HPLC إلى جانب البصمات الكيميائية للتعرف على الأنماط المتعددة لتحديد أصالة ياسمين أرماندي كوليس
Summary
هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) ، إلى جانب التعرف على بصمات الأصابع الكيميائية متعددة الأنماط ، والتي توفر استراتيجية جديدة لتحديد الأصناف الأصلية من Clematidis Armandii Caulis وزناتها بشكل فعال.
Abstract
تم إنشاء طريقة لتحديد المواد الطبية الصينية والزناة ذات الصلة بها عن طريق أخذ Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong ، وهو دواء صيني تقليدي مستخدم عالميا) كمثال. تم تحليل ومقارنة عشر دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من الغش ذي الصلة بناء على بصمات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) جنبا إلى جنب مع القياسات الكيميائية ، بما في ذلك التحليل العنقودي (CA) ، وتحليل المكونات الرئيسية (PCA) ، وتحليل التمييز الجزئي المتعامد للمربعات الصغرى (OPLS-DA). بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد محتوى β-سيتوستيرول. تم إنشاء البصمة الكيميائية للتحكم في Chuanmutong ، وتم تحديد 12 قمة مشتركة. كان التشابه بين بصمة 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وبصمة التحكم 0.910-0.989 ، في حين أن تشابه خمس دفعات من الغش كان 0.133-0.720 فقط. استنادا إلى القمم الشائعة في مخطط الكروماتوجرام ، تم تصنيف 15 دفعة من العينات إلى ثلاثة مستويات محتوى بواسطة PCA ، وتم تجميعها في أربع فئات بواسطة CA ، مما حقق تمييزا واضحا بين Chuanmutong الأصلي والغش في Chuanmutong. علاوة على ذلك ، تم العثور على سبعة مكونات تفاضلية يمكنها تحديد Chuanmutong الأصلي والغش من Chuanmutong بشكل فعال من خلال OPLS-DA. كان محتوى β-سيتوستيرول من 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية 97.53-161.56 ميكروغرام / غرام ، في حين أن محتوى β-سيتوستيرول للدفعات الخمس من الغش يختلف اختلافا كبيرا ، من بينها محتوى β-سيتوستيرول من Clematis peterae Hand.-Mazz. وياسمين غوريانا روكسب. Var. finetii Rehd. وآخرون ويلس. كان أقل بكثير من الأصناف الأصلية من Chuanmutong. يوفر محتوى مكون مؤشر HPLC وطريقة التعرف على بصمات الأصابع الكيميائية متعددة الأنماط التي تم إنشاؤها في هذه الدراسة استراتيجية جديدة لتحديد المواد الطبية الصينية الأصلية والغش ذي الصلة بشكل فعال.
Introduction
تشوانموتونغ ، كوليس جاف من ياسمين أرماندي فرانش. أو Clematis montana Buch.-Ham. ، هو دواء صيني تقليدي شائع الاستخدام في العيادات1،2،3. يتم استخدامه لعلاج مشاكل المسالك البولية ، وذمة ، وتقرحات على اللسان والفم ، وانخفاض إفراز الحليب ، وتصلب المفاصل ، وآلام العضلات الناجمة عن الحرارة الرطبة4. تم الحصول على Chuanmutong دائما من الأصناف البرية ، الموزعة بشكل رئيسي في جنوب غرب الصين ، وخاصة في سيتشوان ، حيث يمكن العثور على أفضل جودة 5,6. من الصعب التمييز بين الأصناف الأصيلة والغش المرتبط ارتباطا وثيقا بسبب خصائصها المتشابهة7،8،9،10. ينص معيار جودة Chuanmutong في إصدار 2020 من دستور الأدوية الصيني فقط على الخصائص والتعريف المجهري وتحديد الطبقة الرقيقة دون تحديد المحتوى ، والذي لا يمكنه تحديد الغش بشكل فعال ، وبالتالي له مخاطر محتملة. علاوة على ذلك ، هناك عدد قليل من التقارير التي تقارن وتحدد Chuanmutong والنباتات ذات الصلة. وبالتالي ، فإن طريقة مراقبة الجودة لضمان أصالة Chuanmutong تستحق مزيدا من الدراسة.
تتكون المكونات الكيميائية ل Chuanmutong بشكل أساسي من ترايتيربينويدس خماسي الحلقات من نوع الأوليانان وجليكوسيدات وفلافونويد وأحماض عضوية11،12،13،14. من بينها ، حمض الأوليانوليك ، β-سيتوستيرول ، ستيغماستيرول ، وإرغوستيرول لها تأثيرات مدرة للبول ذات شدة مختلفة ، والتي قد تكون مواد دوائية محتملة لتعزيز إدرار البول وتخفيف بيلة الخنق15,16. يتم الحصول على البصمات الكيميائية عن طريق فصل واكتشاف العديد من المكونات الكيميائية الموجودة في العينات بواسطة كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) ، كروماتوغرافيا الغاز (GC) ، إلخ. اعتماد أساليب التحليل الإحصائي المناسبة لتحليل خصائص Chuanmutong يمكن أن تحدد مراقبة الجودة الشاملة والتحديد العلمي للطب الصيني التقليدي17،18،19.
في هذه الدراسة ، تم جمع 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من الغش. تمت مقارنة جودتها وتحليلها بواسطة طريقة بصمة HPLC جنبا إلى جنب مع التعرف على الأنماط المتعددة ، بما في ذلك التحليل العنقودي (CA) ، وتحليل المكون الرئيسي (PCA) ، وتحليل التمييز الجزئي المتعامد للمربعات الصغرى (OPLS-CA) ، وتحديد محتوى المكون الدوائي. يحدد هذا البروتوكول طريقة لتحديد الأصناف الأصلية ذات الخصوصية العالية ، وهي استراتيجية جديدة للتحديد العلمي للأصناف الأصلية والغش للمواد الطبية الصينية.
Protocol
Representative Results
Discussion
يعد جمع العينات للبحث الخطوة الرئيسية الأولى لبناء التعرف على الأنماط المتعددة في تحديد أصالة المواد الطبية الصينية. من خلال أبحاث السوق ، وجدنا أن سيتشوان يان وليانغشان وليشان هي مناطق الإنتاج الرئيسية للموارد البرية في تشوانموتونغ. الأصناف ذات الصلة من نفس الجنس لها أيضا نفس التوزيع ا?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم هذا العمل من قبل مشروع إدارة الطب الصيني التقليدي في سيتشوان (رقم 2020JC0088 ، رقم 2021MS203).
Materials
| Acetic acid | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017381038 | |
| Acetonitrile | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD5243V | |
| β-Sitosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China | 20210201 | |
| C18 column | Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China | Welch Ultimate LP | |
| Chuanmutong | Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China | 19020103 | CMT-1 |
| Chuanmutong | Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200701 | CMT-2 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200701 | CMT-3 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200901 | CMT-4 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210701 | CMT-5 |
| Chuanmutong | Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210401 | CMT-6 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200901 | CMT-7 |
| Chuanmutong | Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China | 201201 | CMT-8 |
| Chuanmutong | Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China | 201001 | CMT-9 |
| Chuanmutong | Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210501 | CMT-10 |
| Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang | Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China | – | CC |
| Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. | Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China | – | DC |
| Clematis peterae Hand.-Mazz. | Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China | – | DE |
| Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils | Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | – | XS |
| Clematis finetiana Levl. et Vaniot. | Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | – | SMT |
| Electronic balance | Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China | FA1204 | |
| Ergosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China | 20210201 | |
| Ethanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2021112602 | |
| Ethyl acetate | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017042043 | |
| Formic acid | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2016062901 | |
| High performance liquid chromatography | Agilent, USA. | 1260 | |
| IBM SPSS Statistics version 26.0 | International Business Machines Corporation, USA | – | |
| Methanol | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD6409V | |
| Methanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 202010302 | |
| n-butyl alcohol | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020071047 | |
| Petroleum ether | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020090125 | |
| Phosphoric acid | Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 20200110 | |
| SESCF-TCM version 2012 | National Pharmacopoeia Commission, China | – | http://114.247.108.158:8888/login |
| Stigmasterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China | 20210201 | |
| Trichloromethane | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China | 20200214 | |
| Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047 | Umetrics, Sweden | – | https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download |
| Ultrapure water machine | Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China | UPH-II-10T | |
| Ultrasonic cleaner | Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China | KH3200E |
References
- Chen, C. R. . Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).
- Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).
- Pan, L. L., et al. a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway. Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of The People’s Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).
- Wang, D. G., Guo, J. L. Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii. Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).
- Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).
- Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. Study on the identification of Caulis Clematidis Armandii. Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).
- Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).
- Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii. Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).
- Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence. Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).
- Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham. Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).
- Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. Studies on four compounds from Clematis Montana. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).
- Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I). Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).
- Li, X., et al. Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review. Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).
- Ye, X., et al. Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats. China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).
- Kuang, Y., et al. Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).
- Li, Y., et al. Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).
- Li, Y., et al. Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).
- Li, H. H., et al. Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition. Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).
- Dong, L. J., et al. Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii. Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).
- Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. Morphological and histological identification of Chuanmutong. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).
- Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. Quality Research of Chuanmutong. Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).
- Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. Research on the Quality Standard of Chuanmutong. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).
- Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).
- Qing, L. S., et al. Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).
- Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS. Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).
