Summary
Protokollet här ger en detaljerad dynamisk provtagning i realtid av extracellulär vätska från hippocampus hos vakna råttor med hjälp av ett mikrodialyssystem.
Abstract
En mängd olika sjukdomar i centrala nervsystemet (CNS) är förknippade med förändringar i sammansättningen av hippocampus extracellulär vätska (HECF). Svårigheten att erhålla HECF i realtid från medvetna råttor har dock länge begränsat utvärderingen av CNS-sjukdomsprogression och effektiviteten av etnomedicinsk behandling. Uppmuntrande nog kan en hjärnmikrodialysteknik användas för kontinuerlig provtagning med fördelarna med dynamisk observation, kvantitativ analys och en liten provtagningsstorlek. Detta möjliggör övervakning av förändringar i det extracellulära vätskeinnehållet för föreningar från traditionella örter och deras metaboliter i hjärnan hos levande djur. Syftet med denna studie var således att noggrant implantera en mikrodialyssond i cerebrospinalvätska i hippocampusregionen hos Sprague Dawley (SD) råttor med en tredimensionell stereotaxisk hjärnapparat, skära av molekylvikter större än 20 kDa. Den högkvalitativa HECF erhölls sedan från medvetna råttor med hjälp av ett mikrodialysprovtagningskontrollsystem med en justerbar samplingsfrekvens från 2,87 nL / min - 2,98 ml / min. Sammanfattningsvis ger vårt protokoll en effektiv, snabb och dynamisk metod för att erhålla HECF hos vakna råttor med hjälp av mikrodialysteknik, vilket ger oss obegränsade möjligheter att ytterligare utforska patogenesen av CNS-relaterade sjukdomar och utvärdera läkemedelseffektivitet.
Introduction
Sjukdomar i centrala nervsystemet (CNS) med hög sjuklighet, såsom neurodegenerativ sjukdom, traumatisk hjärnskada, hypoxiinducerad hjärnskada på hög höjd och ischemisk stroke, är avgörande orsaker till den växande dödligheten över hela världen 1,2,3. Realtidsövervakning av cytokiner och proteinförändringar i specifika hjärnregioner bidrar till diagnostisk noggrannhet av CNS-sjukdomar och farmakokinetiska studier i hjärnan efter medicinering. Traditionell vetenskaplig forskning använder hjärnvävnadshomogenat eller en manuell insamling av djurinterstitiell hjärnvätska för detektion av specifika ämnen och för farmakokinetiska studier. Detta har dock vissa brister, såsom en begränsad urvalsstorlek, oförmågan att dynamiskt observera förändringar av indikatorer och ojämn urvalskvalitet 4,5,6. Cerebrospinalvätska, en interstitiell vätska, skyddar hjärnan och ryggmärgen från mekanisk skada. Dess sammansättning skiljer sig från serumets på grund av förekomsten av blod-hjärnbarriären (BBB)7. Direkt analys av cerebrospinalvätskeprover bidrar mer till att avslöja mekanismen för CNS-lesioner och läkemedelsupptäckt. Oundvikligen har cerebrospinalvätskeproverna, manuellt erhållna direkt från cisterna magna och cerebrala ventriklarna genom en spruta, nackdelar med blodförorening, en slumpmässig chans att ta prov, osäkerhet i kvantitet och nästan ingen multipel hämtningsmöjlighet 8,9. Mer anmärkningsvärt är att konventionella interstitiella provtagningsmetoder för hjärnvätska inte kan få prover från skadade hjärnregioner, vilket hindrar utforskningen av patogenesen av CNS-sjukdomar i specifika hjärnregioner och effektutvärderingen av riktade etnomedicinska terapier 9,10.
Hjärnmikrodialys är en teknik för provtagning av interstitiell hjärnvätska hos vakna djur11. Mikrodialyssystemet imiterar vaskulär permeabilitet med hjälp av en sond implanterad i hjärnan. Mikrodialyssonden är beväpnad med ett semipermeabelt membran och implanteras i specifika hjärnregioner. Efter perfusion med isoton artificiell cerebrospinalvätska (ACSF) kan den dialyserade interstitiella hjärnvätskan samlas in positivt med fördelarna med små provstorlekar, kontinuerlig provtagning och dynamisk observation12,13. När det gäller plats kan hjärnmikrodialyssonder selektivt implanteras i hjärnstrukturer eller kranialcisterner av intresse14. En observation av onormala nivåer av en endogen substans i hippocampus extracellulär vätska (HECF) föreslår förekomsten av CNS-sjukdomar eller patogenesen av sjukdom. Flera studier har visat att biomarkörerna för CNS-sjukdomar, såsom D-aminosyror vid schizofreni, β-amyloid- och tauproteiner vid Alzheimers sjukdom, neurofilamentlätta kedjor vid traumatisk hjärnskada och ubiquitinkarboxiterminalhydrolas L1s vid hypoxisk ischemiencefalopati, kan analyseras i cerebrospinalvätska15,16,17 . En kemisk analysmetod baserad på hjärnans mikrodialysprovtagningsteknik kan användas för att övervaka dynamiska förändringar av exogena föreningar, såsom aktiva ingredienser i etnomedicin, som diffunderar och distribueras i specifika hjärnregioner14.
Denna artikel presenterar den specifika processen för dynamisk HECF-förvärv hos vakna råttor och mäter dess osmotiska tryck för att säkerställa provkvalitet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Experimentprotokollet genomfördes i enlighet med kraven från kommittén för användning av laboratoriedjur och institutionell djurvård och användning vid Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (rekordnummer: 2021-11). Hanråttor av typen Sprague Dawley (SD) (280 ± 20 g, 6-8 veckor gamla) användes i denna studie.
1. Hjärnmikrodialyssond implantationskirurgi
- Använd 3 % och 1,5 % isofluran för induktion respektive underhåll av ranestesi med hjälp av ett djuranestesisystem i en luft-syreblandning vid 0,6 l/min. Se till att råttorna är djupt sövda utan både smärtreflex och hornhinnereflex. Använd veterinärsalva på ögonen för att förhindra torrhet under anestesi.
- Ta bort pälsen på den bedövade råttans skalle med en elektrisk rakapparat i beredningsområdet. Fixa sedan den bedövade råttan på en stereotaxisk hjärnlokaliserare. Desinficera operationsområdet före operationen genom att applicera povidonjod och etanol 3x till operationsområdet med en steril bomullstuss. Applicera bupivakain lokalt för lokal analgesi. OBS: Hela processen för mikrodialysbaserad HECF-provinsamling illustreras i figur 1.
- Gör ett 1,5 cm kraniofacialt snitt i mitten med kirurgisk sax och ta bort periosteum med kirurgisk sax och oftalmisk pincett.
- Tänk på bregma som basal position och genomborra endokraniet för att borra en 2 mm öppning vid anteroposterior (AP) position (-2 mm), mediolateral (ML) position (-3,5 mm) och dorsoventral (DV) position (-3,5 mm) (hippocampus CA1-regionen) med hjälp av en kranial borr.
- Fäst kateterstyletten på gripdonet på en stereotaxisk hjärnsökare och justera positionen för mikrodialyshöljet vid AP (-2 mm), ML (-3,5 mm) och DV (0 mm) positioner. Justera DV-värdet för hjärnstereosökaren och implantera mikrodialyshöljet i CA1-området på ett djup av 3,5 mm.
OBS: Håll djurets temperatur vid 37 °C under drift med hjälp av en djurtemperaturunderhållare. - Borra ytterligare tre öppningar med en diameter på 2 mm så att de tre öppningarna bildar en triangel där proböppningen är centralt placerad. Implantatskruvar i öppningarna på ett djup av 1 mm.
- Fixa sondkatetern med tandcement och använd en 4-0 kirurgisk sutur för att stänga huden. Se figur 2 för sondens placering.
- Placera råttan i burar i 7 dagar för att återhämta sig. Infiltrera bupivakain lokalt (1,5 mg/kg) en gång dagligen efter operationen. Ge mat och vatten ad libitum. Använd natriumhyaluronat ögondroppar 3x om dagen för att förhindra torrhet efter operationen.
OBS: Utför alla procedurer i ett sterilt kirurgiskt rum. Lämna inte djuret utan uppsikt förrän det har återfått tillräckligt med medvetande för att bibehålla sternal liggning vid 37 °C. Lämna inte tillbaka djuret som har genomgått operation till andra djur förrän det är helt återställt.
2. Anslutning av mikrodialyssystem och sondkontroll
- Anslut mikrodialyspumpen, mikrosprutan, enheten för vaken aktivitet och den kryogena provuppsamlaren enligt tillverkarens anvisningar. Installera mikrosprutan med ACSF på mikrodialyspumpen och ställ in mikrodialyspumpen på en hastighet av 1 μl/min för att släppa ut luften i rörledningen.
- Anslut rörledningen och hjärnmikrodialyssonden (membran: PAES; membranlängd: 4 mm; membran OD: 0,5 mm; avskärning: 20 kDa; axellängd: 14 mm). Använd mikrodialyspumpen med en hastighet av 1 μl/min för att injicera ACSF i sonden tills sondens yta är lätt fuktig. Sänk ner sonden i heparinnatriuminjektionslösning för efterföljande användning.
OBS: Om en stor ström av ACSF faller från sondens semipermeabla membran, sett med blotta ögat under tyngdkraften, byt ut sonden mot en ny.
3. Insamling av HECF från den vakna råttan
- Sätt in hjärnans mikrodialyssond i sondkatetern och placera råttan i en kammare (höjd: 360 mm; diameter: 400 mm) med vaddering för att se till att råttorna är fria att röra sig.
- Anslut rörledningen, mikrosprutpumpen och hjärnmikrodialyssonden. Utnyttja råttan via hålet på toppen av råttskyddsanordningen och de rostfria svängarna.
- Slå på den flerkanaliga svängbara styrenheten för att undvika sammanflätning av mikrodialysrörledningarna under råttans fria rörelse. Slå på mikrosprutpumpen och pumpa ACSF med en hastighet av 1 μl/min. Samla HECF regelbundet efter en 60 minuters jämvikt av mikrodialys HECF-uppsamlingssystemet.
- Se till att flödeshastigheten för HECF-proverna i den kylda fraktionsuppsamlaren överensstämmer med ACSF-infusion. Samla upp 20 μl HECF och byt automatiskt till nästa provtagningsrör. Var noga med att kontrollera om sondmembranet är skadat när du sätter in sonden.
4. Mätning av det osmotiska trycket för HECF
- Slå på osmometern och logga in på detekteringssystemet. Klicka på Cal-knappen på pekskärmen och klicka på Res-knappen på sidan för att rensa det tidigare kalibreringsminnet .
- Installera ett 1,5 ml rör som innehåller 100 μL rent vatten utan bubblor på mäthuvudet. Dra mäthuvudet till botten av den kalla hydrazinbehållaren.
- Ange provnummer 0 på pekskärmen och bekräfta att testa. Doppa snabbt diodnålen i provröret och dra sedan snabbt ut den för att inducera kristallisation av provet vid en temperatur av -6,2 °C.
- Vänta tills skärmen visas: Tryck måtthuvudet uppåt och klicka på Cal och Cal 0 i tur och ordning för att kalibrera. Utför mätningar med en 300 mOsm kalibreringslösning och mät det osmotiska trycket hos HECF-proverna enligt beskrivningen ovan.
OBS: Torka av mäthuvudet med en mjuk pappershandduk efter kalibrering eller mätning. HECF-proverna utan bubblor bör blandas väl.
5. Underhåll av mikrodialyssystemet och utrustningen efter provtagning
- Ta ut hjärnans mikrodialyssond från sondkatetern efter avslutad provtagning. Sänk ner sonden i avjoniserat vatten och skölj med avjoniserat vatten i 12 timmar för att avlägsna strandade saltavlagringar från rörledningen och sonden.
- Ta bort sonden för att placera i en 0,05% trypsinlösning vid 4 ° C. Torka rörledningarna i en lufttorr ugn vid 25 °C och förvara dem i rumstemperatur.
OBS: Mikrodialysproberna är dyra och detta steg kan öka återanvändbarheten av sonderna. Proteiner som fäster vid sondytan kan smältas med trypsinlösning för att förhindra att sondmembranet blockeras av proteiner, och trypsin hade ingen effekt på sondmaterialet.
6. Behandling av djur efter provtagning
- Efter provtagning avlivar du råttorna smärtfritt genom att få dem att andas in 1,5 % isofluran, följt av en överdos på 5 % isofluran i enlighet med djuretik.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I enlighet med ovanstående försöksprotokoll och de provtagningsparametrar som anges i tabell 1 erhölls vattenliknande, färglös och transparent HECF på råtta vid den inställda provtagningsfrekvensen (figur 1K). Det osmotiska trycket hos den erhållna rått-HECF var 290-310 mOsm / L, vilket indirekt kan säkerställa kvaliteten på proverna18,19.
Figur 1: HECF för råttor som samlats in med hjälp av provtagningsutrustningen för mikrodialys . (A,B) Djuranestesisystemet och stereotaxiapparaten användes för att bedöva och immobilisera råttor. c) Uppsamlingsrör för mikrodialyssystem. (D) Råttans kranialanatomiska struktur visade bregma och lambdoidal sutur tydligt. (E) Kateterstyletten och hjärnans mikrodialyssond, som uppvisar sondens dialysmembran och stålaxel. (F) Den fasta bocken in vitro i mikrodialyssonden applicerades för att lagra och rengöra sonder. (G) Fyra spruta flytande tillförsel av sprutpumpen. (H, I) De rostfria svivlarna och flerkanaliga svängbara styrenheten på systemet för fritt rörliga djur. J) Tvåkanals kylfraktionsuppsamlare. K) Erhållen HECF på råtta genom mikrodialys. (L) Fri rörlighet för råttor. (M) Relaterade komponenter i mikrodialysprovtagningssystemet-. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Schematiskt diagram över hjärnans mikrodialyssond inbäddad i hippocampusregionen i råtthjärnan. Tre öppningar bildar en triangel, och sondöppningen är centralt placerad. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| Parametrar objekt | Värde |
| Perfusionshastighet | 1 μl/min |
| Samplingsfrekvens | 1 μl/min |
| Provtagningens temperatur | 4 °C |
Tabell 1: Ange parametrar för provtagningssystemet för cerebrospinalvätska med mikrodialys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Patogenesen av CNS-sjukdomar är fortfarande inte helt förstådd, vilket hindrar utvecklingen av nya terapier och läkemedel. Studier har visat att de flesta CNS-sjukdomar är nära besläktade med hippocampus lesioner20,21,22. Den föreslagna hjärnmikrodialystekniken kan rikta in sig på specifika regioner i hjärnan, särskilt hippocampus, vilket gör att den sticker ut från det traditionella tillvägagångssättet att samla HECF. Sonder placeras i CA1-regionen i råtthjärnan genom implantationskirurgi för att separera molekyler av specifik storlek genom passiv diffusion av ett konstgjort membran. Implantationen av sonden är ett avgörande steg där eventuella skador på sonden och eventuella lokala skador på hjärnvävnad, såsom protein, aggregat23, som kan ha orsakats av sondimplantation, kommer att leda till att experimentet misslyckas eller en ökning av mätningens felaktighet. Därför är det viktigt att kontrollera sondens integritet och ge djuret en ordentlig återhämtningsperiod efter implantation av mikrodialyssond.
Under de senaste åren har användningen av etnomedicin för att behandla hjärnsjukdomar ökat24,25. Den traditionella metoden för att erhålla cerebrospinalvätska och interstitiell vätska i hjärnan är mestadels en engångshändelse med stor sannolikhet för blodförorening 8,9. Viktigast är det omöjligt att observera de dynamiska förändringarna av läkemedel och deras metaboliter i kroppen. Som en online-provtagningsteknik för vakna organismer har hjärnmikrodialys egenskaperna att vara in vivo, minimalt invasiv, en liten provstorlek, realtid och dynamisk, vilket kompenserar för defekterna i de traditionella provtagningsmetoderna26. I kombination med modern analys- och detektionsteknik kan kvalitativ och kvantitativ analys av sjukdomsfaktorer och läkemedelskomponenter utföras mer exakt27. I allmänhet är det av stor betydelse att införa hjärnmikrodialys för studier av hjärnsjukdomar och avslöja etnomedicinens verkningsmekanism.
HECF:s in vitro-provtagningsteknik för mikrodialys kan tillämpas för förebyggande och behandling av CNS-sjukdomar med läkemedel. Sekundära hjärnskador som involverar förändringar i HECF-kompositioner är den främsta orsaken till ökad dödlighet av ischemisk hypoxisk hjärnskada och traumatisk hjärnskada. Som svar kan analys av HECF baserat på hjärnmikrodialysteknik dynamiskt diagnostisera tidiga biomarkörer för dessa CNS-sjukdomar för att minska sjuklighet och dödlighet, samt förbättra prognosen28,29. Efter behandling bestäms läkemedelskoncentrationen i hjärnvävnad rutinmässigt genom att mäta homogeniserad hel hjärnvävnad under prekliniska studier, men direkt observation av koncentrationen vid de specifika hjärnregionerna kan inte utföras. För att övervinna detta kan läkemedelskoncentrationer och patologiska markörer i specifika hjärnregioner analyseras kvantitativt i kombination med provtagningstekniker för hjärnmikrodialys30. Särskilt för etniska örter med flera komponenter kan kemisk analys baserad på hjärnmikrodialysprovtagning fokusera och avslöja mysteriet med sammansättning-hjärnregion-mekanismer vid behandling av CNS-sjukdomar31,32. Dessutom kan förändringar i färg, transparens och osmotiskt tryck hos råttan HECF förekomma i olika sjukdomstillstånd, såsom hjärnblödning, hjärntumörer och hjärnhinneinflammation. Med hjälp av HPLC eller masspektrometri kan forskare bestämma förändringarna i HECF-kompositionen i olika encefalopatier.
I allmänhet kan provtagningsteknik för mikrodialys i hjärnan underlätta undersökningen av den patologiska mekanismen för CNS-sjukdomar och utvecklingen av nya läkemedel. Ytterligare begränsningar som måste övervinnas för effektiv tillämpning av systemet inkluderar dock skador på omgivande vävnad efter införandet av mikrodialyssonden i hjärnans riktade region, möjligheten till BBB-förstörelse och begränsad massöverföring över membranet14,33,34. Sammanfattningsvis har hjärnmikrodialystekniken breda tillämpningsmöjligheter vid utforskning av CNS-patogenes och utveckling av nya läkemedel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (82104533), Science & Technology Department of Sichuan Province (2021YJ0175) och China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273). Författarna vill tacka Yuncheng Hong, senior utrustningsingenjör på Tri-Angels D&H Trading Pte. Ltd. (Singapore) för tillhandahållande av tekniska tjänster för mikrodialysteknik.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air-drying oven | Suzhou Great Electronic Equipment Co., Ltd | GHG-9240A | |
| Animal anesthesia system | Rayward Life Technology Co., Ltd | R500IE | |
| Animal temperature maintainer | Rayward Life Technology Co., Ltd | 69020 | |
| Artificial cerebrospinal fluid | Beijing leagene biotech. Co., Ltd | CZ0522 | |
| Brain microdialysis probe | CMA Microdialysis AB | T56518 | |
| Catheter | CMA Microdialysis AB | T56518 | |
| Covance infusion harness | Instech Laboratories, Inc. | CIH95 | |
| Denture base resins | Shanghai Eryi Zhang Jiang Biomaterials Co., Ltd | 190732 | |
| Electric cranial drill | Rayward Life Technology Co., Ltd | 78001 | |
| Electric shaver | Rayward Life Technology Co., Ltd | CP-5200 | |
| Free movement tank for animals | CMA Microdialysis AB | CMA120 | |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd | H51021208 | |
| Iodophor | Sichuan Lekang Pharmaceutical Accessories Co., Ltd | 202201 | |
| Isofluran | Rayward Life Technology Co., Ltd | R510-22 | |
| Microdialysis catheter stylet | CMA Microdialysis AB | 8011205 | |
| Microdialysis collection tube | CMA Microdialysis AB | 7431100 | |
| Microdialysis collector | CMA Microdialysis AB | CMA4004 | |
| Microdialysis fep tubing | CMA Microdialysis AB | 3409501 | |
| Microdialysis in vitro stand | CMA Microdialysis AB | CMA130 | |
| Microdialysis microinjection pump | CMA Microdialysis AB | 788130 | |
| Microdialysis syringe (1.0 mL) | CMA Microdialysis AB | 8309020 | |
| Microdialysis tubing adapter | CMA Microdialysis AB | 3409500 | |
| Non-absorbable surgical sutures | Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd | S19004 | |
| Ophthalmic forceps | Rayward Life Technology Co., Ltd | F12016-15 | |
| Osmometer | Löser | OM 807 | |
| Sodium hyaluronate eye drops | URSAPHARM Arzneimittel GmbH | H20150150 | |
| Stereotaxie apparatus | Rayward Life Technology Co., Ltd | 68025 | |
| Surgical scissors | Rayward Life Technology Co., Ltd | S14014-15 | |
| Surgical scissors | Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd | BY-103 | |
| Syringe needle | CMA Microdialysis AB | T56518 | |
| Trypsin solution | Boster Biological Technology, Ltd. |
PYG0107 | |
| Ultrasonic cleaner | Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd | KMH1-240W8101 |
References
- Erkkinen, M. G., Kim, M. O., Geschwind, M. D. Clinical neurology and epidemiology of the major neurodegenerative diseases. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 10 (4), 033118 (2018).
- Salehi, A., Zhang, J. H., Obenaus, A. Response of the cerebral vasculature following traumatic brain injury. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (7), 2320-2339 (2017).
- Kurtzman, R. A. em3, Caruso, J. L.
- Matsumoto, T., et al. Pharmacokinetic study of Ninjin'yoeito: Absorption and brain distribution of Ninjin'yoeito ingredients in mice. Journal of Ethnopharmacology. 279, 114332 (2021).
- Mahat, M. Y., et al. An improved method of transcutaneous cisterna magna puncture for cerebrospinal fluid sampling in rats. Journal of Neuroscience Methods. 211 (2), 272-279 (2012).
- Ceaglio, N., et al. High performance collection of cerebrospinal fluid in rats: evaluation of erythropoietin penetration after osmotic opening of the blood-brain barrier. Journal of Neuroscience Methods. 219 (1), 70-75 (2013).
- Bothwell, S. W., Janigro, D., Patabendige, A. Cerebrospinal fluid dynamics and intracranial pressure elevation in neurological diseases. Fluids and Barriers of the CNS. 16 (1), 9 (2019).
- Barthel, L., et al. A step-by-step guide for microsurgical collection of uncontaminated cerebrospinal fluid from rat cisterna magna. Journal of Neuroscience Methods. 352, 109085 (2021).
- Zhao, Y., Yang, Y., Wang, D. X., Wang, J., Gao, W. Y. Cerebrospinal fluid amino acid metabolite signatures of diabetic cognitive dysfunction based on targeted mass spectrometry. Journal of Alzheimer's Disease. 86 (4), 1655-1665 (2022).
- Lim, N. K., et al. An improved method for collection of cerebrospinal fluid from anesthetized mice. Journal of Visualized Experiments. (133), e56774 (2018).
- Hendrickx, S., et al. A sensitive capillary LC-UV method for the simultaneous analysis of olanzapine, chlorpromazine and their FMO-mediated N-oxidation products in brain microdialysates. Talanta. 162, 268-277 (2017).
- Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S.
- Hammarlund-Udenaes, M. Microdialysis as an important technique in systems pharmacology-a historical and methodological review. The AAPS Journal. 19 (5), 1294-1303 (2017).
- Anderzhanova, E., Wotjak, C. T. Brain microdialysis and its applications in experimental neurochemistry. Cell and Tissue Research. 354 (1), 27-39 (2013).
- Mohammadi, A., Rashidi, E., Amooeian, V. G. Brain, blood, cerebrospinal fluid, and serum biomarkers in schizophrenia. Psychiatry Research. 265, 25-38 (2018).
- Lashley, T., et al. Molecular biomarkers of Alzheimer's disease: progress and prospects. Disease Models & Mechanisms. 11 (5), 031781 (2018).
- Kawata, K., Tierney, R., Langford, D. Blood and cerebrospinal fluid biomarkers. Handbook of Clinical Neurology. 158, 217-233 (2018).
- Zhao, Q. P., et al. Protective effects of dehydrocostuslactone on rat hippocampal slice injury induced by oxygen-glucose deprivation/reoxygenation. International Journal of Molecular Medicine. 42 (2), 1190-1198 (2018).
- Wang, X. B. Protective effects of dehydrocostuslactone on oxygen-glucose deprivation injury in rat hippocampal slices. , Ningxia Medical University. Master's thesis (2017).
- Coimbra-Costa, D., Alva, N., Duran, M., Carbonell, T., Rama, R. Oxidative stress and apoptosis after acute respiratory hypoxia and reoxygenation in rat brain. Redox Biology. 12, 216-225 (2017).
- Liu, H. Y., Chou, K. H., Chen, W. T.
- Toda, T., Parylak, S. L., Linker, S. B., Gage, F. H. The role of adult hippocampal neurogenesis in brain health and disease. Molecular Psychiatry. 24 (1), 67-87 (2019).
- Wang, P., Lo Cascio, F., Gao, J., Kayed, R., Huang, X. F., F, X. Binding and neurotoxicity mitigation of toxic tau oligomers by synthetic heparin like oligosaccharides. Chemical Communications. 54 (72), 10120-10123 (2018).
- Han, J. Y., Li, Q., Ma, Z. Z., Fan, J. Y. Effects and mechanisms of compound Chinese medicine and major ingredients on microcirculatory dysfunction and organ injury induced by ischemia/reperfusion. Pharmacology & Therapeutics. 177, 146-173 (2017).
- Peng, T. M., et al. Anti-inflammatory effects of traditional Chinese medicines on preclinical in vivo models of brain ischemia-reperfusion-injury: Prospects for neuroprotective drug discovery and therapy. Frontiers in Pharmacology. 10, 204 (2019).
- König, M., Thinnes, A., Klein, J. Microdialysis and its use in behavioural studies: Focus on acetylcholine. Journal of Neuroscience Methods. 300, 206-215 (2018).
- Liu, M. Z., Wang, P., Yu, X. M., Dong, G. C., Yue, J. Intracerebral microdialysis coupled to LC-MS/MS for the determination tramadol and its major pharmacologically active metabolite O-desmethyltramadol in rat brain microdialysates. Drug Testing and Analysis. 9 (8), 1243-1250 (2017).
- de Lima Oliveira, M., et al. Cerebral microdialysis in traumatic brain injury and subarachnoid hemorrhage: state of the art. Neurocritical Care. 21 (1), 152-162 (2014).
- Amiridze, N., Dang, Y., Brown, O. R. Hydroxyl radicals detected via brain microdialysis in rats breathing air and during hyperbaric oxygen convulsions. Redox Report. 4 (4), 165-170 (1999).
- Chang, H. Y., Morrow, K., Bonacquisti, E., Zhang, W., Shah, D. K. Antibody pharmacokinetics in rat brain determined using microdialysis. MABS. 10 (6), 843-853 (2018).
- Wan, H. Y., et al. Pharmacokinetics of seven major active components of Mahuang decoction in rat blood and brain by LC-MS/MS coupled to microdialysis sampling. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 393 (8), 1559-1571 (2020).
- Zheng, H. Z., et al. Pharmacokinetic analysis of Huangqi Guizhi Wuwu decoction on blood and brain tissue in rats with normal and cerebral ischemia-reperfusion Injury by microdialysis with HPLC-MS/MS. Drug Design Development and Therapy. 14, 2877-2888 (2020).
- Bongaerts, J., et al. Sensitive targeted methods for brain metabolomic studies in microdialysis samples. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 161, 192-205 (2018).
- Zhang, Y. Q., Jiang, N., Yetisen, A. K.
