Miglioramento della denervazione renale ha attenuato l'ipertensione indotta dall'infusione di angiotensina II
Summary
Qui, presentiamo un protocollo per la denervazione simpatica renale (RDN) nei topi con ipertensione indotta dall’infusione di angiotensina II. La procedura è ripetibile, conveniente e consente di studiare i meccanismi regolatori della RDN sull’ipertensione e l’ipertrofia cardiaca.
Abstract
I benefici della denervazione simpatica renale (RDN) sulla pressione sanguigna sono stati dimostrati in un gran numero di studi clinici negli ultimi anni. Tuttavia, il meccanismo regolatore di RDN sull’ipertensione rimane elusivo. Pertanto, è essenziale stabilire un modello RDN più semplice nei topi. In questo studio, mini pompe osmotiche riempite con angiotensina II sono state impiantate in topi C57BL / 6 di 14 settimane. Una settimana dopo l’impianto della pompa mini-osmotica, è stata eseguita una procedura RDN modificata sulle arterie renali bilaterali dei topi usando fenolo. Ai topi di sesso di età corrispondente è stata somministrata soluzione salina e serviti come gruppo fittizio. La pressione sanguigna è stata misurata al basale e successivamente ogni settimana per 21 giorni. Quindi, l’arteria renale, l’aorta addominale e il cuore sono stati raccolti per l’esame istologico utilizzando H & E e la colorazione Masson. In questo studio, presentiamo un modello RDN semplice, pratico, ripetibile e standardizzato, che può controllare l’ipertensione e alleviare l’ipertrofia cardiaca. La tecnica può denervare i nervi simpatici renali periferici senza danni alle arterie renali. Rispetto ai modelli precedenti, l’RDN modificato facilita lo studio della patobiologia e della fisiopatologia dell’ipertensione.
Introduction
L’ipertensione è una delle principali malattie cardiovascolari croniche in tutto il mondo. L’ipertensione incontrollata potrebbe danneggiare gli organi bersaglio e contribuire a insufficienza cardiaca, ictus e malattie renali croniche 1,2,3. La prevalenza dell’ipertensione è aumentata dal 20% al 31% tra il 1991 e il 2007 in Cina. Il numero di adulti con ipertensione in Cina potrebbe raddoppiare a seguito di una recente revisione dei criteri diagnostici per l’ipertensione (130/80 mmHg)4. L’ipertensione può essere controllata dalla medicina, tuttavia, circa il 20% dei pazienti non è in grado di controllare la propria ipertensione, anche quando riceve almeno tre farmaci antipertensivi (incluso un diuretico) alla dose massima tollerata, che può portare allo sviluppo di ipertensione resistente ai farmaci5.
La denervazione simpatica renale (RDN) ha dimostrato di essere un potenziale trattamento per l’ipertensione. Nel 2009, Krum e colleghi hanno riferito di un trattamento per l’ipertensione resistente utilizzando RDN per la prima volta. È stato riscontrato che l’ablazione percutanea dell’arteria renale può causare efficacemente una riduzione persistente della pressione arteriosa nei pazienti6. Tuttavia, il fallimento dello studio Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) ha impedito l’applicazione di RDN7, trasformando RDN in una terapia controversa. Tuttavia, la prospettiva di RDN non è stata ancora esclusa. Recenti studi clinici, tra cui RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED e SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal hanno confermato l’efficacia di RDN sull’ipertensione 8,9,10,11,12. Pertanto, è necessario eseguire ricerche meccanicistiche più dettagliate per esplorare gli effetti di RDN.
Lo scopo generale di questo studio è dimostrare come l’RDN nei topi può essere modificato per produrre un intervento chirurgico più semplice e stabile. Un gran numero di esperimenti ha studiato vari approcci di RDN, come la crioablazione intravascolare, l’ecografia extracorporea e l’applicazione locale di una sostanza chimica o neurotossina in diversi modelli animali 13,14,15,16,17. Il modello RDN generato mediante ablazione chimica con fenolo è un modello sperimentale consolidato per studiare la patogenesi dell’attivazione simpatica sull’ipertensione. Questo modello è generato dalla corrosione chimica dei nervi simpatici renali con una soluzione di fenolo / etanolo al 10% utilizzando un batuffolo di cotone18. Da un lato, l’RDN convenzionale potenzialmente inibisce l’attività simpatica renale, che quindi diminuisce la secrezione di renina e il riassorbimento di sodio e aumenta il flusso sanguigno renale. D’altra parte, sopprime il sistema renina-angiotensina-aldosterone19. In tal modo, RDN ha un effetto benefico sull’ipertensione. Tuttavia, il modello RDN generato dall’ablazione chimica manca di criteri di ablazione e tempo di ablazione e i dettagli della procedura sperimentale non sono ancora chiari. Inoltre, non ci sono rapporti tecnici disponibili. In questo rapporto, descriviamo un protocollo chirurgico per la generazione del modello RDN con fenolo utilizzando carta pesata nell’ipertensione indotta da angiotensina II (Ang II) nei topi C57BL / 6. Avvolgiamo l’arteria renale con carta pesata contenente fenolo e unifichiamo il tempo di ablazione, il che aiuta a stabilire un modello RDN più riproducibile e affidabile. Questo modello sperimentale ha lo scopo di valutare l’effetto di RDN sull’ipertensione.
Protocol
Representative Results
Discussion
Se RDN potrebbe abbassare la pressione sanguigna è diventato controverso dopo la pubblicazione del risultato negativo dello studio di symplicity HTN-3 7,25. Tuttavia, i numerosi studi clinici e gli esperimenti sugli animali hanno dimostrato risultati positivi ed efficaci di RDN su esseri umani e animali ipertesi 9,10,11,12,13,14,15,16,17.</s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato dalla National Natural Science Foundation of China (81770420), dalla Science and Technology Commission della municipalità di Shanghai (20140900600), dallo Shanghai Key Laboratory of Clinical Geriatric Medicine (13dz2260700), dalla Shanghai Municipal Key Clinical Specialty (shslczdzk02801) e dal Centro di malattia coronarica geriatrica, Huadong Hospital affiliato alla Fudan University.
Materials
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
| Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
| Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
| Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
| Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
| Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
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