Summary
आंशिक साइटिक तंत्रिका बंधाव लंबे समय तक चलने वाले क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करता है, जो थर्मल और यांत्रिक उत्तेजनाओं के लिए अतिरंजित प्रतिक्रियाओं की विशेषता है। न्यूरोपैथिक दर्द के इस माउस मॉडल का उपयोग आमतौर पर दर्द प्रबंधन के लिए अभिनव उपचारों का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। यह लेख मानकीकरण और प्रजनन क्षमता में सुधार के लिए शल्य चिकित्सा प्रक्रिया का विस्तार से वर्णन करता है।
Abstract
पुराने दर्द का प्रबंधन आज तक चुनौतीपूर्ण बना हुआ है, और वर्तमान उपचार सहिष्णुता और लत सहित प्रतिकूल प्रभावों से जुड़े हैं। क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द सोमाटोसेंसरी सिस्टम में घावों या बीमारियों के परिणामस्वरूप होता है। कम दुष्प्रभावों के साथ संभावित उपचारों की जांच करने के लिए, पशु दर्द मॉडल प्रीक्लिनिकल अध्ययनों में स्वर्ण मानक हैं। इसलिए, अभिनव उपचारों के विकास और सत्यापन के लिए अच्छी तरह से विशेषता और अच्छी तरह से वर्णित मॉडल महत्वपूर्ण हैं।
साइटिक तंत्रिका (पीएसएल) का आंशिक बंधाव एक ऐसी प्रक्रिया है जो चूहों में पुरानी न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करती है, जो यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलता, चल रहे दर्द और अंग के तापमान में परिवर्तन की विशेषता है, जिससे यह मॉडल न्यूरोपैथिक दर्द का अध्ययन करने के लिए एक बढ़िया फिट है। पीएसएल न्यूरोपैथिक दर्द का अध्ययन करने के लिए एक लाभप्रद मॉडल है क्योंकि यह न्यूरोपैथिक दर्द के साथ मनुष्यों में देखे गए कई लक्षणों को पुन: उत्पन्न करता है। इसके अलावा, शल्य चिकित्सा प्रक्रिया प्रदर्शन करने के लिए अपेक्षाकृत तेज और सरल है। एक अंग का एकतरफा पीएसएल मस्तिष्क और विपरीत पंजे के बीच तुलना के साथ-साथ केंद्रीय संवेदीकरण के मूल्यांकन की अनुमति देता है।
क्रोनिक न्यूरोपैथिक अतिसंवेदनशीलता को प्रेरित करने के लिए, 9-0 गैर-अवशोषित नायलॉन धागे का उपयोग साइटिक तंत्रिका के पृष्ठीय तीसरे हिस्से को हटाने के लिए किया जाता है। यह लेख शल्य चिकित्सा प्रक्रिया का वर्णन करता है और कई सामान्य रूप से उपयोग किए जाने वाले व्यवहार परीक्षणों के माध्यम से पुरानी न्यूरोपैथिक दर्द के विकास की विशेषता है। चूंकि पुराने दर्द के इलाज के लिए अब अभिनव उपचारों की अधिकता की जांच की जा रही है, यह लेख मानकीकरण के लिए महत्वपूर्ण अवधारणाएं और न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करने के लिए आवश्यक सर्जरी का सटीक विवरण प्रदान करता है।
Introduction
क्रोनिक दर्द दुनिया भर में एक महत्वपूर्ण स्वास्थ्य सेवा मुद्दा है और संयुक्त राज्य अमेरिका में सबसे महंगी स्वास्थ्य समस्याओं में से एक है। क्रोनिक दर्द को बेहतर ढंग से प्रबंधित किया जाता है जब औषधीय और गैर-औषधीय तौर-तरीकों दोनों का उपयोग बहु-विषयक फैशन1 में किया जाता है। पुराने दर्द का प्रबंधन चुनौतीपूर्ण है और, कुछ मामलों में, दर्द का पर्याप्त रूप से इलाज नहीं करता है। इसलिए, पुराने दर्द प्रबंधन में सुधार के लिए नए और पूरक तरीकों की आवश्यकता होती है, और अभिनव उपचारों की जांच के लिए पशु मॉडल महत्वपूर्ण हैं।
क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द सोमाटोसेंसरी सिस्टम में घावों या बीमारियों के परिणामस्वरूप होता है, जिसमें मधुमेह, संक्रमण, तंत्रिका संपीड़न या ऑटोइम्यून रोगशामिल हैं। न्यूरोपैथिक दर्द परिधीय और केंद्रीय संवेदीकरण तंत्र दोनों पर निर्भर करता है और नसों के घाव से उत्पन्न होता है। इस दर्द को स्पर्श- और थर्मल-इवोकेटेड हाइपरलेगेसिया और एलोडोनिया, चल रहे दर्द और प्रभावित अंग के तापमान में परिवर्तन दोनों की विशेषता हो सकतीहै। तंत्र को बेहतर ढंग से समझने और नए उपचारों को आगे बढ़ाने के लिए, न्यूरोपैथिक दर्द के लक्षणों और कारणों की नकल करने के लिए कृन्तकों में कई मॉडल विकसित किए गएहैं। उदाहरण के लिए, न्यूरोपैथिक दर्द को कीमोथेरेपी एजेंट इंजेक्शन, स्पाइनल नर्व लिगेशन (एसएनएल), साइटिक तंत्रिका की पुरानी कसना चोट (सीसीआई), पीएसएल, बची हुई तंत्रिका चोट, साइटिक तंत्रिका ट्रांससेक्शन और साइटिक तंत्रिका ट्राइसेक्शन 6 के साथ प्रेरितकिया जा सकता है। विशेष रूप से, साइटिक तंत्रिका का बंधाव मनुष्यों में देखे गए न्यूरोपैथिक दर्द की कई विशेषताओं को पुन: उत्पन्न करता है, जैसे कि यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलता, या प्रभावित अंग के तापमान में परिवर्तन, जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम (सीआरपीएस) 7 की विशेषता। इस प्रकार, यह मॉडल सीआरपीएस या किसी अन्य तंत्रिका चोट स्नेह के अध्ययन के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है जो पुरानी न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करता है। मॉडल को पहली बार 19908 में सेल्टज़र द्वारा विकसित किया गया था, और व्यापक रूप से दर्द अध्ययन में नए एनाल्जेसिक यौगिकों की जांच करने या पुराने दर्द 9,10,11,12,13 के संज्ञानात्मक प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किया जाता है। मॉडल उच्च प्रजनन क्षमता प्रस्तुत करता है, और आंशिक बंधाव परिधीय उत्तेजनाओं के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं को संरक्षित करताहै।
वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले कई मॉडलों में पीएसएल में कमियां नहीं देखी गई हैं। सीसीआई मॉडल में प्रत्येक जानवर के बीच चोट की बहुत अधिक परिवर्तनशीलता होती है, जो कॉन्स्ट्रिक्टर की कठोरता पर निर्भर करती है, और ऑटोटॉमी हिंद पंजे के अंकों को बदल देती है जिससे मॉडल व्यवहार विश्लेषण के लिए अनुपयुक्त होजाता है। एसएनएल मॉडल एक अधिक जटिल और लंबी सर्जरी है जिसके लिए न केवल उन्नत तकनीकी कौशल की आवश्यकता होती है, बल्कि गंभीर मोटर घाटे का उच्च जोखिम भी होताहै। ये कमियां पीएसएल मॉडल में नहीं देखी जाती हैं। प्रजनन क्षमता में आसानी, सर्जरी की छोटी अवधि, और मोटर घाटे का कम जोखिम पोस्टऑपरेटिव रूप से देखा गया, इस मॉडल को परिधीय न्यूरोपैथिक दर्द 8,14 का अध्ययन करने के लिए मूल्यवान बनाता है। फिर भी, आंशिक बंधाव प्रक्रिया में प्रयोगकर्ताओं के बीच परिवर्तनशीलता हो सकती है, जिसके परिणामस्वरूप लिगेटेड तंत्रिका तंतुओं की संख्या में कम स्थिरता होती है। इस प्रकार, अध्ययनों के बीच प्रजनन क्षमता बढ़ाने के लिए सर्जरी का विवरण प्रस्तुत करना महत्वपूर्ण है।
क्रोनिक न्यूरोपैथी को प्रेरित करने के लिए, 9-0 गैर-अवशोषित नायलॉन सीवन का उपयोग साइटिक तंत्रिका की चौड़ाई के एक तिहाई को हटाने के लिए किया जाता है। सर्जरी के बाद, थर्मल और यांत्रिक उत्तेजनाओं की प्रतिक्रियाओं को अतिरंजित किया जाता है, जो दिन 1 से शुरू होता है और 50 दिनों से अधिक समय तकचलता है। यहां, थर्मल और मैकेनिकल संवेदनशीलता दोनों का मूल्यांकन 28 दिनों में हरग्रीव्स, हॉट प्लेट और वॉन फ्रे फिलामेंट परीक्षणों का उपयोग करके किया गया था। सभी व्यवहार संबंधी परखों ने लंबे समय तक चलने वाली अतिसंवेदनशीलता की स्थिरता का प्रदर्शन किया। इस मॉडल को मॉर्फिन और इबुप्रोफेन दोनों के खुराक-निर्भर प्रभावों के लिए दिखाया गया है, यह पुष्टि करते हुए कि यह प्रीक्लिनिकल दर्द अध्ययनों के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है। विशेष रूप से, यह लेख एक अद्वितीय हस्तनिर्मित ग्लास टूल के निर्देशों का वर्णन करता है, जिसे "तंत्रिका ग्लास हुक" कहा जाता है। इस उपकरण का उपयोग तंत्रिका में हेरफेर करने और सर्जरी के दौरान अनपेक्षित अतिरिक्त तंत्रिका चोट को रोकने के लिए फोर्सप्स के स्थान पर किया जाता है।
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Protocol
सभी प्रक्रियाओं को एरिज़ोना विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच प्रकाशन संख्या 80-23, 1966) के प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के लिए दिशानिर्देशों के अनुरूप थे। रोगज़नक़-मुक्त, वयस्क C57Bl6/ J चूहों (परीक्षण में वजन: 22-28 ग्राम) को 12 घंटे के प्रकाश / अंधेरे चक्र पर जलवायु-नियंत्रित कमरों में मानक विवेरियम माउस पिंजरों (प्रति पिंजरे पांच चूहे) में रखा गया था और उन्हें भोजन और पानी तक पहुंच की अनुमति दी गई थी। सभी व्यवहार प्रयोगों को उपचार की स्थिति से अंधे प्रयोगकर्ताओं द्वारा आयोजित किया गया था।
1. बेसलाइन: यांत्रिक संवेदनशीलता का माप
- चूहों के आगमन पर, उन्हें 1 सप्ताह के लिए पशु सुविधा में रहने की अनुमति दें। फिर, जानवरों को ≥7 दिनों के लिए प्रयोगकर्ता हैंडलिंग के लिए आदत डालें।
- चूहों को परीक्षण से पहले 1 घंटे के लिए वॉन फ्रे परीक्षण उपकरण में रखें, उन्हें स्पष्ट प्लेक्सीग्लास बक्से में, एक तार जाल पर, परीक्षण कक्ष के समान कमरे में रखकर- अधिमानतः आदत के दौरान कमरे में मौजूद प्रयोगकर्ता के साथ।
- पूरक तालिका एस 1 में वर्णित वॉन फ्रे फिलामेंट्स का उपयोग करके "अप-एंड-डाउन" विधि के माध्यम से बेसलाइन पंजा वापसी सीमा स्थापित करें, जो 3.61 (3.9 एमएन) फिलामेंट से शुरू होता है।
- कैलिब्रेटेड फाइन (वॉन फ्रे) मोनोफिलामेंट्स की एक श्रृंखला के साथ मिड-प्लांटर हिंद पंजे की जांच करने के लिए वापसी प्रतिक्रिया को मापें। निलंबित तार जाल पिंजरों में रखे गए जानवरों के पिछले पंजे के साथ पीएसएल की प्लांटर सतह पर प्रत्येक फिलामेंट को एक बार लंबवत रूप से लागू करें। "अप-एंड-डाउन" विधि15 का उपयोग करके यांत्रिक संवेदनशीलता का मूल्यांकन करें: फिलामेंट के आकार के अनुरूप, उत्तेजना शक्ति को क्रमिक रूप से बढ़ाकर या घटाकर वापसी सीमा निर्धारित करें। क्रमिक रूप से प्रत्येक फिलामेंट को एक बार लागू करें।
नोट: प्रयोगकर्ता को जानवरों के बीच लगातार परिणाम प्राप्त करने के लिए किसी भी फुटपैड को उत्तेजित करने से बचना चाहिए। - उदाहरण के लिए, यदि जानवर 3.61 फिलामेंट का जवाब नहीं देता है, तो मोटे 4.08 फिलामेंट (9.8 एमएन) का उपयोग करें (एक प्रतिक्रिया को प्रभावित पंजे की वापसी, हिलाने या चाटने के रूप में देखा जाता है); यदि जानवर ने पहली बार जवाब दिया, तो पतले 3.22 (1.6 एमएन) फिलामेंट का उपयोग करें। जानवर के पास क्रमशः सकारात्मक या नकारात्मक प्रतिक्रियाएं थीं या नहीं, इसके आधार पर या तो घटते या तेजी से मोटे फिलामेंट्स का उपयोग करना जारी रखें। पूरक तालिका S1 में प्रस्तुत डेटाशीट में नकारात्मक और सकारात्मक प्रतिक्रियाओं की रिपोर्ट करें। पहली सकारात्मक प्रतिक्रिया के बाद अलग-अलग फिलामेंट्स के साथ एक ही पंजा 4x का परीक्षण करें।
- कैलिब्रेटेड फाइन (वॉन फ्रे) मोनोफिलामेंट्स की एक श्रृंखला के साथ मिड-प्लांटर हिंद पंजे की जांच करने के लिए वापसी प्रतिक्रिया को मापें। निलंबित तार जाल पिंजरों में रखे गए जानवरों के पिछले पंजे के साथ पीएसएल की प्लांटर सतह पर प्रत्येक फिलामेंट को एक बार लंबवत रूप से लागू करें। "अप-एंड-डाउन" विधि15 का उपयोग करके यांत्रिक संवेदनशीलता का मूल्यांकन करें: फिलामेंट के आकार के अनुरूप, उत्तेजना शक्ति को क्रमिक रूप से बढ़ाकर या घटाकर वापसी सीमा निर्धारित करें। क्रमिक रूप से प्रत्येक फिलामेंट को एक बार लागू करें।
2. बेसलाइन: हारग्रीव्स परीक्षण का उपयोग करके थर्मल संवेदनशीलता का माप
- चूहों के आगमन पर, उन्हें 1 सप्ताह के लिए पशु सुविधा में रहने की अनुमति दें। फिर, जानवरों को ≥7 दिनों के लिए प्रयोगकर्ता हैंडलिंग के लिए आदत डालें।
- चूहों को परीक्षण से पहले 1 घंटे के लिए हरग्रीव्स परीक्षण उपकरण में रखें, उन्हें परीक्षण कक्ष के समान कमरे में रखकर- अधिमानतः आदत के दौरान कमरे में मौजूद प्रयोगकर्ता के साथ।
नोट: हार्ग्रीव्स परीक्षण के लिए आवश्यक है कि जानवर कुछ सेकंड के लिए स्थिर खड़ा रहे। चूहों के साथ, आदत एक सफल प्रयोग के लिए महत्वपूर्ण है। इस प्रकार, यदि चूहे आदत के 1 घंटे के बाद बहुत सक्रिय रहते हैं, तो उन्हें आवश्यकतानुसार लंबे समय तक अनुकूलन करने की अनुमति दें।- हार्ग्रीव्स एट अल.16 द्वारा वर्णित पंजे की वापसी विलंबता निर्धारित करें। एक स्पष्ट प्लेक्सीग्लास प्लेट पर प्लेक्सीग्लास बाड़ों के भीतर चूहों को अनुकूलित करें।
- पीएसएल के बगल में पिछले पंजे की प्लांटर सतह पर एक उज्ज्वल गर्मी स्रोत (उच्च तीव्रता प्रोजेक्टर लैंप) पर ध्यान केंद्रित करें। लगभग 10 सेकंड की पंजे वापसी विलंबता की आधार रेखा प्राप्त करने के लिए गर्मी स्रोत की तीव्रता को समायोजित करें। फिर, प्रयोग के शेष भाग के लिए तीव्रता स्थिर रखें।
- पंजा वापस लिए जाने पर उत्तेजना और टाइमर को स्वचालित रूप से रोकने के लिए एक गति डिटेक्टर की प्रतीक्षा करें। ऊतक क्षति को रोकने के लिए 33.5 सेकंड के अधिकतम कटऑफ का उपयोग करें।
नोट: कट-ऑफ किसी भी अतिरिक्त त्वचा क्षति11,17,18 से बचने के लिए पिछले प्रयोगों और लेखों के आधार पर निर्धारित किया गया है। इस अध्ययन में उपयोग की जाने वाली तीव्रता के साथ, 33.5 कट-ऑफ है, जो हरग्रीव्स तंत्र का उपयोग करके 30 (50 डब्ल्यू) की उत्तेजना तीव्रता के अनुरूप है। देखा गया व्यवहार एक प्रतिवर्ती व्यवहार है, स्वैच्छिक नहीं। - हरग्रीव्स उपकरण का उपयोग करके बेसलाइन पंजा वापसी विलंब स्थापित करें और पीएसएनएल के पिछले पंजे की प्लांटर सतह को लक्षित करें। थर्मल उत्तेजना और रिकॉर्ड वापसी विलंबता शुरू करें। गर्मी उत्तेजना के तापमान को प्रभावित करने से बचने के लिए, परीक्षणों के दौरान किसी भी मूत्र को साफ करें।
3. बेसलाइन: हॉट प्लेट टेस्ट का उपयोग करके थर्मल संवेदनशीलता का माप
- परीक्षण से पहले 1 घंटे के लिए जानवरों को परीक्षण कक्ष में रखें।
नोट: चूंकि कमरे का तापमान महत्वपूर्ण है और हॉट प्लेट परीक्षण की प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकता है, सुनिश्चित करें कि आदत अवधि के दौरान और परीक्षण अवधि के माध्यम से कमरे का तापमान लगातार 22 डिग्री सेल्सियस के आसपास है। - गर्म प्लेट को 52 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें, क्योंकि इस तापमान को आदर्श रूप से एक प्रतिकूल थर्मल प्रतिक्रिया19 प्राप्त करने के लिए दिखाया गया है।
- परीक्षण कक्ष में जानवर को रखें और एक क्रोनोमीटर शुरू करें।
- नोसिफेंसिव व्यवहार (यानी, पंजे की वापसी, चाटना, हिलाना) का निरीक्षण करें। चूंकि पीएसएल सर्जरी हिंदलिम्ब को प्रभावित करती है, इसलिए अग्रभागों (विशेष रूप से फोरलिम्ब चाटना) में देखे गए किसी भी व्यवहार की उपेक्षा करें।
- जैसे ही नोसिफेंसिव व्यवहार देखा जाता है, क्रोनोमीटर को बंद कर दें।
- कक्ष से जानवर को हटा दें और इस व्यवहार के लिए विलंबता रिकॉर्ड करें।
नोट: ऊतक क्षति को रोकने के लिए अधिकतम 30 सेकंड के बाद जानवरों को कक्ष से हटा दें। इसके अतिरिक्त, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि देखा गया व्यवहार एक रिफ्लेक्स व्यवहार है, न कि स्वैच्छिक। - गंध के व्यवहार प्रभाव को कम करने के लिए जानवरों के बीच 70% इथेनॉल के साथ परीक्षण कक्ष को साफ करें। गर्मी उत्तेजना के तापमान को प्रभावित करने से बचने के लिए, परीक्षण किए गए प्रत्येक जानवर के बीच किसी भी मूत्र के उपकरण को साफ करें।
- परिणामों की पुष्टि करने के लिए, जानवरों का परीक्षण किए जाने के बाद समीक्षा के लिए परीक्षण के दौरान हॉट प्लेट चैंबर में जानवरों के वीडियो रिकॉर्ड करें।
नोट: विलंब की मात्रा निर्धारित करने के लिए वीडियो समीक्षा का उपयोग करके, प्रयोगकर्ता बार-बार परीक्षण का निरीक्षण कर सकता है और वास्तविक समय के अवलोकन के दौरान छूट गए व्यवहारों का बारीकी से विश्लेषण कर सकता है।
4. प्रीऑपरेटिव तैयारी
नोट: सुनिश्चित करें कि सर्जरी के बाद चूहों को ठीक करने के लिए साफ पिंजरे उपलब्ध हैं। 70% इथेनॉल के साथ सर्जिकल क्षेत्र को साफ करें, 70% इथेनॉल के साथ हाथों को कीटाणुरहित करें, बाँझ दस्ताने का उपयोग करें, उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) (लैब कोट, हेयर नेट, जूता कवर) पहनें, और सर्जरी के दौरान बाँझ तकनीकों का अभ्यास करें।
- उपकरण (पूरक चित्रा एस 1) और अतिरिक्त संसाधनों (धुंध) को पहले से ही ऑटोक्लेव करके सर्जरी में उपयोग किया जाना चाहिए।
- वाष्पशील आइसोफ्लुरेन का उपयोग करके संज्ञाहरण को प्रेरित करें और सर्जिकल विमान को बनाए रखने के लिए आवश्यकतानुसार समायोजित करें। सुनिश्चित करें कि ऑक्सीजन एक उचित प्रवाह दर पर है।
- यह सुनिश्चित करने के लिए कि जानवर एनेस्थेटाइज्ड है, पंजे के रिफ्लेक्स की अनुपस्थिति सुनिश्चित करने के लिए चिमटी के साथ पिछले पंजे पर पैर की उंगलियों को चुटकी लें और स्नेहन नेत्र मरहम लगाने से पहले कॉर्नियल ब्लिंक रिफ्लेक्स की जांच करें।
नोट: इस अध्ययन में एनाल्जेसिक की पेशकश नहीं की जा सकती है क्योंकि वे विश्लेषण किए जाने वाले दर्द मार्ग को बदल सकते हैं या यहां तक कि दर्द अनुसंधानलक्ष्यों 20,21,22 के अनुसार मापा जा रहे व्यवहार को बेअसर और अमान्य कर सकते हैं। - यह चुनने पर कि किस तरफ सर्जरी करनी है (बाईं ओर यहां प्रदर्शित किया गया है), जानवर के पिछले पैर को जांघ क्षेत्र के चारों ओर, पेटेला की ओर, कूल्हे की ओर और फीमर के ऊपर बेहतर ढंग से शेव करें। क्लोरहेक्सिडाइन के साथ 3x को एक दिशा में तीन अलग-अलग धुंध के साथ पोंछें, गर्म बाँझ खारा के साथ वैकल्पिक रूप से।
नोट: आगे बढ़ते हुए, सुनिश्चित करें कि स्थिरता बनाए रखने के लिए हर जानवर की सर्जरी एक ही तरफ की जाती है। - पैर को 10 सेमी x 10 सेमी बाँझ ड्रेप में बने स्लिट के माध्यम से फिसलें ताकि पसंद के पैर के चारों ओर एक बाँझ क्षेत्र बनाया जा सके।
5. सर्जिकल प्रक्रिया
- ठीक सर्जिकल कैंची (पूरक चित्रा एस 1 एफ) का उपयोग करके, जांघ के पार्श्व पहलू की मध्य रेखा में त्वचा का एक छोटा 2 मिमी कट बनाएं। प्रावरणी के माध्यम से टूटने के लिए एक गोलाकार गति में त्वचा के नीचे कैंची को स्लाइड करें और चीरा स्थान को बढ़ाते हुए एक निकासी बनाएं।
- बांधने वाले बल (पूरक चित्र एस 1 एच) का उपयोग करके, जांघ की मांसपेशियों में 1 सेमी गहरे 90 डिग्री कोण पर लंबवत रूप से एक तेज चीरा बनाएं।
- बारीक छोटी कैंची (पूरक चित्र एस 1 जी) को एक ही चीरा में डालें, 90 डिग्री कोण पर भी, और मांसपेशियों को अलग करने के लिए उन्हें धीरे से खोलें। जब तक साइटिक तंत्रिका की कल्पना न की जाए तब तक ऐसा करना जारी रखें।
- साइटिक तंत्रिका का पता लगाएं, जो चमकदार और पतली दिखाई दे सकती है, ऊर्ध्वाधर जांघ के समानांतर, कूल्हे से घुटने तक की दिशा में चल रही है। आगे बढ़ने से पहले शरीर से कैंची और बांधने वाले बल को हटा दें।
- तंत्रिका को नीचे से अलग करने के लिए अतिरिक्त महीन बल (पूरक चित्रा एस 1 डी) और तंत्रिका ग्लास हुक (पूरक चित्रा एस 1 ई) का उपयोग करें। सावधानीपूर्वक फीमर के ट्रॉचेंटर के पास एक साइट पर आसपास के संयोजी ऊतकों से तंत्रिका को मुक्त करें, जो कूल्हे के सबसे करीब है और घुटने से सबसे दूर है।
- तंत्रिका को ग्लास रॉड पर आराम करने दें और सुनिश्चित करें कि रॉड का अंत तंत्रिका को लुढ़कने से रोकता है।
- 9-0 नायलॉन सीवन का उपयोग करके साइटिक तंत्रिका की चौड़ाई के 1/3 को बांधने के लिए एक सर्जिकल गाँठ रखें, इससे पहले कि यह आम पेरोनेल, टिबियल और सुरलतंत्रिका शाखाओं में विभाजित हो।
नोट: शाखाएं तब होती हैं जब साइटिक तंत्रिका कूल्हे से दूर घुटने के नीचे जाती है। चूंकि तंत्रिका की इन तीन शाखाओं में तीन अलग-अलग संक्रमण होते हैं, इसलिए सभी पशु सर्जरी में समान तंत्रिका घाटे को सुनिश्चित करने के लिए शाखाओं से पहले सर्जिकल गाँठ रखना अनिवार्य है। - धागे को कसकर खींचते समय धागे को गाँठ के करीब रखने का ध्यान रखें, ताकि कांच की छड़ से तंत्रिका को फिसलने से बचने के लिए अत्यधिक बल के साथ तंत्रिका पर न खींचें और आगे खिंचाव की चोट से बचें।
- गाँठ पूरी होने के बाद कांच की छड़ से तंत्रिका को सावधानीपूर्वक हटा दें और इसे अलग मांसपेशियों के नीचे के स्तर पर मूल स्थान में वापस रखें।
- एक अवशोषक पॉलीग्लाइकोलिक 5-0 सीवन का उपयोग करके मांसपेशियों के चीरे को सीवन करें। अलग से, एक गैर-अवशोषित पॉलीप्रोपाइलीन 6-0 सीवन का उपयोग करके त्वचा को सीवन करें।
- सर्जरी और एनेस्थीसिया स्टॉप टाइम रिकॉर्ड करें। माउस को एक नए साफ पिंजरे में वापस करने से पहले, एक पुनर्प्राप्ति पिंजरे में अकेले जागने दें।
नोट: सर्जरी के दौरान, संज्ञाहरण के पर्याप्त रखरखाव की पुष्टि करने के लिए जानवर के पैर की उंगलियों को चुटकी लें और इसकी श्वास और शारीरिक छिड़काव (लाल, गुलाबी, पीला) की निगरानी करें। यदि श्वास काफी कम हो गया है या जानवर पीला दिखाई देता है, तो संज्ञाहरण प्रवाह को कम करने या ऑक्सीजन प्रवाह बढ़ाने पर विचार करें और जानवर को पुन: हाइड्रेट करने के लिए चमड़े के नीचे इंजेक्ट करने के लिए खारा से भरी सिरिंज तैयार करें। हर समय, जानवर को शरीर की गर्मी बनाए रखने के लिए इसके नीचे एक गर्मी स्रोत रखना चाहिए।
6. जानवरों को नियंत्रित करने के लिए शाम सर्जरी प्रक्रिया
- शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के चरण 5.1-5.11 का पालन करें; चरण 5.4-5.9 को बाहर रखें।
7. पोस्टसर्जिकल व्यवहार परीक्षण
नोट: सुनिश्चित करें कि प्रयोगकर्ता किसी भी उपचार के लिए अंधा है। क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द सर्जरी के बाद 2 सप्ताह में विकसित होगा, जिसके बाद रुचि के यौगिकों के प्रशासन के बाद व्यवहार परीक्षण किए जा सकते हैं।
- थर्मल और मैकेनिकल अतिसंवेदनशीलता और इसके संभावित उलटा दोनों का मूल्यांकन करने के लिए वॉन फ्रे, हार्ग्रीव्स या हॉट प्लेट टेस्ट का उपयोग करें।
- अध्ययन से किसी भी जानवर को हटा दें यदि यह संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा वर्णित समापन बिंदु मानदंडों को पूरा करता है।
- व्यवहार परीक्षण के अंत में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा वर्णित प्रक्रियाओं के बाद जानवरों को यूथेनाइज़ करें।
8. डेटा विश्लेषण
- वॉन फ्रे:
- डिक्सन की गैर-पैरामीट्रिक विधि का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण करें, जैसा कि चैप्लान और सहकर्मियों23 द्वारा वर्णित है, और डेटा को औसत वापसी सीमा के रूप में व्यक्त करें।
- संदर्भित सॉफ़्टवेयर के मुख्य पृष्ठ पर ( सामग्री की तालिका देखें), अध्ययन के लिए उपयोग किए गए सभी फिलामेंट्स का चयन करें (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31, और 4.56)। समूह पैनल में, अंतिम सिमुलेशन के अनुरूप फिलामेंट का चयन करें। रिक्त बॉक्स में, सकारात्मक (X) और नकारात्मक (o) प्रतिक्रियाओं की रिपोर्ट करें। प्रतिक्रियाओं के देखे गए पैटर्न के बाईं ओर बॉक्स में रिपोर्ट की गई थ्रेसहोल्ड लिखें।
नोट: पैटर्न और परिमाणीकरण का एक उदाहरण पूरक चित्रा एस 2 में प्रस्तुत किया गया है।
- संदर्भित सॉफ़्टवेयर के मुख्य पृष्ठ पर ( सामग्री की तालिका देखें), अध्ययन के लिए उपयोग किए गए सभी फिलामेंट्स का चयन करें (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31, और 4.56)। समूह पैनल में, अंतिम सिमुलेशन के अनुरूप फिलामेंट का चयन करें। रिक्त बॉक्स में, सकारात्मक (X) और नकारात्मक (o) प्रतिक्रियाओं की रिपोर्ट करें। प्रतिक्रियाओं के देखे गए पैटर्न के बाईं ओर बॉक्स में रिपोर्ट की गई थ्रेसहोल्ड लिखें।
- डिक्सन की गैर-पैरामीट्रिक विधि का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण करें, जैसा कि चैप्लान और सहकर्मियों23 द्वारा वर्णित है, और डेटा को औसत वापसी सीमा के रूप में व्यक्त करें।
- हरग्रीव्स और गर्म प्लेट:
- आगे के सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए स्प्रेडशीट में विलंब की रिपोर्ट करें।
- परिणामों को समय के कार्य के रूप में संवेदनशीलता (थ्रेसहोल्ड या लेटेंसी) के माध्य के रूप में प्लॉट करें।
9. तंत्रिका ग्लास हुक बनाने के निर्देश
नोट: इस प्रक्रिया के दौरान अग्नि सुरक्षा का अभ्यास करें। उचित सुरक्षा पहनें, जैसे कि गर्मी प्रतिरोधी दस्ताने या आवश्यकतानुसार चश्मा।
- बन्सन बर्नर चालू करें।
- कांच की रॉड (ए) के एक छोर को एक हाथ में आग से पकड़ें। जैसे ही यह ग्लास रॉड पिघलती है, रॉड ए पर पिघलने वाले ग्लास को निर्देशित करने और खींचने के लिए दूसरे हाथ में एक और ग्लास रॉड (बी) का उपयोग करें। ग्लास रॉड ए को आग से हटा दें और पिघले हुए हिस्से के अंत को स्वाभाविक रूप से एक छोटी गेंद का आकार बनाने के लिए अंदर की ओर लुढ़कने दें। इस आकार का मार्गदर्शन करने के लिए ग्लास रॉड बी का उपयोग करें।
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Representative Results
क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द को सी 57बीएल 6 / जे नर चूहों (चित्रा 1 ए) के साइटिक तंत्रिका के आंशिक बंधाव के माध्यम से प्रेरित किया गया था। यांत्रिक संवेदनशीलता का मूल्यांकन वॉन फ्रे फिलामेंट्स और "अप-एंड-डाउन" विधि का उपयोग करके किया गया था। गर्मी के लिए थर्मल संवेदनशीलता का मूल्यांकन हार्ग्रीव्स और हॉट प्लेट परीक्षणों का उपयोग करके किया गया था। सभी डेटा का विश्लेषण गीज़र-ग्रीनहाउस सुधार के साथ दो-तरफा एनोवा के साथ दोहराया गया था, ताकि समय के साथ जानवरों को पीएसएल सर्जरी के प्रभाव या मॉर्फिन और इबुप्रोफेन की विभिन्न खुराक के प्रभावों की तुलना की जा सके।
पीएसएल सर्जरी से गुजरने वाले चूहों ने 28 दिनों में शाम जानवरों की तुलना में यांत्रिक उत्तेजनाओं के लिए कम थ्रेसहोल्ड का प्रदर्शन किया (चित्रा 1 बी)। थर्मल अतिसंवेदनशीलता मूल्यांकन के साथ इसी तरह के परिणाम प्राप्त किए गए थे; चमकदार गर्मी उत्तेजना के संपर्क में आने के बाद पंजे की वापसी में देरी पीएसएल जानवरों (चित्रा 1 सी) में वृद्धि हुई थी, साथ ही जब जानवरों को 52 डिग्री सेल्सियस प्लेट पर रखा गया था तो वापसी विलंब भी बढ़ गया था (चित्रा 1 डी)।
क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द की स्थापना के बाद, सर्जरी के 14 दिन बाद, हमने मॉर्फिन या इबुप्रोफेन की विभिन्न खुराक के एंटीनोसिसेप्टिव प्रभावों का मूल्यांकन किया। चूहों को या तो खारा घोल या मॉर्फिन की दो अलग-अलग खुराक (1 और 5 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन दिया गया था। दोनों मॉर्फिन-इंजेक्शन समूहों ने पीएसएल-प्रेरित अतिसंवेदनशीलता का उलटा प्रदर्शन किया, जो 1 (1 मिलीग्राम / किग्रा) से 2 घंटे (5 मिलीग्राम / किग्रा) तक चला (चित्रा 2 ए)। मॉर्फिन के इंजेक्शन के 4 घंटे बाद यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता बेसलाइन पर लौट आई। जब इबुप्रोफेन (10 और 30 मिलीग्राम / किग्रा) की दो अलग-अलग खुराक चूहों को इंट्रापरिटोनियल रूप से प्रशासित की गई थी, तो परिणामों ने खारा-इंजेक्शन चूहों की तुलना में यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता में कमी का प्रदर्शन किया (चित्रा 2 बी)। इबुप्रोफेन के एंटीनोसिसेप्टिव प्रभाव 2 घंटे तक चले। कुल मिलाकर, परिणामों से पता चला है कि पीएसएल सर्जरी लंबे समय तक चलने वाले क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करती है। इसके अलावा, हम यह प्रदर्शित करने में सक्षम थे कि यह मॉडल एनाल्जेसिक की विभिन्न खुराक के प्रति संवेदनशील है।
चित्रा 1: साइटिक तंत्रिका के आंशिक बंधाव के कारण चूहों में लंबे समय तक चलने वाली थर्मल और यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता। पुरानी न्यूरोपैथिक दर्द (पीएसएलएल) के एक मॉडल में अतिसंवेदनशीलता के प्रेरण और दृढ़ता की जांच करने के लिए गर्मी के लिए थर्मल संवेदनशीलता (हार्ग्रीव्स और हॉट प्लेट टेस्ट) और वॉन फ्रे फिलामेंट्स के लिए यांत्रिक संवेदनशीलता का मूल्यांकन किया गया था। साइटिक तंत्रिका के बंधाव से पहले बेसलाइन मूल्यों को मापा गया था, और सर्जरी के बाद 28 दिनों में अतिसंवेदनशीलता का मूल्यांकन किया गया था। (ए) चित्रण साइटिक तंत्रिका के आंशिक बंधाव का प्रतिनिधित्व करता है। (बी) प्रत्येक समय बिंदु पर शाम और पीएसएल चूहों के बीच यांत्रिक वापसी सीमा की तुलना की गई थी। गीज़र-ग्रीनहाउस सुधार के साथ दो-तरफा एनोवा को बार-बार मापने से पीएसएल (एफ (1, 10) = 222.3, पी < 0.0001, एन = 5-7 प्रति स्थिति) का एक महत्वपूर्ण प्रभाव सामने आया। सिडक के कई तुलना परीक्षण ने 1 और 28 दिनों के बीच अतिसंवेदनशीलता की महत्वपूर्ण वृद्धि का प्रदर्शन किया (पी < 0.05)। (सी) हरग्रीव्स परीक्षण द्वारा मापी गई थर्मल निकासी विलंबता की तुलना शाम और पीएसएल चूहों के बीच की गई थी। गीज़र-ग्रीनहाउस सुधार के साथ दो-तरफा एनोवा को बार-बार मापने से पीएसएल (एफ (1, 8) = 113.8) का एक महत्वपूर्ण प्रभाव सामने आया; पी < 0.0001, एन = 4-6 प्रति स्थिति)। सिडक के कई तुलना परीक्षणों ने दिन 2 और 14 (पी < 0.05) में अतिसंवेदनशीलता की महत्वपूर्ण वृद्धि का प्रदर्शन किया। (डी) हॉट प्लेट टेस्ट द्वारा मापी गई थर्मल निकासी लेटेंसी की तुलना शाम और पीएसएल चूहों के बीच की गई थी। साधारण दो-तरफ़ा एनोवा ने पीएसएल (एफ (1, 32) = 19.10, पी = 0.0001, एन = 4-6 प्रति स्थिति) के एक महत्वपूर्ण प्रभाव का खुलासा किया। सिदक के कई तुलना परीक्षण ने पीएसएल सर्जरी (पी = 0.0026) के बाद 4 सप्ताह में गर्मी के प्रति संवेदनशीलता में महत्वपूर्ण वृद्धि का प्रदर्शन किया। डेटा को एसईएम संक्षिप्तीकरण ± माध्य के रूप में प्रस्तुत किया जाता है: पीएसएल = साइटिक तंत्रिका का आंशिक बंधाव; बीएल = बेसलाइन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: मॉर्फिन या इबुप्रोफेन के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा पीएसएल-प्रेरित यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता का खुराक-निर्भर उलट। पीएसएल के माउस मॉडल में मॉर्फिन या इबुप्रोफेन के संभावित एंटीनोसिसेप्टिव प्रभावों की जांच करने के लिए यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता (वॉन फ्रे फिलामेंट्स का उपयोग करके) का मूल्यांकन किया गया था। साइटिक तंत्रिका बंधाव से पहले बेसलाइन मान (प्री-पीएसएल) का अधिग्रहण किया गया था। क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द की स्थापना के बाद, दिन 14 जानवरों को पीएसएल-प्रेरित अतिसंवेदनशीलता (पोस्ट-पीएसएल) सुनिश्चित करने के लिए दूसरी बार बेसलाइन किया गया था। फिर, मॉर्फिन (1/5 मिलीग्राम / किग्रा) या इबुप्रोफेन (10/30 मिलीग्राम / किग्रा) की दो खुराक इंट्रापरिटोनियल रूप से इंजेक्ट की गई थीं। इंजेक्शन के बाद 4 घंटे में यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता के संभावित उलट का आकलन किया गया था। (ए) यांत्रिक वापसी सीमा की तुलना खारा स्थिति और मॉर्फिन की दो खुराक के बीच की गई थी। गीज़र-ग्रीनहाउस सुधार के साथ दो-तरफा एनोवा को बार-बार मापने से 1 मिलीग्राम / किग्रा मॉर्फिन (एफ (1, 11) = 11.16, पी = 0.0066, एन = 6-7 प्रति स्थिति) और 5 मिलीग्राम / किग्रा मॉर्फिन (एफ (1, 10) = 21.78, पी = 0.0009, एन = 6 प्रति स्थिति) का महत्वपूर्ण प्रभाव सामने आया। सिदक के कई तुलना परीक्षण ने दोनों खुराक के लिए इंजेक्शन के 1 घंटे बाद यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता की महत्वपूर्ण कमी का प्रदर्शन किया, लेकिन 2 घंटे (* पी < 0.05) पर 5 मिलीग्राम / किग्रा स्थिति के लिए केवल एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया। (बी) यांत्रिक वापसी सीमा की तुलना खारा स्थिति और इबुप्रोफेन की दो खुराक के बीच की गई थी। गीज़र-ग्रीनहाउस सुधार के साथ दो-तरफा एनोवा के बार-बार मापने से 10 मिलीग्राम / किग्रा इबुरोफेन (एफ (1, 11) = 7.788, पी = 0.0176, एन = 6-7 प्रति स्थिति) और 30 मिलीग्राम / किग्रा इबुप्रोफेन (एफ (1, 10) = 18.79, पी = 0.0015, एन = 6 प्रति स्थिति) का महत्वपूर्ण प्रभाव सामने आया। सिडक के कई तुलना परीक्षण ने दोनों खुराक (* पी < 0.05) के लिए इंजेक्शन के बाद यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता 1 और 2 घंटे की महत्वपूर्ण कमी का प्रदर्शन किया। डेटा को एसईएम संक्षिप्तीकरण ± माध्य के रूप में प्रस्तुत किया जाता है: पीएसएल = साइटिक तंत्रिका का आंशिक बंधाव; आईपी = इंट्रापरिटोनियल। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
पूरक चित्रा एस 1: सर्जिकल उपकरण। दो चित्र सर्जरी के लिए उपयोग किए जाने वाले विभिन्न उपकरणों को दर्शाते हैं। (ए) फाइन कैस्ट्रोविजो सुई धारक; (बी) कैस्ट्रोविजो सुई धारक; (सी) माइक्रो एडसन फोर्स; (डी) अतिरिक्त महीन ग्रेफ फोर्स; (ई) तंत्रिका ग्लास हुक; (एफ) ठीक कैंची (11.5 सेमी); (जी) बारीक कैंची (9 सेमी); (एच) बल बांधना; (I) आईरिस फोर्स। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्रा एस 2: वॉन फ्रे फिलामेंट परीक्षण द्वारा मापा गया पंजा वापसी प्रतिक्रियाओं का प्रतिनिधि पैटर्न। इस परीक्षण के लिए, माउस ने पहले तीन उत्तेजनाओं का जवाब नहीं दिया, लेकिन 4.56 फिलामेंट के साथ चौथी उत्तेजना पर अपना पंजा वापस ले लिया। सकारात्मक प्रतिक्रिया (एक्स) के बाद, एक पतले फिलामेंट (4.31) का उपयोग किया गया था, इसके बाद छोटे आकार के फिलामेंट्स का उपयोग किया गया था जब तक कि माउस ने किसी अन्य फिलामेंट का जवाब नहीं दिया (इस मामले में, 4.08)। प्रयोगकर्ता को प्रतिक्रिया (ओ) की अनुपस्थिति तक, एक-एक करके फिलामेंट्स के आकार को कम करना चाहिए। प्रतिक्रिया की अनुपस्थिति के बाद, प्रयोगकर्ता ने एक मोटे फिलामेंट का उपयोग किया जब तक कि उन्होंने सकारात्मक प्रतिक्रिया प्राप्त नहीं की और सकारात्मक प्रतिक्रिया के बाद उनका आकार कम हो गया (4.31 फिलामेंट के साथ यहां प्राप्त)। पहली सकारात्मक प्रतिक्रिया के बाद चार उत्तेजनाएं आयोजित की गईं; प्रत्येक उत्तेजना के कालानुक्रमिक पैटर्न को पैनल ए में लाल रंग में संख्याओं के साथ एनोटेट किया गया है। इस मामले में, फिलामेंट्स 2.44 से 3.22 का उपयोग कभी नहीं किया गया था क्योंकि जानवर ने 3.61 फिलामेंट के साथ सकारात्मक प्रतिक्रिया नहीं दिखाई थी। (बी) प्रतिक्रियाओं का पैटर्न तब एलोडिनिया सॉफ्टवेयर में भरा गया था, उसी क्रम में बताया गया था कि सफेद रंग में हाइलाइट किए गए बॉक्स में फिलामेंट्स (000xx0x0) लागू किए गए थे। परिणामी सीमा की गणना तब सॉफ्टवेयर (2.60839) द्वारा की गई थी। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक तालिका एस 1: वॉन फ्रे परीक्षण के लिए डेटा संग्रह पत्रक। यह तालिका प्रयोगकर्ताओं को वॉन फ्रे फिलामेंट्स का उपयोग करते समय प्रतिक्रियाओं के पैटर्न को भरने की अनुमति देती है। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
क्रोनिक दर्द उपचार के लिए अक्सर दीर्घकालिक दवा की आवश्यकता होती है, जिससे दर्द प्रबंधन चुनौतीपूर्ण हो जाता है। इस प्रकार, प्रीक्लिनिकल मॉडल औषधीय या गैर-औषधीय दृष्टिकोणों पर निर्भर अभिनव उपचारों के संभावित लाभों का मूल्यांकन करने के लिए एक आवश्यक उपकरण हैं। क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द के कई मॉडल विभिन्न शोधकर्ताओं के बीच शल्य चिकित्सा तकनीकों में बढ़ती परिवर्तनशीलता के कारण चुनौतियां लाते हैं, जिससे प्रजनन क्षमता कम हो जाती है। इस प्रकार, कई मॉडलों में नए उपचारों के संभावित एंटीनोसिसेप्टिव प्रभावों को चिह्नित करना आवश्यक है जो अच्छी तरह से विशेषता और मानकीकृत हैं।
यह रिपोर्ट दर्शाती है कि साइटिक तंत्रिका के आंशिक बंधाव के परिणामस्वरूप अपेक्षाकृत सस्ती विधियों का उपयोग करके चूहों में लंबे समय तक चलने वाले क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द का विकास होता है। पीएसएल थर्मल और यांत्रिक उत्तेजनाओं की प्रतिक्रियाओं को अतिरंजित करता है, और मॉडल खुराक-निर्भर तरीके से आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले एनाल्जेसिक के प्रशासन का जवाब देता है। इसलिए, पीएसएल मॉडल नई दवाओं के संभावित लाभों का मूल्यांकन करने के लिए एक सुविधाजनक और संवेदनशील मॉडल प्रतीत होता है। न्यूरोपैथिक दर्द की प्राथमिक विशेषताएं हाइपरलेगेसिया और एलोडोनिया हैं। यह रिपोर्ट दर्शाती है कि यांत्रिक एलोडोनिया और थर्मल हाइपरलेगेसिया कैसे प्रभावित होते हैं। हालांकि, यांत्रिक हाइपरलेगेसिया को मापा नहीं गया था। एलोडोनिया और हाइपरलेगेसिया के बीच ओवरलैप का एक बड़ा ग्रे क्षेत्र है। दोनों संवेदनाएं एक संवेदी उत्तेजना 24 के लिए सामान्य अतिसंवेदनशीलता की छतरी के नीचेआती हैं। इस प्रकार, उत्तेजित संवेदना को एक और सनसनी के रूप में माना जा सकता है, जैसे कि गर्मी जैसे ठंडे दर्द या जलन की भावना के रूप में स्पर्श। इसलिए, हाइपरलेगेसिया और एलोडोनिया को अक्सर अलग करना मुश्किल होता है, खासकर पशु दर्द मॉडल में।
पीएसएल मॉडल का उपयोग एनाल्जेसिक यौगिकों के प्रभाव, पुराने दर्द के अंतर्निहित तंत्र, या यहां तक कि लंबे समय तक चलने वाले न्यूरोपैथिक दर्द के संज्ञानात्मक प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए कई पुराने दर्द अध्ययनों में किया गया है। 70 दिनों तक यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता की दृढ़ता नई दवाओं के दीर्घकालिक प्रभावों के अध्ययन की अनुमति देतीहै। महत्वपूर्ण रूप से, व्यवहार परीक्षण के लिए इष्टतम अवधि में सर्जरी के बाद पहले, दूसरे और तीसरे सप्ताह शामिल हैं, एक बार क्रोनिक दर्द 8,11,26,27 स्थापित होने के बाद। एक दवा या गैर-औषधीय चिकित्सा की शक्ति और प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए, प्रयोगात्मक डिजाइन के आधार पर मॉर्फिन या इबुप्रोफेन जैसे सकारात्मक नियंत्रण उपचार पर विचार किया जाना चाहिए। टेल-फ्लिक टेस्ट के विपरीत, हॉट प्लेट टेस्ट पंजे पर एक उत्तेजना लागू करता है जो सुप्रास्पाइनलमार्गों 19 को एकीकृत करता है। हॉट प्लेट परीक्षण का व्यापक रूप से हाल के अध्ययनों में क्रोनिक न्यूरोपैथिक दर्द के मॉडल में दवा एंटीनोसिसेप्टिव गुणों को चिह्नित करने के लिए उपयोग किया गया है 19,28,29,30,31,32,33।
इस मॉडल का उपयोग उपन्यास गैर-ओपिओइड उपचारों को चिह्नित करने और न्यूरोटेंसिन रिसेप्टर टाइप 211,13 से जुड़े एक नए दर्द मार्ग की पहचान करने के लिए किया गया था। इसका उपयोग पुराने दर्द12 में ग्लाइसिनर्जिक मॉड्यूलेशन की भागीदारी और नींद और दर्द10 के चौराहे पर नए उपचारों और मार्गों के विकास को प्रदर्शित करने के लिए भी किया गया था। फिर भी, आज तक, किसी भी लेख ने वर्णनात्मक वीडियो के साथ पूरक सर्जरी का विस्तृत विवरण प्रस्तुत नहीं किया है।
पीएसएल और इसी तरह के मॉडल की एक आम आलोचना जानवरों के बीच न्यूरोपैथिक तंत्रिका चोट के कारण होने वाली क्षति की डिग्री की स्थिरता की विश्वसनीयताहै। यह लेख इस समस्या को हल करने के लिए एक विशेष तंत्रिका ग्लास हुक बनाने के लिए एक ग्लास रॉड को मैन्युअल रूप से पिघलाने और ढालने की प्रक्रिया का वर्णन करता है। अधिकांश पशु सर्जरी ठीक नसों या वाहिकाओं को लेने के लिए बल का उपयोग करती हैं। तंत्रिका ग्लास हुक उपकरण तंत्रिका को संभालने के लिए एक सुरक्षित, कम चोट-प्रवण विधि की अनुमति देता है। यद्यपि इस मॉडल का उद्देश्य तंत्रिका चोट बनाना है, लेकिन साइटिक तंत्रिका की चौड़ाई के एक तिहाई के माध्यम से रखी गई सीवन के कारण तंत्रिका को अतिरिक्त नुकसान से बचने के लिए समझदारी है। तंत्रिका ग्लास हुक तंत्रिका को आराम करने के लिए एक चिकनी, गैर-हानिकारक सतह है; इसके अतिरिक्त, अंत में गेंद / हुक पिक-अप और स्थिरीकरण में आसानी की अनुमति देता है। इसके अलावा, तंत्रिका को झुकाते समय, ऊपर वर्णित तकनीक (प्रोटोकॉल अनुभाग नोट 5.7) शरीर की गुहा के अंदर धागे को गहराई से रखने की सलाह देती है, जहां गाँठ दिखाई देगी। यह सीवन के अंत में टगिंग से बचता है और गाँठ को कसते समय तंत्रिका के निकटतम सीवन पर तनाव लगाने को बढ़ावा देता है। यह तकनीक अतिरिक्त खिंचाव की चोट को रोकती है यदि तंत्रिका को अनजाने में तंत्रिका ग्लास हुक से खींचा जाना था, गाँठ को कसने की प्रक्रिया में गुहा के बाहर की ओर। एक अतिरिक्त लाभ प्रारंभिक कटौती करने के लिए बारीक कैंची का उपयोग है। यह स्केलपेल ब्लेड के साथ किए गए बड़े कट के विपरीत, बहुत छोटी चीरा साइट और इस प्रकार तेजी से उपचार की अनुमति देता है।
इस आलेख में बताई गई विधियों की कुछ सीमाएँ भी हैं। पीएसएल मॉडल में पुराने दर्द काविकास जानवरों के लिंग से प्रभावित होता है। इसलिए, यह आवश्यक है कि शोध अध्ययन अपने विश्लेषण में दोनों लिंगों को शामिल करें। इस रिपोर्ट का उद्देश्य एक शल्य चिकित्सा प्रक्रिया पर ध्यान केंद्रित करना था और दर्द मॉडल के यौन द्विरूपता को चिह्नित नहीं किया गया था। यह उल्लेखनीय है कि हार्ग्रीव्स परीक्षण का उपयोग करके चूहों में थर्मल संवेदनशीलता का माप चुनौतीपूर्ण है; उत्तेजना लागू होने पर जानवरों को कुछ सेकंड के लिए एक छोटे से बाड़े में स्थिर खड़े रहने की आवश्यकता होती है। इस प्रकार, चूहों को प्लेक्सीग्लास बाड़े में आदत डालना सफल परिणाम प्राप्त करने में एक महत्वपूर्ण कारक है। उत्पन्न दर्द के मापन के लिए सावधानीपूर्वक प्रयोगकर्ता प्रशिक्षण की भी आवश्यकता होती है। थर्मल और यांत्रिक संवेदनशीलता, साथ ही अंग की कार्यक्षमता का मूल्यांकन करने के लिए दोनों उत्पन्न और सहज व्यवहार परीक्षणों की सिफारिश की जाती है। इसके अतिरिक्त, इस अध्ययन में, मॉर्फिन और इबुप्रोफेन का उपयोग एंटीनोसिसेप्टिव प्रभाव के लिए सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। इन दो दवाओं को चुना गया था क्योंकि वे आमतौर पर कई दर्द मॉडल में सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग किए जाते हैं और विभिन्न मॉडलों के बीच बेहतर तुलना की अनुमति देते हैं। फिर भी, यह उल्लेख करना महत्वपूर्ण है कि प्रीगैबलिन और गैबापेंटिन को अक्सर न्यूरोपैथिक दर्द के इलाज के लिए निर्धारित किया जाता है, और न्यूरोपैथिक दर्द प्रबंधन पर ध्यान केंद्रित करने वाले अध्ययनों में इन दवाओं को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में शामिल किया जाना चाहिए।
यह रिपोर्ट सटीकता के साथ पुरानी न्यूरोपैथिक दर्द के अध्ययन के लिए उपयोग की जाने वाली सर्जरी का वर्णन करती है। शोधकर्ताओं और प्रशिक्षुओं को इस माउस मॉडल के दृश्य विवरण से लाभ उठाने की अनुमति देने से पुरानी दर्द के तंत्र को समझने या अभिनव उपचारों के लक्षण वर्णन पर ध्यान केंद्रित करने वाली अनुसंधान परियोजनाओं के विकास में आसानी होगी। इसके अलावा, प्रजनन क्षमता में सुधार के लिए कई दर्द मॉडल का उपयोग आवश्यक है, और यह रिपोर्ट नई प्रयोगशालाओं में पीएसएल मॉडल के कार्यान्वयन को आसान बनाएगी।
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Disclosures
लेखकों के पास रिपोर्ट करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है। पांडुलिपि के लेखकों में से किसी को भी किसी अन्य तरीके से कोई पारिश्रमिक या कोई प्रतिपूर्ति या मानदेय नहीं मिला। लेखक इस अध्ययन से जुड़े किसी भी विक्रेता या दवा कंपनी से संबद्ध नहीं हैं।
Acknowledgments
इस शोध को नेशनल सेंटर फॉर कॉम्प्लिमेंटरी एंड इंटीग्रेटिव हेल्थ [R01AT009716, 2017] (M.M.I.), व्यापक क्रोनिक दर्द और व्यसन केंद्र-एरिज़ोना विश्वविद्यालय (M.M.I.), और एरिजोना विश्वविद्यालय, कॉलेज ऑफ मेडिसिन, टक्सन में चिकित्सा वैज्ञानिक प्रशिक्षण कार्यक्रम (MSTP) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5/0, FS-2, 30" Undyed PGA Braided Polyglycolic Acid Synthetic Absorbable Suture | CP Medical | 421A | https://cpmedical.com/suturesearch/product/421a-visorb-50-fs-2-30/ |
| 6/0, P-1, 18" Blue Polypropylene Monofilament Non-Absorbable Suture | CP Medical | 8697P | https://cpmedical.com/suturesearch/product/8697p-polypro-60-p-1-18/ |
| 9/0 (0.3 metric) Nylon Black Monofilament Suture | Crestpoint Ophthalmics | MANI 1407 | https://crestpointophthalmics.com/mani-1407-suture-trape-spatula-nylon-black-mono-box-of-12.html |
| Allodynia Software | National Instruments, LabView 2015 | Quantification of mean withdrawal thresholds (Von Frey data) | |
| C57Bl6/J mice | The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | 000664 | https://www.jax.org/strain/000664 |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Wound-Closure/Needle-Holders/Castroviejo-Needle-Holder/12565-14 |
| Cold Hot Plate Test | Bioseb | BIO-CHP | https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/563-cold-hot-plate-test.html |
| Elevated metal mesh stand for Von Frey | Bioseb | BIO-STD2-EVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1689-elevated-metal-mesh-stand-30-cm-height-to-fit-up-to-2-pvf-cages.html |
| Extra fine Graefe forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-curved-medium-point-general-purpose-forceps/16100110 |
| Fine Castroviejo needle holder | Simovision/Geuder | 17565 | https://simovision.com/assets/Uploads/Brochure-Geuder-Ophthalmic-Surgical-Instruments-EN2.pdf |
| Fine scissors (11.5 cm) | Fine Science Tools | 14558-11 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-11 |
| Fine scissors (9 cm) | Fine Science Tools | 14558-09 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-09 |
| Iris forceps | Fine Science Tools | 11064-07 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Fine-Forceps/Iris-Forceps/11064-07 |
| Micro Adson forceps | Fine Science Tools | 392487 | https://www.fishersci.com/shop/products/micro-adson-tissue-forceps-1x2-teeth-german-steel/13820072#?keyword=adson%20forceps |
| Modular holder cages for rats and mice | Bioseb | BIO-PVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1206-modular-holder-cages-for-rats-and-mice.html |
| Moretti/Effetre #240 Light Cobalt Blue glass rods 4 mm | Ebay | N/A | https://www.ebay.com/itm/402389491328?hash=item5db0485e80:g:agYAAOS w9CtfnIVJ&amdata=enc %3AAQAHAAAAwCoqvgWRo NTe5Vq8PWOgfE4ygWeW4tL k81J1AFu%2Fkcbsk6pxYtJi6 digE5TL9SzlgMzYUMNDr%2B dku2%2B%2FEvB1qXqFmebE 020SGs9LPDXLL5w21un7jrM0 9xfWYvIzBYQYh6FRWyUJngC uuA9Bkjb9lxtZoYlg5y6PyFR2P 34xFk5xaNC5ib65M1%2Fr%2F 4w2Iw45QqsSyXH2cuUKRom0 AGBoBaIr%2BbJw1VnlMjGuc9dtx 4fbPbqoBNSWjj3RbZPOPTYS8Q %3D%3D%7Ctkp%3ABk9SR4q6- 6LfYA |
| Plantar Test for Thermal Stimulation - Hargreaves Apparatus | Ugo Basile | 37570 | https://ugobasile.com/products/categories/pain-and-inflammation/plantar-test-for-thermal-stimulation |
| Touch-Test Sensory Evaluators, Set of 20 Monofilaments | North Coast Medical | NC12775-99 | https://www.ncmedical.com/products/touch-test-sensory-evaluators_1278.html |
| Tying forceps | Duckworth & Kent | 2-504ER8 | https://duckworth-and-kent.com/product/tying-forceps-9/ |
References
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