता है। लॉकिंग सिरिंज उपलब्ध हैं जो वैक्यूम को बनाए रखते हैं, जो सुई नियंत्रण में सुधार कर सकते हैं और बायोप्सी लेने वाले के लिए कथित कठिनाई को कम कर सकते हैं 5.
    2. चरण 3.11.1 के लगभग 45-60 एस के बाद, सुई को हटा दें और एक वजन नाव को कवर करने वाली धुंध की एक परत पर सिरिंज सामग्री को खाली करें। सुनिश्चित करें कि संभावित रक्त छींटे से बचने के लिए सुई का लुमेन नीचे की ओर है।
    3. चरण 3.11.1 और 3.11.2 को अधिकतम 3 बार दोहराएँ। जाँचें कि प्रतिभागी उपरोक्त प्रक्रिया के प्रत्येक दोहराव से पहले आगे बढ़ने के लिए सामग्री है।
    4. चरण 3.11.1 और 3.11.2 का प्रदर्शन करते समय, सहायक को विश्लेषण / भंडारण के लिए नमूनों को संसाधित करने और तैयार करने का निर्देश दें (अनुभाग 5 देखें)।

4. पोस्ट-बायोप्सी प्रक्रिया

  1. एक बार वसा ऊतक का एक संतोषजनक नमूना (यानी, ~ 200 मिलीग्राम) प्राप्त हो जाने के बाद, पंचर घाव पर बाँझ धुंध की 1-2 परतें रखें, फिर इन पर एक आइस पैक रखें, और हेमोस्टेसिस को प्रेरित करने के लिए लगभग 10 मिनट के लिए दृढ़ दबाव लागू करें।
  2. जब हेमोस्टेसिस हुआ है, तो बाँझ धुंध के साथ किसी भी आयोडीन-आधारित समाधान / सूखे रक्त को मिटा दें, और साइट पर शोषक पैड के साथ एक चिपकने वाला घाव ड्रेसिंग लागू करें। जांचें कि प्रतिभागी अच्छी तरह से महसूस करता है और बायोप्सी साइट आफ्टरकेयर पर मौखिक और लिखित निर्देश प्रदान करता है।
    1. जोर दें कि प्रतिभागियों को अगले कुछ दिनों के लिए कुछ चोट लगने की संभावना दिखाई देगी। उन्हें सूचित करें कि यह पर्याप्त हो सकता है, हालांकि यह चरण 4.1 में आइस पैक द्वारा कम से कम है और स्थायी प्रभाव के बिना हल हो जाएगा।
    2. अनुशंसा करें कि प्रतिभागियों को संवेदनाहारी पहनने के बाद किसी भी असुविधा / दर्द को महसूस करना चाहिए, उन्हें पैकेट पर दिए गए निर्देशों का पालन करते हुए पेरासिटामोल जैसे एनाल्जेसिक लेना चाहिए, लेकिन एनाल्जेसिक लेने से बचना चाहिए जिसमें थक्कारोधी गतिविधियां होती हैं (जैसे, इबुप्रोफेन या एस्पिरिन)।
    3. बता दें कि बायोप्सी साइट से सूजन, लालिमा या डिस्चार्ज संक्रमण के संकेत हैं। अप्रत्याशित घटना में कि ये संकेत या लक्षण होते हैं, प्रतिभागी को तुरंत डॉक्टर या स्थानीय दुर्घटना और आपातकालीन इकाई से चिकित्सा सलाह लेने का निर्देश दें। प्रतिभागी को सूचित करें कि यदि वे चिकित्सा सलाह लेते हैं, तो उन्हें अनुसंधान टीम को भी सूचित करना चाहिए।
      नोट: अनुसंधान कर्मचारियों के रूप में, न तो बायोप्सी लेने वाला और न ही सहायक चिकित्सा सलाह या उपचार प्रदान कर सकता है; हालांकि, यह महत्वपूर्ण है कि शोध दल बायोप्सी प्रक्रिया से उत्पन्न जटिलताओं के सभी उदाहरणों से अवगत और रिकॉर्ड करे।
    4. अनुशंसा करें कि प्रतिभागियों को चीरा की साइट बंद होने तक 48 घंटे के लिए तैराकी या अत्यधिक ज़ोरदार गतिविधि से बचना चाहिए।
  3. किसी भी प्रयुक्त शार्प और दूषित सामग्रियों को निर्दिष्ट शार्प और / या नैदानिक अपशिष्ट कंटेनरों में साफ़ करें।
  4. 70% इथेनॉल स्प्रे और साफ कागज तौलिए का उपयोग करके बायोप्सी प्रक्रिया में उपयोग की जाने वाली सभी सतहों को साफ करें। क्रमशः निपटान या सफाई के लिए उपयुक्त नैदानिक बैग में बिस्तर के डिस्पोजेबल और गैर-डिस्पोजेबल आइटम रखें।

5. नमूना प्रसंस्करण - सहायक के लिए निर्देश

  1. दृश्यमान दूषित पदार्थों (यानी, रक्त, वास्कुलचर) को हटाने के लिए वसा ऊतक के नमूने को कुल्ला करने के लिए बाँझ चिमटी और 0.9% खारा का उपयोग करें। फिर, डिजिटल तराजू का उपयोग करके वसा ऊतक के नमूनों का वजन करें। डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए ऊतक को उचित आकार के टुकड़ों में विभाजित करें और उन्हें बाँझ चिमटी का उपयोग करके उपयुक्त भंडारण ट्यूबों में रखें। -190 डिग्री सेल्सियस पर तरल नाइट्रोजन में वसा ऊतक बायोप्सी युक्त ट्यूबों को विसर्जित करने के लिए फ्लैश-फ्रीज जब तक नमूने -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत कर रहे हैं।
    नोट: सहायक को नमूना प्रसंस्करण को जितनी जल्दी हो सके पूरा करना होगा, आमतौर पर नमूना आकांक्षा के 3 मिनट के भीतर, संभावित नमूना गिरावट को कम करने के लिए।

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Representative Results

वर्णित वसा ऊतक बायोप्सी प्रक्रिया शोधकर्ताओं के लिए मानव स्वयंसेवकों से चमड़े के नीचे वसा ऊतक के नमूने प्राप्त करने के लिए एक कुशल और कम जोखिम वाली तकनीक है। हमने 11 स्वस्थ, सामान्य वजन वाली महिलाओं (आयु, 27.4 ± 3.3 वर्ष; बॉडी मास इंडेक्स (बीएमआई), 22.6 ± 1.5 किलोग्राम2) में वर्णित प्रक्रिया का उपयोग करके 39 चमड़े के नीचे वसा ऊतक बायोप्सी का प्रदर्शन किया। सभी प्रतिभागियों ने 8-12 घंटे की उपवास अवधि के बाद 07:00 और 10:00 के बीच प्रयोगशाला में भाग लिया। इस वसा ऊतक बायोप्सी प्रक्रिया का उपयोग नमूना उपज 192.0 ± 97.1 मिलीग्राम (रेंज = 32.8-393.6 मिलीग्राम) (चित्रा 4) था। हमने बायोप्सी उपज और प्रतिभागी बीएमआई (पी = 0.643) के बीच कोई संबंध नहीं देखा, हालांकि प्रतिभागियों का बीएमआई स्वस्थ वजन सीमा (सीमा = 21.1-25.4 किलोग्राम / पर्याप्त नमूना वजन आमतौर पर ऊतक संग्रह के 2-3 मुकाबलों के बाद प्राप्त किया गया था (यानी, चरण 3.11.1 और 3.11.2 की पुनरावृत्ति की संख्या)। वसा ऊतक बायोप्सी के बाद, सभी प्रतिभागियों ने एक खरोंच का अनुभव किया, लेकिन किसी ने भी अत्यधिक दर्द का अनुभव नहीं किया जो दर्द निवारक दवाओं द्वारा कम नहीं किया गया था। न ही कोई अन्य प्रतिकूल प्रतिक्रियाएं थीं (तालिका 1)। यह वसा ऊतक बायोप्सी 1,5 के लिए पहले से रिपोर्ट की गई जटिलता दरों के अनुरूप है।

Figure 1
चित्र 1: प्रक्रिया के लिए आवश्यक सामग्री( ए) ट्रॉली प्रक्रिया के लिए आवश्यक सामग्रियों के साथ रखी गई है। (बी) बाँझ क्षेत्र पर व्यवस्थित सामग्री। 1: बाँझ क्षेत्र; 2: बाँझ दस्ताने; 3: स्केलपेल; 4: 14 जी सुई; 5: 21 जी सुई; 6: 26 जी सुई; 7: 5 एमएल सिरिंज; 8: लिडोकेन 2%; 9: बाँझ धुंध; 10: चिपकने वाला घाव ड्रेसिंग; 11: आयोडीन आधारित समाधान। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: स्थानीय संवेदनाहारी के प्रशासन के लिए प्रशंसक के आकार के इंजेक्शन साइटों की योजनाबद्ध। ठोस और बिंदीदार रेखाएं दर्शाती हैं कि क्रमशः 26 जी और 21 जी सुई का उपयोग करके संवेदनाहारी को कहां प्रशासित किया जाना चाहिए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: स्वस्थ, सामान्य वजन महिलाओं (एन = 39) से वसा ऊतक नमूना उपज। त्रुटि पट्टियों के साथ पट्टी चार्ट माध्य ± मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करता है। मंडलियाँ व्यक्तिगत डेटा बिंदुओं का प्रतिनिधित्व करती हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्र 4: प्रारंभिक प्रशिक्षण प्रयास के परिणामस्वरूप खरोंच का एक उदाहरण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

फंस प्रतिक्रिया
दर्द प्रतिभागी पैकेट पर दिए गए निर्देशों का पालन करते हुए यदि आवश्यक हो तो एनाल्जेसिक ले सकता है (उदाहरण के लिए, पेरासिटामोल)। प्रतिभागियों को एनाल्जेसिक लेने से बचना चाहिए जिसमें थक्कारोधी गतिविधियां होती हैं।
रक्तस्राव प्रतिभागी को सलाह दी जानी चाहिए कि कुछ रक्तस्राव की उम्मीद की जानी चाहिए।
जोरदार प्रतिभागी को सलाह दी जानी चाहिए कि चोट लगने की उम्मीद की जानी चाहिए।
निशान ऊतक प्रतिभागी को सलाह दी जानी चाहिए कि बायोप्सी साइट पर कुछ निशान ऊतक के विकास की उम्मीद की जानी चाहिए।
इंफ़ेक्शन प्रतिभागी को बायोप्सी से पहले बायोप्सी साइट पर संक्रमण के सभी लक्षणों के बारे में सूचित किया जाना चाहिए। प्रतिभागियों को डॉक्टर या स्थानीय दुर्घटना और आपातकालीन इकाई से चिकित्सा सलाह लेने का निर्देश दिया जाना चाहिए, क्या ये लक्षण होते हैं और अनुसंधान टीम को पूर्वव्यापी रूप से सूचित करते हैं।

तालिका 1: प्रतिभागियों द्वारा अनुभव की जा सकने वाली जटिलताओं की सूची।

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Discussion

वर्णित प्रोटोकॉल और संबद्ध वीडियो पेट क्षेत्र से चमड़े के नीचे वसा ऊतक के नमूने प्राप्त करने के लिए एक मिनी-लिपोसक्शन तकनीक का चरण-दर-चरण अवलोकन प्रदान करते हैं। इस शोध समूह ने 19 महीनों के दौरान कुल 124 बायोप्सी की हैं, जिसमें प्रतिभागियों में कोई प्रतिकूल प्रभाव नहीं पड़ा है। प्रक्रिया सुरक्षित है और प्रतिभागियों या बायोप्सी टीम के लिए न्यूनतम जोखिम से जुड़ी है, बशर्ते कि वर्णित सुरक्षा उपायों का पालन किया जाए। सड़न रोकनेवाला तकनीक (उन्हें दूषित किए बिना बाँझ उपकरणों को खोलने और वितरित करने सहित, उचित रूप से दान / हटाने, सामान्य हाथ स्वच्छता) प्रक्रिया करने वाले शोधकर्ताओं द्वारा हर समय बनाए रखा जाना चाहिए (प्रतिभागी को संक्रमण के जोखिम को कम करने के लिए)6. इसके अतिरिक्त, उचित तरीके से इस्तेमाल किए गए शार्प्स का निपटान शोधकर्ता और अन्य लोगों की सुरक्षा सुनिश्चित करता है जो सुई-छड़ी की चोटों के जोखिम को कम करके इस कचरे को संभालते हैं7.

यद्यपि प्रक्रिया को "कम जोखिम" के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है, लेकिन सड़न रोकनेवाला तकनीक और उचित अपशिष्ट निपटान के अलावा कई महत्वपूर्ण कदम हैं जिन्हें प्रतिकूल प्रभावों को कम करने के लिए पालन करने की आवश्यकता है। मुख्य रूप से, प्रतिभागियों को यह पुष्टि करनी चाहिए कि उन्हें अमीनो एमाइड परिवार (जैसे, लिडोकेन) या उपयोग किए जाने वाले स्थानीय संवेदनाहारी के दवा परिवार में स्थानीय संवेदनाहारी से कोई एलर्जी नहीं है, कुछ धातुएं जो सुइयों (क्रोमियम, निकल और कोबाल्ट) में निहित हो सकती हैं, और आयोडीन आधारित त्वचा कीटाणुनाशक समाधान (चरण 2.4) का उपयोग करते समय शेलफिश / चूंकि प्रतिभागी संवेदनाहारी के नाम से परिचित नहीं हो सकते हैं, और जैसा कि लिडोकेन का उपयोग आमतौर पर दंत प्रक्रियाओं में किया जाता है, यह पूछना सहायक हो सकता है कि क्या उन्हें उस संदर्भ में संवेदनाहारी प्रशासन की प्रतिक्रिया हुई है। इसी तरह, प्रतिभागियों से पूछा जा सकता है कि क्या उन्हें विशेष रूप से क्रोमियम और निकल के बजाय किसी भी गहने / वर्तमान में थक्कारोधी पर व्यक्तियों को प्रक्रिया से गुजरना नहीं चाहिए क्योंकि उन्हें अत्यधिक रक्तस्राव का खतरा बढ़ जाता है। नियमित रूप से कम खुराक एस्पिरिन लेने वाले प्रतिभागी बायोप्सी प्रोटोकॉल में भागीदारी को रोक नहीं पाएंगे; हालांकि, प्रतिभागियों को बायोप्सी लेने वाले को सूचित करना चाहिए क्योंकि यह हेमोस्टेसिस8 की दर को प्रभावित कर सकता है। जबकि ओमेगा -3 फैटी एसिड पूरकता बायोप्सी को प्रदर्शन करने से नहीं रोकेगी, प्रतिभागियों को यह पुष्टि करनी चाहिए कि क्या ऐसी खुराक (या फैटी युक्त मछली) उनके नियमित आहार का हिस्सा हैं क्योंकि यह रक्त चिपचिपाहट9 को प्रभावित कर सकता है। प्रक्रिया शुरू करने से पहले, प्रतिभागियों से यह भी पूछा जाना चाहिए कि क्या उनके पास कोई ऐसी स्थिति है जो अन्यथा बायोप्सी को प्रभावित कर सकती है। उदाहरण के लिए, कॉस्मेटिक सर्जरी (यानी, लिपोसक्शन) ऊतक नमूने की मात्रा / गुणवत्ता को प्रभावित करेगी, और पिछले निशान / टैटू साइटों से बचा जाना चाहिए। अंत में, बायोप्सी टीम बायोप्सी क्षेत्र को अधिक दृश्यमान बनाने के लिए पर्याप्त मात्रा में शरीर के बालों के साथ शेविंग प्रतिभागियों पर विचार करना चाह सकती है।

बायोप्सी क्षेत्र (चरण 3.1) का चयन करते समय, शोधकर्ता को यह सुनिश्चित करना चाहिए कि साइट नाभि (लगभग 5-10 सेमी) से पर्याप्त रूप से दूर है क्योंकि समीपस्थ क्षेत्र बहुत संवहनी है। नाभि के बहुत करीब बायोप्सी साइट चुनने से अनावश्यक रूप से व्यापक चोट लग सकती है (उदाहरण के लिए, चित्रा 4)। जबकि अत्यधिक चोट को बायोप्सी क्षेत्र के उचित विकल्प और प्रक्रिया के बाद एक आइस पैक के आवेदन से सीमित किया जा सकता है, प्रतिभागियों को सूचित किया जाना चाहिए कि कुछ हद तक चोट लगने की संभावना है। इस शोध समूह के भीतर, हमने देखा कि इस तरह के संलयन 3-5 दिनों के भीतर समाप्त हो जाते हैं। इसके अलावा, कुछ प्रतिभागी बायोप्सी साइट पर कुछ निशान ऊतक विकसित कर सकते हैं, स्पर्श करने के लिए कठिन ऊतक की एक गांठ के रूप में पेश करते हैं। बायोप्सी प्रक्रिया से गुजरने वाले किसी भी व्यक्ति को अवगत कराया जाना चाहिए कि निशान ऊतक क्षणिक है और 2-3 सप्ताह के भीतर खुद को हल कर लेगा। रोगी सहनशीलता को अधिकतम करने के लिए, शोधकर्ता को स्थानीय संवेदनाहारी (चरण 3.9) से प्रभावित क्षेत्र की पहचान करनी चाहिए: स्केलपेल का उपयोग करके और बायोप्सी क्षेत्र को धीरे-धीरे बढ़ाकर, शोधकर्ता प्रतिभागी के साथ मौखिक रूप से पुष्टि कर सकता है कि क्षेत्र को सफलतापूर्वक संवेदनाहारी किया गया है। क्षेत्र से परे जाकर संवेदनाहारी क्षेत्र की सीमाओं की पुष्टि की जानी चाहिए। प्रतिभागी को सूचित करें कि यह किया जाएगा और उन्हें कुछ बहुत मामूली असुविधा महसूस हो सकती है। यह एक विशेष रूप से महत्वपूर्ण कदम है, क्योंकि बायोप्सी सुई को गैर-संवेदनाहारी क्षेत्रों में रखने से प्रतिभागी असुविधा होगी।

यहां वर्णित मिनी-लिपोसक्शन बायोप्सी तकनीक सर्जिकल प्रक्रियाओं के लिए एक कम लागत वाला विकल्प है और विशेषज्ञ उपकरणों की आवश्यकता नहीं है। उनकी सीधीता के कारण, इन बायोप्सी को नियमित रूप से कम-से-कम समस्याओं के साथ किया जा सकता है। वसा ऊतक नमूनाकरण करते समय सबसे आम समस्या यह है कि 14 जी सुई का शाफ्ट बाधित हो सकता है, सिरिंज में वसा ऊतक आकांक्षा को रोक सकता है। वर्णित बायोप्सी तकनीक में प्रशिक्षित एक अनुभवी व्यक्ति सिरिंज के सवार की जवाबदेही में परिवर्तन के माध्यम से रुकावट को नोटिस करेगा (यानी, यह जगह में "चिपक जाता है")। क्या सुई रुकावट होनी चाहिए, शोधकर्ता को प्राइमिस में सलाह दी जाती है कि वह सवार को जबरदस्ती निराश करके रुकावट को हटाने का प्रयास करे, जबकि सुई बेवल वजन वाली नाव के ऊपर है। यदि रुकावट दृढ़ता से दर्ज की जाती है, तो दूसरा विकल्प सुई और सिरिंज को बदलना है। प्रक्रिया के बाद, सुई में दर्ज ऊतक को सुई के माध्यम से बाँझ खारा धक्का देकर पुनः प्राप्त किया जा सकता है। नमूना गिरावट को रोकने के लिए, प्राप्त ऊतक को प्रक्रिया10 के बाद जितनी जल्दी हो सके साफ, संसाधित और संग्रहीत किया जाना चाहिए। आरएनए गिरावट को कम करने के लिए, नमूना प्रसंस्करण चरण17 पर एक स्थिरीकरण समाधान का उपयोग किया जा सकता है (कृपया सामग्री की तालिका देखें)।

इस तकनीक की मुख्य सीमा यह है कि जबकि यह अपेक्षाकृत तेज़ है (एक प्रशिक्षित और अनुभवी व्यक्ति के लिए ~ 15 मिनट) और लागत प्रभावी है, इसके परिणामस्वरूप केवल मामूली आकार का नमूना (~ 200 मिलीग्राम) होता है। हालांकि यह नमूना आकार आमतौर पर विभिन्न चयापचय परखों के लिए पर्याप्त होता है, यह अनुशंसा की जाती है कि शोधकर्ता यह सुनिश्चित करता है कि अपेक्षित नमूना उपज इच्छित नमूना विश्लेषण के लिए पर्याप्त है। वर्णित तकनीक का उपयोग करके प्राप्त नमूना उपज आमतौर पर सर्जिकल तकनीकों की तुलना में कम होती है11; हालांकि, सर्जिकल बायोप्सी में उपयोग की जाने वाली बड़ी चीरा साइटें प्रतिभागियों को अधिक असुविधा का कारण बनती हैं और उन्हें पूरी तरह से ठीक होने तक कुछ दिन-प्रतिदिन की गतिविधियों में संलग्न होने से रोक सकतीहैं 11. इन तकनीकों में प्रतिभागियों को अनुसंधान अध्ययनों में दाखिला लेने से हतोत्साहित करने और प्रशिक्षित चिकित्सक की आवश्यकता होने की अधिक संभावना है। इस वीडियो में वर्णित मिनी-लिपोसक्शन बायोप्सी का एक महत्वपूर्ण लाभ यह है कि इसे गैर-चिकित्सा शोधकर्ताओं द्वारा गैर-नैदानिक सेटिंग में जल्दी से किया जा सकता है। इसके अलावा, एक ही दिन के भीतर एक प्रतिभागी पर कई बायोप्सी को पूरा करने में सक्षम होने के कारण शोधकर्ताओं को पोषण / व्यायाम हस्तक्षेप अध्ययन करने में सक्षम बनाता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यूके में, लिडोकेन प्रशासन को एक नुस्खे की आवश्यकता होती है; हमारी टीम का एक सदस्य गैर-चिकित्सा निर्धारित करने में योग्य है। स्थानीय संवेदनाहारी के प्रशासन से पहले स्थानीय नियमों की जांच की जानी चाहिए।

कई शोध समूहों ने विभिन्न प्रकार के शोध प्रश्नों के लिए मिनी-लिपोसक्शन तकनीक को लागू किया है। इनमें मधुमेह 2 वाले प्रतिभागियों में वसा ऊतक हार्मोन प्रोफाइल प्रदान करना, चयापचय शिथिलता12 वाले रोगियों में वसा ऊतक एमआईआरएनए अभिव्यक्ति की भिन्नता की मात्रा निर्धारित करना, और अधिक वजन वाली आबादी13,14 में पोषण और व्यायाम हस्तक्षेपका आकलन करना शामिल है, लेकिन इन तक सीमित नहीं हैं। इसके अतिरिक्त, वसा ऊतक नमूनों की तत्काल प्रसंस्करण परमिट; सेल संस्कृति के लिए पूर्व-एडिपोसाइट्स का अलगाव15; और पूर्व विवो चयापचय मापदंडों का विश्लेषण, जैसे कि लिपोलिटिक दर16, हार्मोन स्राव13, और माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन14. यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि वर्णित तकनीक के माध्यम से प्राप्त वसा ऊतक के नमूनों में काटने वाली सुई या स्केलपेल5 का उपयोग करके सर्जिकल तकनीकों के माध्यम से प्राप्त नमूनों की तुलना में विखंडन के उच्च स्तर होते हैं। यह वास्तुशिल्प और रूपात्मक मापदंडों के मूल्यांकन के लिए विश्लेषणात्मक तकनीकों के सफल उपयोग को रोकताहै 5. क्या शोधकर्ताओं को वास्तुशिल्प और रूपात्मक मापदंडों के विश्लेषण के लिए वसा ऊतक के नमूने प्राप्त करने का इरादा होना चाहिए, वैकल्पिक तरीके कम ऊतक विखंडन18 से जुड़े हैं। बहरहाल, वर्णित तकनीक के माध्यम से वसा ऊतक के नमूने प्राप्त करना प्रमुख शारीरिक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत श्रृंखला की जांच की अनुमति देता है।

सारांश में, वर्तमान वीडियो और पेपर चमड़े के नीचे पेट वसा ऊतक प्राप्त करने के लिए एक गैर-नैदानिक मिनी-लिपोसक्शन बायोप्सी तकनीक का वर्णन करते हैं। जगह में उचित नियंत्रण के साथ, विधि अपेक्षाकृत दर्द मुक्त, सुरक्षित और समय / यह बायोप्सी विधि विशेष रूप से उन अध्ययनों के लिए उपयुक्त है जो अध्ययन से पहले डिजाइन को लागू करते हैं और बड़ी मात्रा में ऊतक नमूने की आवश्यकता नहीं होती है।

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Disclosures

लेखकों के पास घोषित करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

लेखकों के पास घोषित करने के लिए कोई धन नहीं है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Item: 14 G needle
14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm		 B Braun 4665473 Per biopsy: 1
Item: 21 G needle
21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm		 Terumo AN*2138R1 Per biopsy: 2
Item: 26 G  needle
26 G x 1/2" microlance needle 0.45 mm x 13 mm		 BD 303800 Per biopsy: 2
Item: 5 mL syringe
5 mL luer		 DB plastipak 302187 Per biopsy: 2
Item: Adhesive wound dressing
Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5		 Smith & Nephew 6600709 Per biopsy: 1
Item: Disposable sterile scalpel
Disposable Scalpel Sterile Blade no. 10		 Swann Morton /0501 Per biopsy: 1
Item: Icepack
BlueDot Reusable Hot/Cold Pack 26.5 cm x 13.0 cm		 NuCare F711 Per biopsy: 1
Item: Iodine based antiseptic
Videne antiseptic solution		 Ecolab Videne 3030440 Per biopsy: q.s
Item: Lidocaine 2% w/o epinephrine
Lidocaine 2% injection 5 mL		 B Braun 3558553 Per biopsy: 5 mL
Item: Non-sterile gloves
Starguard sensitive powder free nitrile gloves		 Starguard SG-N-S Per biopsy: pair
Item: Sodium chloride 0.9%
Sodium chlride 0.9% w/v intravenous infusion BP		 BBraun S8004-5384 Per biopsy: q.s.
Item: Stabilization solution*
RNAlater Stabilization Solution		 ThermoFisher Scientific AM7020 Per biopsy: q.s
Item: Sterile forceps
Sterile forceps		 Rocialle RML109-006 Per biopsy: 1
Item: Sterile gauze swabs
Non woven swabs sterile 7.5 x 7.5 cm		 Prestige 1860 Per biopsy: 5
Item: Sterile gloves
Prestige soft vinyl sterile powder free medical gloves		 Prestige S: P4301
M:P3302
L:P3301		 Per biopsy: pair
Item: Sterile Microcentrifuge tubes
1.5 mL Sterile Microcentrifuge Tubes		 StarLab I1415-5510 Per biopsy: q.s
Item: Sterile sheet
Paper plain white 90 x 90 cm		 Rocialle RML 126-216 Per biopsy: 1
Item: Weighing boat
Diamond shape weigh boats		 Heathrow Scientific HS1427C Per biopsy: 1
* denotes optional materials

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References

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चिकित्सा अंक 175
एक मिनी-लिपोसक्शन तकनीक का उपयोग करके मानव चमड़े के नीचे वसा ऊतक नमूनाकरण
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MacGregor, K. A., Rodriguez-Sanchez, … More

MacGregor, K. A., Rodriguez-Sanchez, N., Barwell, N. D., Gallagher, I. J., Moran, C. N., Di Virgilio, T. G. Human Subcutaneous Adipose Tissue Sampling Using a Mini-Liposuction Technique. J. Vis. Exp. (175), e62635, doi:10.3791/62635 (2021).

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