Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kornea Yara İyileşmesini İncelemek İçin Epitelyal Aşınma Modeli

3.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/63112

⸱

29 Aralık 2021

 ,  ,  ,  , 

Bu makalede

Özet

Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu kornea yara iyileşmesi modeli yüksek oranda tekrarlanabilir ve şimdi hastalıklar bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Özet

Kornea görme için kritik öneme sahiptir ve gözün kırılma gücünün yaklaşık üçte ikisini oluşturur. Korneanın vizyondaki rolü için çok önemli olan şey şeffaflığıdır. Bununla birlikte, dış pozisyonu nedeniyle, kornea, kornea şeffaflığının kaybına ve nihai körlüğe yol açabilecek çok çeşitli yaralanmalara karşı oldukça hassastır. Bu yaralanmalara yanıt olarak etkili kornea yarasının iyileşmesi, kornea homeostazının korunmasında ve kornea saydamlığının ve kırma yeteneklerinin korunmasında çok önemlidir. Tehlikeye giren kornea yarası iyileşmesi durumunda, kornea enfeksiyonlara, ülserasyonlara ve yara izlerine karşı savunmasız hale gelir. Kornea yaralanması iyileşmesinin kornea şeffaflığının ve görmenin korunmasındaki temel önemi göz önüne alındığında, normal kornea yarası iyileşme sürecinin daha iyi anlaşılması, enfeksiyon ve hastalıkla ilişkili bozulmuş kornea yarasının iyileşmesini anlamak için bir ön koşuldur. Bu amaç doğrultusunda, kornea yaralanmasının murin modellerinin, normal fizyolojik koşullar altında çalışan kornea yarası iyileşme mekanizmalarını daha iyi anlamamızda yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitel aşınması oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu modelde, yara bölgesini ayırmak için kornea üzerinde ortalanmış 2 mm çapında dairesel bir trefin kullanılır. Golf sıçrayışı, epiteli debride etmek ve kornea epitel bazal membranına zarar vermeden dairesel bir yara oluşturmak için özenle kullanılır. Ortaya çıkan enflamatuar yanıt, etkili yara iyileşmesi için kritik olan iyi karakterize edilmiş hücresel ve moleküler olayların bir kaskadı olarak ilerler. Bu basit kornea yara iyileşmesi modeli oldukça tekrarlanabilir ve iyi yayınlanmıştır ve şimdi hastalık bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Giriş

Kornea gözün üçte birinin saydam ön kısmıdır. Kornea gözün iç yapılarını korumak ve gözü enfeksiyonlara karşı koruyan yapısal bir bariyer oluşturmak da dahil olmak üzere çeşitli işlevlere hizmet eder1. Daha da önemlisi, kornea görme için kritik öneme sahiptir ve gözün kırılma gücünün yaklaşık üçte ikisini sağlar 2,3. Korneanın vizyondaki rolü için çok önemli olan şey şeffaflığıdır. Bununla birlikte, dışa doğru pozisyonu nedeniyle, kornea günlük olarak bariyer fonksiyonunun bozulmasına, şeffaflık kaybına ve nihai körlüğe yol açabilecek çok çeşitli yaralanmalara maruz kalmaktadır. Kornea ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan protokolleri, Houston Üniversitesi ve Baylor Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komiteleri tarafından onaylanmıştır. Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği (ARVO) bildirisinde özetlenen ve hayvanların görme ve oftalmik araştırmalarda kullanımına ilişkin kılavuzlar, farelerin ele alınmasında ve kullanılmasında takip edilmiştir.

1. Hazırlık

  1. Floresein çözeltisinin hazırlanması
    1. 10 mg sodyum floresein tuzunu 1 mL steril salin veya steril 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözerek% 1 floresein çözeltisi hazırlayın.
      NOT: Mikrobiyal kontaminasyonu önlemek için sodyum floresein ç....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 3 , künt golf sopası spud'u ile oluşturulan bir kornea yarasının iletim elektron mikrografını göstererek, epitel bazal membranının yaralanmadan sonra gerçekten sağlam olduğunu göstermektedir.

figure-results-1
Şekil 3: Epitelyal bazal membran kornea aşınmasından sonra bozulmadan kalır. Künt golf sopası spud'u ile.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu yöntem makalesinin amacı, bir trefin ve künt bir golf sopası tükürüğü kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokolü tanımlamaktı. Bu murin modeli, kornea iltihabını ve yara iyileşmesine katkısını incelemek için kullanılmıştır. Bu tip bir model, normal fizyolojik koşullar altında vepatolojilerde kornea yarası iyileşme mekanizmalarını incelemek için kullanılabilir 17,28,29,41,42.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Teşekkürler

Finansman: Destekleyen: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S. ve R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.) ve Sigma Xi Grant in Aid of Research (P.K.A.). İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri veya Sigma Xi'nin resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anti-CD31 antikoruBD Bioscience, Pharmingen550274
Anti-CD41 antikoruBD Bioscience, Pharmingen553847
Anti-Ly6G antikoruBD Bioscience, Pharmingen551459
Sığır serum albümini (BSA)ThermoFisher scientificB14
C57BL/6 farelerJackson Laboratuvarları664
DAPISigma AldrichD8417
DeltaVision geniş alan evrişim floresan mikroskobuGE Yaşam Bilimleri
Diseksiyon mikroskobuLeica microsystems
Elektronik Üstten Yüklemeli Teraziler (Tartı)Fisher Scientific
EthanolThermoFisher scientificT038181000CS
Golf sopası spud,Stephens aletleriS2-1135
İris eğrisi makasıFisher Scientific31212
İzofluran,Patterson veteriner07-893-1389
KetaminPatterson, veteriner07-890-8598
Fosfat tamponlu salin (PBS),ThermoFisher, bilimselAM9624
Sodyum floresein tuzuSigma Aldrich46970
Cerrahi bıçak (scapel bıçağı)Güzel Bilim araçları10022-00
TrephineIntegra Miltex33-31
TritonX -100Fisher Scientific50-295-34
ForcepGüzel Bilim araçları11923-13
XylazinePatterson veteriner07-808-1947
, , , , , , , ,

Kaynaklar

  1. DelMonte, D. W., Kim, T. Anatomy and physiology of the cornea. Journal of Cataract and Refractive Surgery. 37 (3), 588-598 (2011).
  2. Meek, K. M., Knupp, C. Corneal structure and transparency. Progress in Retinal and Eye Research. 49, 1-16 (2015).
  3. Sridhar, ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Kornea ŞeffaflığıMurin Kornea ModeliBazal MembranYara Kapanmasıİnflamatuar YanıtFlüoresein BoyamaDijital MikroskopiGörüntü Analizi