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Artigo de método

Transplante cardíaco cervical heterotópico de camundongo utilizando manguitos vasculares

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DOI:

10.3791/64089

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23 de junho de 2022

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Neste artigo

Resumo

Modelos de transplante cardíaco de camundongos representam valiosas ferramentas de pesquisa para o estudo da imunologia do transplante. O presente protocolo detalha o transplante cardíaco cervical heterotópico de camundongos que envolve a colocação de manguitos na artéria carótida comum do receptor e no tronco da artéria pulmonar do doador para permitir o fluxo sanguíneo laminar.

Resumo

Modelos murinos de transplante cardíaco são frequentemente utilizados para estudar a lesão de isquemia-reperfusão, as respostas imunes inatas e adaptativas após o transplante e o impacto das terapias imunomoduladoras na rejeição do enxerto. O transplante cardíaco cervical heterotópico em camundongos foi descrito pela primeira vez em 1991 usando anastomoses suturadas e posteriormente modificado para incluir técnicas de manguito. Essa modificação permitiu melhores taxas de sucesso e, desde então, houve vários relatórios que propuseram melhorias técnicas adicionais. No entanto, a tradução para uma utilização mais difundida permanece limitada devido à dificuldade técnica associada às anastomoses do enxerto, que requer precisão para alcançar o comprimento e o calibre adequados dos manguitos para evitar torção anastomótica vascular ou tensão excessiva, o que pode resultar em danos ao enxerto. O presente protocolo descreve uma técnica modificada para a realização de transplante cardíaco cervical heterotópico em camundongos que envolve a colocação do manguito na artéria carótida comum do receptor e na artéria pulmonar do doador em alinhamento com a direção do fluxo sanguíneo.

Introdução

Abbott et al. publicaram1 a primeira descrição do transplante cardíaco abdominal heterotópico em ratos em 1964. Essas técnicas cirúrgicas foram refinadas e simplificadas por Ono et al., em 19692. Corry et al. descreveram pela primeira vez um método para transplante cardíaco abdominal heterotópico em camundongos em 1973; semelhante aos modelos de ratos relatados anteriormente, envolveu enxerto no abdome do hospedeiro com revascularização por anastomoses end-to-side da artéria pulmonar do doador e aorta ascendente para a veia cava inferior e aorta abdominal do receptor, respectivamente3. O transplan....

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Protocolo

Todos os procedimentos de manuseio de animais foram conduzidos em conformidade com as diretrizes do NIH Care and Use of Laboratory Animals e aprovados pelo Comitê de Estudos Animais da Escola de Medicina da Universidade de Washington. Corações de camundongos C57BL/6 (B6) e BALB/c (pesando 20-25 g) foram transplantados para receptores B6 pareados por sexo (6-8 semanas de idade). Os camundongos foram obtidos de fontes comerciais (ver Tabela de Materiais). Transplantes singênicos foram realizados para avaliar as respostas celulares relacionadas à lesão de isquemia-reperfusão, e transplantes alogênicos foram realizados para investigar os mecanismos imunol....

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Resultados

Este modelo de transplante cardíaco heterotópico cervical de camundongos tem sido utilizado para realizar mais de 1.000 transplantes em nosso laboratório, com uma taxa de sobrevida de aproximadamente 97%. A taxa de sucesso é ligeiramente maior do que relatos anteriores utilizando outras técnicas de transplante cardíaco heterotópico cervical em camundongos10,11,20. Isso poderia ser atribuído ao manguito maior de 20 G colocado na .......

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Discussão

Utilizando esta técnica, o transplante cardíaco cervical heterotópico de camundongo pode ser realizado em menos de 40 minutos por um microcirurgião experiente e em aproximadamente 60 minutos por um microcirurgião de nível básico. Embora o transplante cardíaco cervical tenha sido estudado em numerosos modelos animais, um modelo de camundongo continua sendo o padrão-ouro devido a múltiplas cepas genéticas bem definidas, capacidades de alteração genética e disponibilidade de numerosos reagentes, incluindo anticorpos monoclo.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

A DK é apoiada pelos subsídios dos Institutos Nacionais de Saúde 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078, Veterans Administration Merit Review grant 1I01BX002730 e The Foundation for Barnes-Jewish Hospital.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Gravatas de seda trançada 6-0Henry Schein Inc7718729
0,75% Esfoliante de iosina de proviodonaPriority Care IncNDC 57319-327-0
Sutura de nylon 10-0Surgical Specialties CorporationAK-0106
655-nm Q-dots não direcionadosInvitrogenQ21021MP
70% EtanolPharmco Products Inc111000140
Gravatas de seda trançada 8-0Henry Schein Inc1005597
pinça AdsonFine Science Tools Inc91127-12
BALB/c e C57BL/6 camundongos (6-8 semanas)Coagulador bipolar Jackson Laboratories
Valleylab IncSurgII-20, E6008/E6008B
Injeção de carprofeno (Rimadyl)Transpharm35844
Carprofeno (Rimadyl) comprimido mastigável oralTranspharm38995/37919
Microscópio 2P personalizado executando o software de aquisição ImageWarpA & B Software
Dumont no. 5 fórcepsFine Science Tools Inc11251-20
Tesoura de mola estilo vannas finaFine Science Tools Inc15000-03
GraphPad Prism 5.0Sun Microsystems Inc.
Porta-agulha HalseyFine Science Tools Inc91201-13
Halsted-Mosquito braçadeira ponta curvaFine Science Tools Inc91309-12
Harvard Apparatus ventilador de mouse modelo 687Harvard ApparatusMA1 55-0001
Solução de heparina (100 U/mL)Abraxis Pharmaceutical Products504031
ImarisCetamina Bitplane
(50 mg/kg)Wyeth206205-01
Microscópio— Leica Wild M651 &vezes; 6– TesouraLeica Microsystems
Fine Science Tools Inc15396-00
Ohio vaporizador de isofluranoParkland ScientificV3000i
QdotsThermoFisher1604036
S& T SuperGrip Fórceps ponta angularFine Science Tools Inc00649-11
S & T SuperGrip Forceps ponta retaFine Science Tools Inc00632-11
Solução salina normal estéril (0,9% (peso / volume) cloreto de sódioHospira IncNDC 0409-4888-20
Pontas Q estéreis (mini aplicadores cônicos com ponta de algodão de 3 polegadas)Puritan Medical Company LLC823-WC
Surflow 20 gauge 1/4 de polegada Teflon angiocatheterTerumo Medical CorporationSR-OX2032CA
Angiocateter de Teflon Surflow 24 gauge 3/4 de polegadaTerumo Medical CorporationR-OX2419CA
ThermoCare Small Animal ICU System (configurações de recuperação 3 L/min O2, 80 ° C, 40% de umidade)Thermocare Inc
VetBondSanta Cruz Biotechnology SC361931NC0846393
xilazina (10 mg/kg)Lloyd Laboratories139-236
de mola extra fina Moria de 40 ampliações

Referências

  1. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  2. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. The Journal of Thoracic and Card....

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Reimpressões e permissões

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