تقييم الأنشطة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية والأسطح ذات البنية النانوية في المختبر
Summary
نقدم أربع طرق لتقييم الأنشطة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية والأسطح ذات البنية النانوية باستخدام تقنيات المختبر . يمكن تكييف هذه الطرق لدراسة تفاعلات الجسيمات النانوية المختلفة والأسطح ذات البنية النانوية مع مجموعة واسعة من الأنواع الميكروبية.
Abstract
تم استكشاف الأنشطة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية والأسطح ذات البنية النانوية ، مثل الفضة وأكسيد الزنك وثاني أكسيد التيتانيوم وأكسيد المغنيسيوم ، سابقا في البيئات السريرية والبيئية وفي المنتجات الغذائية الاستهلاكية. ومع ذلك ، فإن عدم الاتساق في الأساليب والمواد التجريبية المستخدمة قد بلغ ذروته في نتائج متضاربة ، حتى بين الدراسات لنفس أنواع البنية النانوية والأنواع البكتيرية. بالنسبة للباحثين الذين يرغبون في استخدام الهياكل النانوية كمادة مضافة أو طلاء في تصميم المنتج ، فإن هذه البيانات المتضاربة تحد من استخدامها في البيئات السريرية.
لمواجهة هذه المعضلة ، نقدم في هذه المقالة أربع طرق مختلفة لتحديد الأنشطة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية والأسطح ذات البنية النانوية ، ومناقشة قابليتها للتطبيق في سيناريوهات مختلفة. من المتوقع أن يؤدي تكييف الأساليب المتسقة إلى بيانات قابلة للتكرار يمكن مقارنتها عبر الدراسات وتنفيذها لأنواع مختلفة من البنية النانوية والأنواع الميكروبية. نقدم طريقتين لتحديد الأنشطة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية وطريقتين للأنشطة المضادة للميكروبات للأسطح ذات البنية النانوية.
بالنسبة للجسيمات النانوية ، يمكن استخدام طريقة الاستزراع المشترك المباشر لتحديد الحد الأدنى من تركيزات الجسيمات النانوية المثبطة والحد الأدنى للجراثيم ، ويمكن استخدام طريقة ثقافة التعرض المباشر لتقييم نشاط الجراثيم في الوقت الفعلي مقابل نشاط مبيد للجراثيم الناتج عن التعرض للجسيمات النانوية. بالنسبة للأسطح ذات البنية النانوية ، يتم استخدام طريقة الاستزراع المباشر لتحديد صلاحية البكتيريا بشكل غير مباشر ومباشر على اتصال مع الأسطح ذات البنية النانوية ، وتستخدم طريقة التعرض للتلامس المركز لفحص النشاط المضاد للميكروبات في منطقة معينة من سطح نانوي. نناقش المتغيرات التجريبية الرئيسية التي يجب مراعاتها في تصميم الدراسة في المختبر عند تحديد الخصائص المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية والأسطح ذات البنية النانوية. كل هذه الطرق منخفضة التكلفة نسبيا ، وتستخدم تقنيات يسهل إتقانها نسبيا وتكرارها من أجل الاتساق ، وتنطبق على مجموعة واسعة من أنواع البنية النانوية والأنواع الميكروبية.
Introduction
في الولايات المتحدة وحدها ، يصاب 1.7 مليون شخص بعدوى مكتسبة من المستشفى (HAI) سنويا ، مع واحد من كل 17 من هذه العدوى يؤدي إلى الوفاة1. بالإضافة إلى ذلك ، تشير التقديرات إلى أن تكاليف علاج HAIs تتراوح من 28 مليار دولار إلى 45 مليار دولار سنويا 1,2. تسود هذه المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين (MRSA)3,4 و Pseudomonas aeruginosa4 ، والتي عادة ما يتم عزلها عن التهابات الجروح المزمنة وعادة ما تتطلب علاجا مكثفا ووقتا لإنتاج نتيجة إيجابية للمريض.
على مدى العقود العديدة الماضية ، تم تطوير فئات متعددة من المضادات الحيوية لعلاج الالتهابات المتعلقة بهذه البكتيريا المسببة للأمراض وغيرها. على سبيل المثال ، تم استخدام نظائر ريفاميسين لعلاج MRSA ، وغيرها من الالتهابات إيجابية الجرام وسالبة الجرام ، وعدوى المتفطرة النيابة. 5. في تسعينيات القرن العشرين ، لعلاج فعال لعدد متزايد من عدوى السل M. ، تم الجمع بين أدوية إضافية مع نظائر ريفاميسين لزيادة فعاليتها. ومع ذلك، فإن ما يقرب من 5٪ من حالات المتفطرة السلية لا تزال مقاومةللريفامبيسين5،6، وهناك قلق متزايد بشأن البكتيريا المقاومة للأدويةالمتعددة 7. في الوقت الحالي ، قد لا يكون استخدام المضادات الحيوية وحدها كافيا في علاج HAIs ، وقد أثار هذا بحثا مستمرا عن علاجات بديلة مضادة للميكروبات1.
تم فحص المعادن الثقيلة ، مثل الفضة (Ag) 8،9،10 والذهب (Au) 11 ، والسيراميك ، مثل ثاني أكسيد التيتانيوم (TiO 2) 12 وأكسيد الزنك (ZnO) 13 ، في شكل جسيمات نانوية (NP) (AgNP و AuNP و TiO2 NP و ZnONP ، على التوالي) لأنشطتها المضادة للميكروبات وتم تحديدها كبدائل محتملة للمضادات الحيوية. بالإضافة إلى ذلك ، المواد القابلة للامتصاص الحيوي ، مثل سبائك المغنيسيوم (سبائك المغنيسيوم)14،15،16 ، جسيمات أكسيد المغنيسيوم النانوية17،18،19،20،21 ، وجسيمات هيدروكسيد المغنيسيوم النانوية [nMgO و nMg (OH) 2 ، على التوالي] 22،23،24، كما تم فحصها. ومع ذلك ، فإن الدراسات السابقة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية استخدمت مواد وطرق بحث غير متسقة ، مما أدى إلى بيانات يصعب أو يستحيل مقارنتها وأحيانا تكون متناقضة في الطبيعة18,19. على سبيل المثال ، اختلف الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) والحد الأدنى لتركيز مبيد الجراثيم (MBC) لجسيمات الفضة النانوية بشكل كبير في دراسات مختلفة. قام Ipe et al.25 بتقييم الأنشطة المضادة للبكتيريا ل AgNPs بمتوسط حجم جسيم ~ 26 نانومتر لتحديد MICs ضد البكتيريا إيجابية الجرام وسالبة الجرام. وكانت البلدان المتوسطة الدخل المحددة ل P. aeruginosa و E. coli و S. aureus و MRSA 2 ميكروغرام / مل و 5 ميكروغرام / مل و 10 ميكروغرام / مل و 10 ميكروغرام / مل ، على التوالي. في المقابل ، قام Parvekar et al.26 بتقييم AgNPs بمتوسط حجم جسيم يبلغ 5 نانومتر. في هذه الحالة ، تم العثور على AgNP MIC و MBC من 0.625 ملغ / مل لتكون فعالة ضد S. aureus. بالإضافة إلى ذلك ، قام Loo et al.27 بتقييم AgNPs بحجم 4.06 نانومتر. عندما تعرضت الإشريكية القولونية لهذه الجسيمات النانوية ، تم الإبلاغ عن MIC و MBC عند 7.8 ميكروغرام / مل. أخيرا ، قام Ali et al.28 بالتحقيق في الخصائص المضادة للبكتيريا ل AgNPs الكروية بمتوسط حجم 18 نانومتر. عندما تعرضت P. aeruginosa و E. coli و MRSA لهذه الجسيمات النانوية ، تم تحديد MIC عند 27 ميكروغرام / مل ، و 36 ميكروغرام / مل ، و 27 ميكروغرام / مل ، و 36 ميكروغرام / مل ، على التوالي ، وتم تحديد MBC عند 36 ميكروغرام / مل ، و 42 ميكروغرام / مل ، و 30 ميكروغرام / مل ، على التوالي.
على الرغم من أن النشاط المضاد للبكتيريا للجسيمات النانوية قد تمت دراسته والإبلاغ عنه على نطاق واسع خلال العقود الأخيرة ، إلا أنه لا يوجد معيار للمواد وطرق البحث المستخدمة للسماح بإجراء مقارنات مباشرة عبر الدراسات. لهذا السبب ، نقدم طريقتين ، طريقة الزراعة المشتركة المباشرة (الطريقة أ) ، وطريقة التعرض المباشر (الطريقة ب) ، لتوصيف ومقارنة الأنشطة المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية مع الحفاظ على اتساق المواد والطرق.
بالإضافة إلى الجسيمات النانوية ، تم أيضا فحص الأسطح ذات البنية النانوية بحثا عن الأنشطة المضادة للبكتيريا. وتشمل هذه المواد القائمة على الكربون ، مثل صفائح الجرافين النانوية ، والأنابيب النانوية الكربونية ، والجرافيت29 ، بالإضافة إلى سبائك المغنيسيوم والمغنيسيوم النقية. أظهرت كل من هذه المواد آلية واحدة على الأقل مضادة للبكتيريا ، بما في ذلك الضرر المادي المفروض على أغشية الخلايا بواسطة المواد القائمة على الكربون والأضرار التي لحقت بعمليات التمثيل الغذائي أو الحمض النووي من خلال إطلاق أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) عندما يتحلل المغنيسيوم. بالإضافة إلى ذلك ، عندما يتم الجمع بين الزنك (Zn) والكالسيوم (Ca) في تكوين سبائك المغنيسيوم ، يتم تحسين صقل حجم حبيبات مصفوفة Mg ، مما يؤدي إلى تقليل الالتصاق البكتيريا بأسطح الركيزة مقارنة بعينات Mg فقط14. لإثبات النشاط المضاد للبكتيريا ، نقدم طريقة الاستزراع المباشر (الطريقة C) ، والتي تحدد الالتصاق البكتيري على المواد ذات البنية النانوية وحولها بمرور الوقت من خلال القياس الكمي لوحدات تشكيل المستعمرات البكتيرية (CFUs) مع ملامسة السطح المباشرة وغير المباشرة.
يمكن أن تؤثر هندسة الهياكل النانوية على الأسطح ، بما في ذلك الحجم والشكل والاتجاه ، على أنشطة المواد المبيدة للجراثيم. على سبيل المثال ، قام Lin et al.16 بتصنيع طبقات MgO مختلفة ذات بنية نانوية على أسطح ركائز Mg من خلال الأنودة والترسيب الكهربائي (EPD). بعد فترة من التعرض للسطح النانوي في المختبر ، انخفض نمو S. aureus بشكل كبير مقارنة بالمغنيسيوم غير المعالج. يشير هذا إلى قوة أكبر للسطح ذو البنية النانوية ضد الالتصاق البكتيري مقابل سطح Mg المعدني غير المعالج. للكشف عن الآليات المختلفة للخصائص المضادة للبكتيريا لمختلف الأسطح ذات البنية النانوية ، تتم مناقشة طريقة التعرض للتلامس المركز (الطريقة D) التي تحدد تفاعلات سطح الخلية داخل منطقة الاهتمام في هذه المقالة.
الهدف من هذه المقالة هو تقديم أربع طرق في المختبر تنطبق على الجسيمات النانوية المختلفة والأسطح ذات البنية النانوية والأنواع الميكروبية. نناقش الاعتبارات الرئيسية لكل طريقة لإنتاج بيانات متسقة وقابلة للتكرار من أجل المقارنة. على وجه التحديد ، يتم استخدام طريقة الزراعة المشتركة المباشرة17 وطريقة التعرض المباشر لفحص الخصائص المضادة للميكروبات للجسيمات النانوية. من خلال طريقة الاستزراع المشترك المباشر ، يمكن تحديد الحد الأدنى من التركيزات المثبطة والحد الأدنى من الجراثيم (MIC و MBC90-99.99 ، على التوالي) للأنواع الفردية ، ويمكن تحديد التركيز الأكثر فعالية (MPC) لأنواع متعددة. من خلال طريقة التعرض المباشر ، يمكن تمييز التأثيرات البكتيرية أو المبيدة للجراثيم للجسيمات النانوية عند الحد الأدنى من التركيزات المثبطة بقراءات الكثافة البصرية في الوقت الفعلي بمرور الوقت. طريقة الاستزراعالمباشر 14 مناسبة لفحص البكتيريا الملامسة بشكل مباشر وغير مباشر للأسطح ذات البنية النانوية. أخيرا ، يتم تقديم طريقة التعرض للتلامسالمركز 16 لفحص النشاط المضاد للبكتيريا لمنطقة معينة على سطح ذو بنية نانوية من خلال التطبيق المباشر للبكتيريا وتوصيف نمو البكتيريا في واجهة البنية النانوية الخلوية. تم تعديل هذه الطريقة من المعيار الصناعي الياباني JIS Z 2801: 200016 ، وتهدف إلى التركيز على تفاعلات سطح الميكروب واستبعاد آثار تحلل العينات السائبة في الثقافة الميكروبية على الأنشطة المضادة للميكروبات.
Protocol
Representative Results
Discussion
لقد قدمنا أربع طرق في المختبر (A-D) لتوصيف الأنشطة المضادة للبكتيريا للجسيمات النانوية والأسطح ذات البنية النانوية. في حين أن كل طريقة من هذه الطرق تحدد النمو البكتيري وصلاحيته بمرور الوقت استجابة للمواد النانوية ، يوجد بعض الاختلاف في الطرق المستخدمة لقياس كثافة البذر البكتيري الأول…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يقدر المؤلفون الدعم المالي المقدم من مؤسسة العلوم الوطنية الأمريكية (جائزة NSF CBET 1512764 و NSF PIRE 1545852) ، والمعاهد الوطنية للصحة (NIH NIDCR 1R03DE028631) ، وزمالة تطوير أعضاء هيئة التدريس بجامعة كاليفورنيا (UC) Regents ، ولجنة منحة البذور البحثية (Huinan Liu) ، ومنحة برنامج إرشاد أبحاث الخريجين بجامعة كاليفورنيا في ريفرسايد الممنوحة لباتريشيا هولت توريس. يقدر المؤلفون المساعدة المقدمة من المرفق المركزي للفحص المجهري المتقدم والتحليل المجهري (CFAMM) في جامعة كاليفورنيا ريفرسايد لاستخدام SEM / EDS والدكتور بيري تشيونغ لاستخدام XRD. يود المؤلفون أيضا أن يشكروا مورغان إليزابيث ناتور وسامهيثا تومكور على مساعدتهم في التجارب وتحليل البيانات. أي آراء أو نتائج أو استنتاجات أو توصيات معبر عنها في هذه المقالة هي آراء المؤلفين ولا تعكس بالضرورة آراء المؤسسة الوطنية للعلوم أو المعاهد الوطنية للصحة.
Materials
| 1.5 mL microcentrifuge tube | Milipore Sigma | Z336777 | |
| 80 L NTRL Certified Convection Drying Oven | MTI Corporation | BPG-7082 | https://www.mtixtl.com/BPG-7082.aspx |
| (hydroxymethyl) aminomethane buffer pH 8.5; Tris buffer | Sigma-Aldrich | 42457 | |
| AnaSpec THIOFLAVIN T ULTRAPURE GRADE | Fisher Scientific | 50-850-291 | |
| Electron-multiplying charge-coupled device digital camera | Hamamatsu | C9100-13 | |
| Falcon 15 mL conical tubes | Fisher Scientific | 14-959-49B | |
| Gluteraldehyde | Sigma-Aldrich | G5882 | |
| Hemocytometer | Brightline, Hausser Scientific | 1492 | |
| Inductively coupled plasma – optical emission spectrometry (ICP-OES) | PerkinElmer | 8000 | |
| Inverse microscope | Nikon | Eclipse Ti-S | |
| Luria Bertani Broth | Sigma Life Science | L3022 | |
| Luria Bertani Broth + agar | Sigma Life Science | L2897 | |
| MacroTube 5.0 | Benchmark Scientific | C1005-T5-ST | |
| Magnesium oxide nanoparticles | US Research Nanomaterials, Inc | Stock #: US3310 M | MgO, 99+%, 20 nm |
| MS Semi-Micro Balance | Mettler Toledo | MS105D | |
| Nitrocellulose paper | Fisherbrand | 09-801A | |
| Non-tissue treated 12-well polystyrene plate | Falcon Corning Brand | 351143 | |
| Non-tissue treated 48-well polystyrene plate | Falcon Corning Brand | 351178 | |
| Non-tissue treated 96-well polystyrene plate | Falcon Corning Brand | 351172 | |
| Petri dish 100 mm | VWR | 470210-568 | |
| Petri dish, 15 mm | Fisherbrand | FB0875713A | |
| pH meter | VWR | SP70P | |
| Scanning electron microscopy (SEM) | TESCAN | Vega3 SBH | |
| Sonicator | VWR | 97043-936 | |
| Table top centrifuge | Fisher Scientific | accuSpin Micro 17 | |
| Table top centrifuge | Eppendorf | Centrifuge 5430 | |
| Tryptic Soy Agar | MP | 1010617 | |
| Tryptic Soy Broth | Sigma-Aldrich | 22092-500G | |
| UV-Vis spectrophotometer | Tecan | Infinite 200 PRO | https://lifesciences.tecan.com/plate_readers/infinite_200_pro |
| VWR Benchmark Incu-shaker 10L | VWR | N/A | |
| X-ray power defraction | Panalytical | N/A | PANalytical Empyrean Series 2 |
References
- Haque, M., Sartelli, M., McKimm, J., Abu Bakar, M. Health care-associated infections – An overview. Infection and Drug Resistance. 11, 2321-2333 (2018).
- O’Connell, K. M. G. Combating multidrug-resistant bacteria: Current strategies for the discovery of novel antibacterials. Angewandte Chemie. 52 (41), 10706-10733 (2013).
- Li, B., Webster, T. J. Bacteria antibiotic resistance: New challenges and opportunities for implant-associated orthopedic infections. Journal of Orthopaedic Research. 36 (1), 22-32 (2018).
- Yung, D. B. Y., Sircombe, K. J., Pletzer, D. Friends or enemies? The complicated relationship between Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Molecular Microbiology. 116 (1), 1-15 (2021).
- Adams, R. A. Rifamycin antibiotics and the mechanisms of their failure. The Journal of Antibiotics. 74 (11), 786-798 (2021).
- Harding, E. WHO global progress report on tuberculosis elimination. The Lancet. Respiratory Medicine. 8 (1), 19 (2020).
- Baptista, P. V. Nano-strategies to fight multidrug resistant bacteria-"A battle of the titans". Frontiers in Microbiology. 9, 1441 (2018).
- Seong, M., Lee, D. G. Silver nanoparticles against Salmonella enterica serotype typhimurium: Role of inner membrane dysfunction. Current Microbiology. 74 (6), 661-670 (2017).
- Dasgupta, N., Ramalingam, C. Silver nanoparticle antimicrobial activity explained by membrane rupture and reactive oxygen generation. Environmental Chemistry Letters. 14, 477-485 (2016).
- Su, H. L. The disruption of bacterial membrane integrity through ROS generation induced by nanohybrids of silver and clay. Biomaterials. 30 (30), 5979-5987 (2009).
- Cui, Y. The molecular mechanism of action of bactericidal gold nanoparticles on Escherichia coli. Biomaterials. 33 (7), 2327-2333 (2012).
- Ranjan, S., Ramalingam, C. Titanium dioxide nanoparticles induce bacterial membrane rupture by reactive oxygen species generation. Environmental Chemistry Letters. 14, 487-494 (2016).
- Kadiyala, U., Turali-Emre, E. S., Bahng, J. H., Kotov, N. A., VanEpps, J. S. Unexpected insights into antibacterial activity of zinc oxide nanoparticles against methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Nanoscale. 10 (10), 4927-4939 (2018).
- Zhang, C. Antimicrobial bioresorbable Mg-Zn-Ca alloy for bone repair in a comparison study with Mg-Zn-Sr alloy and pure Mg. ACS Biomaterials Science and Engineering. 6 (1), 517-538 (2020).
- Lock, J. Y. Degradation and antibacterial properties of magnesium alloys in artificial urine for potential resorbable ureteral stent applications. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 102 (3), 781-792 (2014).
- Lin, J., Nguyen, N. -. Y. T., Zhang, C., Ha, A., Liu, H. H. Antimicrobial properties of MgO nanostructures on magnesium substrates. ACS Omega. 5 (38), 24613-24627 (2020).
- Nguyen, N. -. Y. T., Grelling, N., Wetteland, C. L., Rosario, R., Liu, H. Antimicrobial activities and mechanisms of magnesium oxide nanoparticles (nMgO) against pathogenic bacteria, yeasts, and biofilms. Scientific Reports. 8 (1), 16260 (2018).
- Bindhu, M. R., Umadevi, M., Micheal, M. K., Arasu, M. V., Al-Dhabi, N. A. Structural morphological and optical properties of MgO nanoparticles for antibacterial applications. Materials Letters. 166, 19-22 (2016).
- He, Y. Study on the mechanism of antibacterial action of magnesium oxide nanoparticles against foodborne pathogens. Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 54 (2016).
- Zhang, K., An, Y., Zhang, L., Dong, Q. Preparation of controlled nano-MgO and investigation of its bactericidal properties. Chemosphere. 89 (11), 1414-1418 (2012).
- Hayat, S. In vitro antibiofilm and anti-adhesion effects of magnesium oxide nanoparticles against antibiotic resistant bacteria. Microbiology and Immunology. 62 (4), 211-220 (2018).
- Dong, C. Investigation of Mg(OH)2 nanoparticles as an antibacterial agent. Journal of Nanoparticle Research. 12, 2101-2109 (2010).
- Halbus, A. F., Horozov, T. S., Paunov, V. N. Controlling the antimicrobial action of surface modified magnesium hydroxide nanoparticles. Biomimetics. 4 (2), 41 (2019).
- Pan, X. Investigation of antibacterial activity and related mechanism of a series of Nano-Mg(OH)2. ACS Applied Materials and Interfaces. 5 (3), 1137-1142 (2013).
- Ipe, D. S., Kumar, P. T. S., Love, R. M., Hamlet, S. M. Silver nanoparticles at biocompatible dosage synergistically increases bacterial susceptibility to antibiotics. Frontiers in Microbiology. 11, 1074 (2020).
- Parvekar, P., Palaskar, J., Metgud, S., Maria, R., Dutta, S. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of silver nanoparticles against Staphylococcus aureus. Biomaterial Investigations in Dentistry. 7 (1), 105-109 (2020).
- Loo, Y. Y. In vitro antimicrobial activity of green synthesized silver nanoparticles against selected gram-negative foodborne pathogens. Frontiers in Microbiology. 9, 1555 (2018).
- Ali, K. Microwave accelerated green synthesis of stable silver nanoparticles with Eucalyptus globulus leaf extract and their antibacterial and antibiofilm activity on clinical isolates. PLoS One. 10 (7), e0131178 (2015).
- Al-Jumaili, A., Alancherry, S., Bazaka, K., Jacob, M. V. Review on the antimicrobial properties of carbon nanostructures. Materials. 10 (9), 1066 (2017).
- MTI Corporation. . 80L NTRL Certified Convection Drying Oven (18″x16″x18″, 250°C) with Digital Temperature Controller (SSP) – BPG-7082. , (2022).
- CHEBI. . Tris (CHEBI:9754). , (2023).
- . Cold Spring Harbor Protocols. Phosphate buffer. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2016).
- Barat, R., Montoya, T., Seco, A., Ferrer, J. Modelling biological and chemically induced precipitation of calcium phosphate in enhanced biological phosphorus removal systems. Water Research. 45, 3744-3752 (2011).
- Carlsson, H., Aspegren, H., Lee, N., Hilmer, A. Calcium phosphate precipitation in biological phosphorus removal systems. Water Research. 31 (5), 1047-1055 (1997).
- Gonzalez, J., Hou, R. Q., Nidadavolu, E. P. S., Willumeit-Römer, R., Feyerabend, F. Magnesium degradation under physiological conditions – Best practice. Bioactive Materials. 3 (2), 174-185 (2018).
- Oyane, A., et al. Preparation and assessment of revised simulated body fluids. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 65 (2), 188-195 (2003).
- Xia, B., et al. Amyloid histology stain for rapid bacterial endospore imaging. Journal of Clinical Microbiology. 49 (8), 2966-2975 (2011).
- Pankey, G. A., Sabath, L. D. Clinical relevance of bacteriostatic versus bactericidal mechanisms of action in the treatment of Gram-positive bacterial infections. Clinical Infectious Diseases. 38 (6), 864-870 (2004).
- Ribeiro, M., Monteiro, F. J., Ferraz, M. P. Infection of orthopedic implants with emphasis on bacterial adhesion process and techniques used in studying bacterial-material interactions. Biomatter. 2 (4), 176-194 (2012).
