腎除神経の改善により、アンジオテンシンII注入による高血圧が軽減されました。
Summary
ここでは、アンジオテンシンII注入によって誘発された高血圧マウスにおける腎交感神経除神経(RDN)のプロトコルを提示します。この手順は再現性があり、便利であり、高血圧および心肥大に対するRDNの調節メカニズムを研究することを可能にする。
Abstract
血圧に対する腎交感神経除神経(RDN)の利点は、近年の多数の臨床試験で証明されています。しかし、高血圧に対するRDNの調節メカニズムはとらえどころのないままです。したがって、マウスでより単純なRDNモデルを確立することが不可欠です。この研究では、アンジオテンシンIIを充填した浸透圧ミニポンプを14週齢のC57BL / 6マウスに移植しました。ミニ浸透圧ポンプの移植の1週間後、フェノールを使用してマウスの両側腎動脈に対して修正RDN手順を実施した。年齢性別を一致させたマウスに生理食塩水を与え、偽群とした。血圧はベースライン時とその後21日間毎週測定されました。次に、腎動脈、腹部大動脈、心臓を採取し、H&Eおよびマッソン染色を用いた組織学的検査を行った。この研究では、高血圧を制御し、心肥大を緩和できる、シンプルで実用的で再現性のある標準化されたRDNモデルを提示します。この技術は、腎動脈に損傷を与えることなく末梢腎交感神経を除神経することができます。以前のモデルと比較して、修正されたRDNは、高血圧の病態生物学および病態生理学の研究を容易にします。
Introduction
高血圧は、世界中の主要な慢性心血管疾患です。制御されていない高血圧は、標的臓器に損傷を与え、心不全、脳卒中、および慢性腎臓病の一因となる可能性があります1,2,3。高血圧の有病率は、中国では1991年から2007年の間に20%から31%に増加しました。中国の高血圧症の成人の数は、高血圧の診断基準(130/80 mmHg)4の最近の改訂に続いて倍増する可能性があります。高血圧は薬で制御できますが、最大耐量で少なくとも3つの降圧薬(1つの利尿薬を含む)を投与された場合でも、患者の約20%が高血圧を制御できず、薬剤耐性高血圧の発症につながる可能性があります5。
腎交感神経除神経(RDN)は、高血圧の潜在的な治療法であることが証明されています。2009年、KrumらはRDNを用いた抵抗性高血圧治療を初めて報告した。経皮的腎動脈焼灼術は、患者6の持続的な血圧低下を効果的に引き起こす可能性があることがわかりました。しかし、シンプリシティ高血圧3(HTN-3)試験の失敗により、RDN7の適用が妨げられ、RDNは物議を醸す治療法になりました。それにもかかわらず、RDNの見通しはまだ排除されていません。RADIANCE-HTN SOLO、SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED、SPILAL HTN-OFF MED Pivotalなどの最近の臨床試験では、高血圧に対するRDNの有効性が確認されています8,9,10,11,12。したがって、RDNの効果を調査するには、より詳細な機構研究を実施する必要があります。
この研究の全体的な目的は、マウスのRDNをどのように変更して、より簡単で安定した手術を生み出すことができるかを示すことです。多数の実験が、異なる動物モデルにおける血管内凍結焼灼、体外超音波および化学的または神経毒の局所適用など、RDNの様々なアプローチを研究してきた13、14、15、16、17。フェノールによる化学的アブレーションを用いて生成されたRDNモデルは、高血圧に対する交感神経活性化の病因を研究するための確立された実験モデルです。このモデルは、綿棒18を使用した10%フェノール/エタノール溶液による腎交感神経の化学腐食によって生成されます。一方では、従来のRDNは腎交感神経活動を潜在的に阻害し、それがレニン分泌およびナトリウム再吸収を減少させ、腎血流を増加させる。一方、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系19を抑制する。これにより、RDNは高血圧に対して有益な効果を有する。しかし、化学的アブレーションで生成されたRDNモデルにはアブレーション基準やアブレーション時間が欠けており、実験手順の詳細はまだ不明です。また、利用可能なテクニカルレポートはありません。本報告では,C57BL/6マウスにおけるアンジオテンシンII(Ang II)誘発高血圧症における計量紙を用いたフェノールを用いたRDNモデル作製の手術プロトコールについて述べる.フェノールを含む秤量紙で腎動脈を包み、アブレーション時間を統一することで、より再現性と信頼性の高いRDNモデルの確立に貢献します。この実験モデルは、高血圧に対するRDNの効果を評価することを目的としています。
Protocol
Representative Results
Discussion
RDNが血圧を下げることができるかどうかは、シンプリシティHTN-3試験7,25の否定的な結果が発表されて以来、物議を醸しています。しかし、いくつかの臨床試験および動物実験は、高血圧のヒトおよび動物に対するRDNの肯定的かつ効果的な結果を示している9、10、11、12、13、…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、中国国家自然科学基金会(81770420)、上海市科学技術委員会(20140900600)、上海臨床老年医学重点研究所(13dz2260700)、上海市重点臨床専門(shslczdzk02801)、および復旦大学付属華東病院老人冠状動脈疾患センターの支援を受けました。
Materials
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
| Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
| Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
| Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
| Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
| Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
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