Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo para denervação simpática renal (RDN) em camundongos com hipertensão induzida por infusão de Angiotensina II. O procedimento é repetível, conveniente e permite estudar os mecanismos regulatórios da RDN na hipertensão e hipertrofia cardíaca.
Abstract
Os benefícios da denervação simpática renal (RDN) sobre a pressão arterial foram comprovados em um grande número de ensaios clínicos nos últimos anos. No entanto, o mecanismo regulador da RDN na hipertensão permanece indefinido. Assim, é essencial estabelecer um modelo RDN mais simples em camundongos. Neste estudo, minibombas osmóticas cheias de angiotensina II foram implantadas em camundongos C57BL/6 de 14 semanas de idade. Uma semana após o implante da bomba mini-osmótica, um procedimento RDN modificado foi realizado nas artérias renais bilaterais dos camundongos usando fenol. Camundongos pareados por idade-sexo receberam soro fisiológico e serviram como grupo simulado. A pressão arterial foi medida no início do estudo e a cada semana subsequentemente durante 21 dias. Em seguida, artéria renal, aorta abdominal e coração foram coletados para exame histológico com coloração H&E e Masson. Neste estudo, apresentamos um modelo de RDN simples, prático, repetível e padronizado, que pode controlar a hipertensão e aliviar a hipertrofia cardíaca. A técnica pode desnervar os nervos simpáticos renais periféricos sem danos na artéria renal. Em comparação com os modelos anteriores, o RDN modificado facilita o estudo da patobiologia e fisiopatologia da hipertensão.
Introduction
A hipertensão é uma importante doença cardiovascular crônica em todo o mundo. A hipertensão não controlada pode danificar órgãos-alvo e contribuir para insuficiência cardíaca, acidente vascular cerebral e doenças renais crônicas 1,2,3. A prevalência de hipertensão aumentou de 20% para 31% entre 1991 e 2007 na China. O número de adultos com hipertensão na China pode dobrar após uma recente revisão dos critérios diagnósticos para hipertensão (130/80 mmHg)4. A hipertensão pode ser controlada por medicamentos, no entanto, aproximadamente 20% dos pacientes são incapazes de controlar sua hipertensão, mesmo quando recebem pelo menos três medicamentos anti-hipertensivos (incluindo um diurético) na dose máxima tolerada, o que pode levar ao desenvolvimento de hipertensão resistente a medicamentos5.
A denervação simpática renal (RDN) provou ser um tratamento potencial para a hipertensão. Em 2009, Krum e seus colegas relataram tratamento de hipertensão resistente usando RDN pela primeira vez. Verificou-se que a ablação percutânea da artéria renal pode efetivamente causar redução persistente da pressão arterial em pacientes6. No entanto, o fracasso do estudo Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) impediu a aplicação do RDN7, transformando o RDN em uma terapia controversa. No entanto, a perspectiva de RDN ainda não foi descartada. Ensaios clínicos recentes, incluindo RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED e SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal confirmaram a eficácia do RDN na hipertensão 8,9,10,11,12. Assim, pesquisas mecanicistas mais detalhadas precisam ser realizadas para explorar os efeitos da RDN.
O objetivo geral deste estudo é demonstrar como a RDN em camundongos pode ser modificada para produzir uma cirurgia mais simples e estável. Um grande número de experimentos tem estudado várias abordagens da RDN, como crioablação intravascular, ultrassonografia extracorpórea e aplicação local de uma substância química ou neurotoxina em diferentes modelos animais 13,14,15,16,17. O modelo RDN gerado por ablação química com fenol é um modelo experimental bem estabelecido para estudar a patogênese da ativação simpática na hipertensão. Este modelo é gerado pela corrosão química dos nervos simpáticos renais com solução de fenol/etanol a 10% utilizando um cotonete18. Por um lado, o RDN convencional potencialmente inibe a atividade simpática renal, o que diminui a secreção de renina e a reabsorção de sódio e aumenta o fluxo sanguíneo renal. Por outro lado, suprime o sistema renina-angiotensina-aldosterona19. Assim, RDN tem um efeito benéfico sobre a hipertensão. No entanto, o modelo RDN gerado pela ablação química carece de critérios de ablação e tempo de ablação e os detalhes do procedimento experimental ainda não estão claros. Além disso, não há relatórios técnicos disponíveis. Neste relato, descrevemos um protocolo cirúrgico para a geração de modelo RDN com fenol utilizando papel de pesagem na hipertensão induzida por Angiotensina II (Ang II) em camundongos C57BL/6. Envolvemos a artéria renal com papel de pesagem contendo fenol e unificamos o tempo de ablação, o que ajuda a estabelecer um modelo RDN mais reprodutível e confiável. Este modelo experimental tem como objetivo avaliar o efeito da RDN sobre a hipertensão.
Protocol
Representative Results
Discussion
Se a RDN poderia reduzir a pressão arterial tornou-se controversa desde a publicação do resultado negativo do estudo de simplicidade HTN-3 7,25. No entanto, os diversos ensaios clínicos e experimentos com animais têm demonstrado resultados positivos e efetivos da RDN em humanos e animais hipertensos 9,10,11,12,13,14,15,16,17.<…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81770420), Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Xangai (20140900600), Laboratório Chave de Medicina Geriátrica Clínica de Xangai (13dz2260700), Especialidade Clínica Chave Municipal de Xangai (shslczdzk02801) e Centro de Doença Arterial Coronária geriátrica, Hospital Huadong Afiliado à Universidade de Fudan.
Materials
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
| Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
| Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
| Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
| Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
| Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
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