यह प्रोटोकॉल फोटोस्विचेबल एंटीकैंसर पेप्टाइड्स के मूल्यांकन के लिए अपनाए गए प्रयोगों का एक सेट प्रस्तुत करता है, जिसका उपयोग ऐसे यौगिकों की प्रीक्लिनिकल स्क्रीनिंग में किया जा सकता है। इसमें 2 डी और 3 डी सेल संस्कृतियों में साइटोटॉक्सिसिटी मूल्यांकन, एक्स विवो (मॉडल ऊतक) फोटोइसोमेराइजेशन दक्षता का मूल्यांकन और विवो प्रभावकारिता शामिल है।
फोटोनियंत्रित, जैविक रूप से सक्रिय यौगिक “स्मार्ट” दवा उम्मीदवारों का एक उभरता हुआ वर्ग हैं। वे रोगी के शरीर के भीतर एक विशिष्ट स्थान पर सौम्य, गैर-आयनीय प्रकाश को निर्देशित करके उनके सटीक स्थानिक सक्रियण के कारण प्रणालीगत कीमोथेरेपी में अतिरिक्त सुरक्षा प्रदान करते हैं। यह पेपर इन विट्रो पोटेंसी और फोटोकंट्रोल , जैविक रूप से सक्रिय यौगिकों के फोटोएक्टिवेशन की पूर्व विवो दक्षता के साथ-साथ दवा के विकास के शुरुआती चरणों में विवो प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के तरीकों का एक सेट प्रस्तुत करता है। कार्यप्रणाली को एंटीकैंसर साइटोटोक्सिक पेप्टाइड्स पर लागू किया जाता है, अर्थात्, एक ज्ञात एंटीबायोटिक, ग्रामिसिडिन एस के डायरीलेथेन युक्त एनालॉग। प्रयोगों को कैंसर सेल लाइन (लुईस लंग कार्सिनोमा, एलएलसी), जीवित ऊतक सरोगेट्स (पोर्क मीट कीमा), और इम्यूनोसक्षम चूहों में एक एलोग्राफ्ट कैंसर मॉडल (चमड़े के नीचे एलएलसी) के 2 डी (अनुयायी कोशिकाओं) और 3 डी (स्फेरॉइड) सेल संस्कृतियों का उपयोग करके किया जाता है। सबसे प्रभावी यौगिकों का चयन और यथार्थवादी फोटोथेराप्यूटिक खिड़कियों का अनुमान स्वचालित प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के माध्यम से किया जाता है। अलग-अलग रोशनी आहार पर फोटोएक्टिवेशन दक्षता एक मॉडल ऊतक में अलग-अलग गहराई पर निर्धारित की जाती है, और विवो प्रयोग में अंतिम चिकित्सीय में इष्टतम प्रकाश खुराक लागू की जाती है।
फोटोनियंत्रित जैविक रूप से सक्रिय यौगिक हाल के दशकों में मानव रोगों के लिए सुरक्षित केमोथेरेपी के एक आशाजनक घटक के रूप में उभरे हैं और विशेष रूप से घातक ठोस ट्यूमर1 को मिटाने के लिए। इन यौगिकों में विपरीत रूप से फोटोइसोमेरेबल टुकड़े (आणविक फोटोस्विच) होते हैं और विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश के साथ विकिरण पर निष्क्रिय और सक्रिय फोटोइसोमर्स के बीच टॉगल कर सकते हैं।
उनके गैर-फोटोकंट्रोलेबल एनालॉग्स की तुलना में, फोटोकंट्रोल्ड दवाएं सुरक्षित हो सकती हैं क्योंकि उन्हें कम सक्रिय और अनिवार्य रूप से नॉनटॉक्सिक रूपों में रोगी के शरीर में व्यवस्थित रूप से पेश किया जा सकता है, और फिर केवल प्रकाश द्वारा सक्रिय किया जाता है जहां आवश्यक हो, जैसे ट्यूमर, अल्सर और घावों में। यद्यपि इस तरह के आणविक दवा प्रोटोटाइप के कई रोमांचक प्रदर्शन हाल केअकादमिक पत्रों 2,3,4,5,6,7 में पाए जा सकते हैं, नैदानिक फोटोफार्माकोलॉजी का क्षेत्र – अनुमोदित दवा / चिकित्सा उपकरण / रोग संयोजनों का एक अनुप्रयोग – मौजूद नहीं है। फोटोफार्माकोलॉजी अभी तक दवा की खोज के चरण में है, और व्यवस्थित प्रीक्लिनिकल अध्ययन अज्ञात हैं।
हमने हाल ही में कुछ फोटोनियंत्रित एंटीकैंसर पेप्टाइड्स, अर्थात्, पेप्टाइड एंटीबायोटिक ग्रामिसिडिन एस8 के एनालॉग के लिए विवो सुरक्षा लाभ का प्रदर्शन किया है। इन फोटोनियंत्रित डेरिवेटिव में एक डायरीलेथेन (डीएई) फोटोस्विच होता है, जो तथाकथित लाल प्रकाश-जनित “रिंग-ओपन” और यूवी-जनित “रिंग-क्लोज्ड” फोटोफॉर्म (डेरिवेटिव में से एक, यौगिक एलएमबी 002 के लिए चित्रा 1 में सचित्र) के बीच प्रतिवर्ती फोटोप्रेरित परिवर्तनों से गुजरता है।
चित्र 1: फोटोनियंत्रित साइटोटोक्सिक पेप्टाइड एलएमबी 002 और इसके फोटोइसोमेराइजेशन। डायरीलेथेन का टुकड़ा लाल रंग में दिखाया गया है। संक्षिप्त नाम: डीएई = डायरीलेथेन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
हिट खोजने और हिट-टू-लीड अनुकूलन करने के लिए अक्सर इन विट्रो और विवो में उपयुक्त यौगिक पुस्तकालयों की स्क्रीनिंग 9,10 की आवश्यकता होती है। यहां, हम फोटोनियंत्रित यौगिकों के साइटोटॉक्सिसिटी की व्यवस्थित उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त एक पद्धति का प्रदर्शन करते हैं। हम फोटोइसोमेराइजेशन दक्षता भी निर्धारित करते हैं, मॉडल ऊतकों में प्रकाश खुराक का अनुमान लगाते हैं, और सबसे अच्छा प्रदर्शन करने वाले उम्मीदवारों की विवो प्रभावकारिता का मूल्यांकन करते हैं। दृष्टिकोण बायोएथिक्स और पशु देखभाल विचारों के अनुरूप है।
इस काम में, परीक्षण किए गए यौगिकों के अनियंत्रित फोटोइसोमेराइजेशन से बचने के लिए पारंपरिक प्रीक्लिनिकल विधियों को संशोधित किया जाता है। यहां इन संशोधित विधियों को लागू करने का समग्र लक्ष्य एक सामान्य रणनीति विकसित करना है जो सरल और तेज है और इन विट्रो गतिविधियों की मज़बूती से तुलना करने और लीड पहचान और आगे के विकास के लिए फोटोस्विचेबल यौगिकों के विवो प्रभावकारिता परीक्षण को तर्कसंगत बनाने के लिए सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण डेटा उत्पन्न करता है।
रणनीति में लगातार तीन चरण शामिल हैं। पहले चरण में दो-आयामी (2 डी, मोनोलेयर) और तीन-आयामी (3 डी, स्फेरॉइड) सेल संस्कृतियों और कॉन्फोकल उच्च-थ्रूपुट स्वचालित फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके चयनित फोटोनियंत्रित जैविक रूप से सक्रिय यौगिकों के सक्रिय और निष्क्रिय फोटोफॉर्म के लिए सीरियल कमजोर पड़ने में आईसी 50 (स्पष्ट50 % सेल व्यवहार्यता) का निर्धारण शामिल है। फोटोथेराप्यूटिक खिड़कियों की तुलना दो फोटोफॉर्म के बीच आईसी50 अंतर के संबंध में की जाती है, और सबसे अच्छा प्रदर्शन करने वाले उम्मीदवारों का चयन किया जाता है। स्वचालित माइक्रोस्कोपी और अन्य साइटोटॉक्सिसिटी स्क्रीनिंग प्लेटफार्मों (परख) द्वारा विषाक्तता मूल्यांकन में कोई विशिष्ट लाभ नहीं है; अधिक जटिल सेल-आधारित ट्यूमर मॉडल12 को इस स्तर पर आसानी से लागू किया जा सकता है।
चरण 1 में चुने गए यौगिकों के लिए, दूसरा कदम विकिरणित नमूना अर्क के यूवी-पता लगाए गए उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) का उपयोग करके ऊतक सरोगेट में कम सक्रिय फोटोफॉर्म की फोटोस्विचिंग दक्षता को निर्धारित करके विकिरणित ऊतक की सतह से गहराई के कार्य के रूप में ऊतकों के अंदर उनकी फोटोस्विचिंग दक्षता का वास्तविक अनुमान लगाना है। विवो में, फोटोस्विचिंग दक्षता का अध्ययन किया जा सकता है, लेकिन हम एक साधारण ऊतक सरोगेट का उपयोग करने का प्रस्ताव करते हैं – कीमा पोर्क मांस। हमने इस दृष्टिकोण की वैधता का परीक्षण किया है। हमने चूहों के कैंसर मॉडल पर विवो में हमारे फोटोस्विचेबल यौगिकों के रूपांतरण को मापा और चूहोंके साथ पिछले प्रयोगों में मापी गई गहराई पर लगभग एक ही फोटोकन्वर्जन देखा। किसी भी उपयुक्त वैकल्पिक कृत्रिम ऊतक13, 3 डी बायोप्रिंटेड ऊतक / अंग14, बायोप्सी सामग्री, या एक अन्य छूट पशु सामग्री का उपयोग किया जा सकता है। हालांकि, यह सेटअप एक अच्छा समझौता है क्योंकि यह किफायती, तेज और नैतिक है।
तीसरा कदम एक मुराइन कैंसर मॉडल में विवो एंटीकैंसर प्रभावकारिता का निर्धारण है। इन विट्रो प्रयोगों में बेहतर विशेषताओं का प्रदर्शन करने वाले यौगिकों और मॉडल ऊतकों में कम से कम 1-1.5 सेमी की गहराई पर कुशलतापूर्वक फोटोस्विचिंग को इस प्रयोग के लिए चुना जाता है।
इस प्रोटोकॉल को विभिन्न प्रकार के फोटोस्विच रखने वाले यौगिकों पर लागू किया जा सकता है, बशर्ते उनके फोटोफॉर्म (या उनके फोटोस्टेशनरी स्टेट्स, पीएसएस) उचित समय (कुछ दिनों या उससे अधिक) के लिए स्थिर हों। उदाहरण के लिए, पहले वर्णित डीएई-व्युत्पन्न एलएमबी 002 का उपयोग15 किया जाता है। एलएमबी 002 फोटोफॉर्म थर्मल रूप से स्थिर हैं और पर्याप्त गिरावट के बिना कम से कम एक वर्ष के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है। लुईस लंग कार्सिनोमा (एलएलसी) कोशिकाओं को इन विट्रो और विवो प्रदर्शन में इसके लिए चुना जाता है, लेकिन सेल प्रकार पर कोई प्रतिबंध नहीं लगाया जाता है। एलएलसी कोशिकाएं 3 डी में अनुगामी, आसानी से खेती योग्य हैं, और ट्यूमरोइड उत्पन्न करने के लिए उपयोग की जाती हैं (जैसा कि संदर्भ16 में वर्णित है)। विवो में। एलएलसी कोशिकाओं का उपयोग मेटास्टैटिक प्रक्रियाओं को मॉडल करने के लिए किया जाता है और चमड़े के नीचे इंजेक्शन के बाद इम्यूनोसक्षम चूहों में आसानी से ठोस ट्यूमर उत्पन्न कर सकते हैं। विवो पद्धति में यह सार्वभौमिक रूप से अन्य कैंसर मॉडल17,18 पर लागू किया जा सकता है। इस रणनीति का विस्तृत कार्यान्वयन नीचे वर्णित है।
दवा के विकास में फोटोनियंत्रित यौगिक अभूतपूर्व हैं; हालांकि, उनके प्रीक्लिनिकल और नैदानिक मूल्यांकन के लिए कोई तरीके स्थापित नहीं किए गए हैं। निकटतम मोनोथेरेपी एनालॉग, फोटोडायनामिक थेरेपी (पीडीटी), कैंसर के खिलाफ कई देशों द्वारा अपनाए गए नैदानिक उपयोग के लिए उपचार पद्धति है औरअन्य संकेतों के लिए विकास में है। फोटोफार्माकोलॉजी के समान, पीडीटी भी बायोएक्टिव पदार्थ (सिंगलेट ऑक्सीजन) को सक्रिय करने के लिए प्रकाश के उपयोग पर आधारित है। इसलिए, पीडीटी में प्रीक्लिनिकल और नैदानिक अध्ययन के लिए उपयोग किए जाने वाले कुछ प्रयोगात्मक तरीकों को फोटोफार्माकोलॉजी के लिए अपनाया जा सकता है। उदाहरण के लिए, प्रकाश स्रोत, प्रकाश वितरण दृष्टिकोण, और चिकित्सा उपकरण पीडीटी के लिए अच्छी तरह से विकसित और अनुमोदित हैं; उन्हें सीधे फोटोनियंत्रित दवाओं के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। हालांकि, पीडीटी और फोटोफार्माकोलॉजी मेंएक दूसरे से कई अंतर हैं, जो उत्तरार्द्ध के लिए विशिष्ट तरीकों को स्थापित करने की आवश्यकता को सही ठहराता है।
सबसे पहले, पीडीटी (ऑक्सीजन) में गैर-सक्रिय पदार्थ हमेशा गैर विषैले सांद्रता में जीवित ऊतकों में मौजूद होता है। इसके विपरीत, गैर-सक्रिय फोटोनियंत्रित जैविक रूप से सक्रिय यौगिकों में अवशिष्ट गतिविधि और अवांछित विषाक्तता हो सकती है। इसलिए, आदर्श फोटोफार्माकोलॉजी दवाओं को उनके प्रशासित रूप में जैविक गतिविधि को कम करना चाहिए और उनके प्रकाश-जनित रूप में अत्यधिक सक्रिय होना चाहिए, “फोटोथेराप्यूटिक विंडो” 21 जितना संभव हो उतना बड़ा होना चाहिए। हिट खोजने और हिट-टू-लीड अनुकूलन करने के लिए उपयुक्त यौगिकों की पहचान और अपेक्षाकृत बड़े पुस्तकालयों की स्क्रीनिंग की आवश्यकता होती है, जो पहले से ही दवा के विकास के शुरुआती चरणों में हैं। यहां, हमने कुशल फोटोस्विचिंग यौगिकों की पहचान करने के लिए एक स्वचालित उच्च-थ्रूपुट कॉन्फोकल फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का प्रस्ताव दिया।
साइटोटॉक्सिसिटी मूल्यांकन की चुनी हुई विधि सबसे महत्वपूर्ण आवश्यकता के आसान कार्यान्वयन की अनुमति देती है – पीएसएस का रखरखाव या दृश्य-प्रकाश-संवेदनशील फोटोइसोमर की स्थिरता। ऐसा इसलिए है, क्योंकि इसके कार्यान्वयन पर, प्रकाश जोखिम कम हो जाता है। इसलिए, वैकल्पिक तरीकों का चयन करते समय, स्वचालित लोगों को प्राथमिकता दी जानी चाहिए। यह दृष्टिकोण विश्वसनीय और जानकारीपूर्ण है। इस स्तर पर 3 डी सेल कल्चर (स्फेरॉइड) का उपयोग अधिक यथार्थवादी ऊतक जैसे माइक्रोएन्वायरमेंट में उपचार के लिए सेल की प्रतिक्रिया की समग्र समझ प्रदान करता है। इसके अलावा, यौगिकों के क्रिया तंत्र में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रत्यक्ष विधि के रूप में माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके प्राप्त की जा सकती है। उचित धुंधला प्रोटोकॉल के साथ कॉन्फोकल फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी कोशिकाओं और स्फेरॉइड की आकृति विज्ञान के दृश्य मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है; कोशिका मृत्यु और कोशिकाओं के अंदर परिवर्तन पर महत्वपूर्ण विवरण भी पता लगाया जा सकता है।
दूसरा, प्रकाश आवेदन के लिए प्रकाश खुराक के सावधानीपूर्वक विकल्प की आवश्यकता होती है। पीडीटी में, प्रकाश ओवरडोज ऊतकों के लिए बेहद हानिकारकहै22. अत्यधिक प्रकाश विकिरण के तहत फोटोफार्माकोलॉजिकल थेरेपी फायदेमंद हो सकती है। सक्रिय पदार्थ की ऊपरी सीमा को गैर-सक्रिय पदार्थ और इसके फार्माकोकाइनेटिक्स की प्रशासित खुराक द्वारा परिभाषित किया गया है। हालांकि, प्रकाश खुराक अभी भी फोटोफार्माकोलॉजी में एक मुद्दा है। यह सुनिश्चित करने के लिए ध्यान रखा जाना चाहिए कि इरेडिएटिंग पावर घनत्व और एक्सपोजर समय चिकित्सा के लिए आवश्यकता से कम नहीं है। सिद्धांत रूप में, विवो में सक्रिय पदार्थ की पीढ़ी की निगरानी की जा सकती है। हालांकि, बायोएथिक्स कारणों से, हमने गैर-सक्रिय यौगिक15 के साथ मिश्रित एक मॉडल ऊतक (ताजा कीमा मांस) के साथ एक प्रयोग का प्रस्ताव दिया। यह प्रयोग सरल है और विभिन्न प्रकाश स्रोतों का उपयोग करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। इसे प्रकाश खुराक के फोटोफिजिकल आकलन और थर्मल प्रभावों के माप के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है। यहां फिर से, मॉडल ऊतकों का उपयोग करके, प्रकाश जोखिम को कम करना संभव है, उदाहरण के लिए, विवो स्थितियों में अधिक सटीक फोटोस्विचिंग दक्षता निर्धारण की तुलना में , एक विकल्प जो हमेशा विचार करने के लिए दिलचस्प हो सकता है।
अंत में, यौगिक जो इन विट्रो विषाक्तता स्क्रीन में बेहतर विशेषताओं का प्रदर्शन करते हैं और मॉडल ऊतक में कम से कम 1-1.5 सेमी गहरे फोटोस्विचिंग को कुशलतापूर्वक फोटोस्विच कर रहे हैं, उन्हें विवो अध्ययनों में महंगे, श्रमसाध्य और लंबे समय के लिए चुना जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में, हमने एलोग्राफ्ट कैंसर मॉडल उत्पन्न करने के लिए इन विट्रो मूल्यांकन में एक ही सेल लाइन (एलएलसी) का उपयोग किया। ट्यूमर विकास की गतिशीलता, मृत्यु दर और मेटास्टेसिस गिनती एंटीकैंसर प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए सबसे उपयुक्त पैरामीटर हैं। पारंपरिक कीमोथेरेपी की तुलना में, फोटोफार्माकोलॉजिकल उपचार में एक अतिरिक्त कारक लागू होता है – प्रकाश। इसलिए, दो नियंत्रण पशु समूहों की आवश्यकता होती है: एक जो केवल वाहन प्राप्त करता है और दूसरा जो वाहन और विकिरण प्राप्त करता है। यह सेटअप मापा मापदंडों पर प्रकाश के प्रभाव के मूल्यांकन को सक्षम बनाता है। हमारे प्रयोग में, दो प्रयोगात्मक समूहों के जानवरों को गैर-सक्रिय यौगिक प्राप्त हुआ, और एक समूह में चूहों के ट्यूमर को विकिरणित किया गया। विकिरण शासन नियंत्रण और उपचार समूहों के लिए समान था। इस स्तर पर बेंचमार्क कीमोथेरेपी के साथ तुलना आवश्यक नहीं है क्योंकि प्रयोग का मुख्य उद्देश्य प्रकाश और यौगिक अनुप्रयोग के संयुक्त प्रभाव को प्रदर्शित करना है। इस प्रभाव को प्रदर्शित करने वाले सबसे अच्छा प्रदर्शन करने वाले यौगिकों को तब विवो विषाक्तता पर आगे के अध्ययन के लिए चुना जा सकता है और उनके विकास पर महत्वपूर्ण निर्णय लेने के लिए बेंचमार्क के साथ तुलना की जा सकती है। तकनीकी रूप से, विवो प्रयोग जो हम वर्णन करते हैं, उसे आसानी से फार्माकोकाइनेटिक या फार्माकोडायनामिक्स अध्ययनों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, एक यौगिक जो पहले से ही दवा लीड के रूप में चुना गया है।
The authors have nothing to disclose.
लेखक ों ने पेलिको (# 690973) और एएलआईएसई (# 101007256) परियोजनाओं के माध्यम से एच 2020-एमएससीए-राइज कार्यक्रम द्वारा यूरोपीय संघ के वित्त पोषण को स्वीकार किया है। यह काम डीएफजी-जीआरके 2039 (एसए, टीएस और एएसयू), हेल्महोल्ट्ज़ सोसाइटी (एसए और एएसयू) के एनएसीआईपी कार्यक्रम और बीएमबीएफ (ओबी और एएसयू) के वीआईपी + द्वारा समर्थित था। हम डॉ सेरही कोनीव, कार्ल्सरुहे इंस्टीट्यूट ऑफ टेक्नोलॉजी को स्वीकार करते हैं, जिन्होंने यौगिक एलएमबी 002 को संश्लेषित किया है, इसे शुद्ध किया है और कृपया अध्ययन के लिए यौगिक प्रदान किया है। लेखक चुप्रिना मक्सिम के भी आभारी हैं जिन्होंने यूक्रेन में वीडियो को फिल्माया और संकलित किया, और यूक्रेन के सभी बहादुर रक्षकों के लिए जिन्होंने प्रयोगात्मक कार्य, लेखन और फिल्मांकन को संभव बनाया।
Agilent 1100 Series capillary LC system | ALSI-Chrom (Agilent distributor) | – | |
ATCC CRL-1642, LL/2 (LLC1) Lewis lung carcinoma cell line | ECACC | 90020104 | |
C57BL/6NCrl mice, female, inbred | Charles River | Strain code: 027 | |
CelCulture, CO2 incubator | Esco Micro | CCL-170B | |
Corning Matrigel Basement membrane matrix | Merck | CLS354234 | |
Corning, 384- well spheroid microplates | Merck | CLS3830 | |
Fetal bovine serum | Merck | F7524 | |
Gibco, DPBS | Thermo Fisher Scientific | 21600044 | |
Gramicidin S | Lumobiotics | Custom synthesis | |
HyClone, DMEM/high glucose | Cytiva | SH30003.04 | |
IN Cell Analyzer 6500HS, imaging system | Cytiva | 29240358 | |
Invitrogen, Calcein AM | Thermo Fisher Scientific | C1430 | |
Isoflurane anesthesia machine | ASA | S/N ASA 1305 | |
L-glutamine, 200 mM solution | Merck | G7513 | |
LIKA-surgeon, diode surgery laser | Fotonika plus | – | |
LMB002 | Lumobiotics | Custom synthesis | |
Penicillin–Streptomycin, solution stabilized | Merck | P4333 | |
PhenoPlate, 96-well plates | PerkinElmer | 6055302 | |
Photometer PCE-LED 20 | PCE Instruments | PCE-LED 20 | |
Thermo Scientific, Hoechst 33342 | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
Thermo Scientific, Propidium iodide | Thermo Fisher Scientific | J66764-MC | |
Trypan blue, 0.4% solution | Merck | T8154 | |
Trypsin–EDTA, 10 x solution | Merck | T4174 | |
UltraCruz Cell culture flasks with vented caps, 75 cm2 | Santa Cruz Biotechnology | sc-200263 | |
UltraCruz, bottle top filters, PES, 0.22 μm | Santa Cruz Biotechnology | sc-360882 | |
Vydac 218TP, C18 HPLC column (4.6 mm × 250 mm, 5 µm) | Altmann Analytik (Avantor distributor) | GR5103827 |