यह आलेख प्रक्रिया को सरल बनाने और ऑटोलॉगस वातानुकूलित सीरम (एसीएस) की तैयारी को कम खर्चीला बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है। किसी विशेष सिरिंज या सतह-लेपित ग्लास मोती की आवश्यकता नहीं है। इसके अलावा, संशोधित एसीएस (एमएसीएस) में म्यूरिन आंखों के कॉर्नियल घाव भरने में पारंपरिक ऑटोलॉगस सीरम पर प्रतिस्पर्धात्मक लाभ हैं।
मानव रक्त-व्युत्पन्न सामयिक उपचार हाल के दशकों में चिकित्सकों के लिए एक वरदान रहे हैं। ऑटोलॉगस सीरम (एएस) और प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी) एपिथेलियोट्रोपिक विकास कारकों में समृद्ध होते हैं जो कॉर्नियल घाव भरने में आवश्यक होते हैं। एएस के विपरीत, पीआरपी एक अंतर सेंट्रीफ्यूजेशन सिस्टम पर आधारित है, जो अधिक प्लेटलेट-व्युत्पन्न विकास कारक पैदा करता है। ऑटोलॉगस कंडीशन्ड सीरम (एसीएस) न केवल एएस और पीआरपी की तैयारी को संरक्षित करता है, बल्कि प्रतिरक्षा-मॉड्यूलेटिंग गुणों पर भी ध्यान केंद्रित करता है, जो भड़काऊ रोगों में महत्वपूर्ण हैं।
मानकीकृत प्रोटोकॉल की कमी और उच्च तैयारी लागत एसीएस के नैदानिक अनुप्रयोग के लिए सीमाएं हैं। यह वीडियो प्रयोग संशोधित ऑटोलॉगस कंडीशंड सीरम (एमएसीएस) आई ड्रॉप तैयार करने के लिए एक मानक संचालन प्रक्रिया को प्रदर्शित करता है। सबसे पहले, ग्लिसरॉल को हाइपोक्सिक इनक्यूबेशन के दौरान रक्त कोशिका स्टेबलाइजर के रूप में हेपरिन सिरिंज में जोड़ा गया था। रक्त कोशिकाओं को सक्रिय करने के लिए, 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे इनक्यूबेशन शुरू किया गया था। फिर, रक्त के नमूनों को कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 3,500 × ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। 0.22 μm फ़िल्टर के माध्यम से सतह पर तैरनेवाला के निस्पंदन के बाद, एमएसीएस आई ड्रॉप पूरी तरह से तैयार थे।
एमएसीएस के चिकित्सीय प्रभाव के एक अस्थायी प्रयास से पता चला है कि पूर्व विवो माउस आंखों में कॉर्नियल घाव भरने में पारंपरिक एएस पर प्रतिस्पर्धात्मक लाभ हो सकते हैं। इस अध्ययन में उपयोग किया जाने वाला एएस प्रकाशित अध्ययनों और हमारे अस्पताल में नैदानिक अभ्यास के अनुसार तैयार किया गया था। इसलिए, ओकुलर सतह रोगों पर एमएसीएस की प्रभावकारिता का मूल्यांकन विवो पशु अध्ययन और नैदानिक परीक्षणों के माध्यम से भविष्य के शोध में किया जा सकता है।
सूखी आंखों की बीमारियों में ऑटोलॉगस सीरम (एएस) के चिकित्सीय प्रभाव ों को पहली बार 1980 के दशक में फॉक्स एट अल.1 द्वारा रिपोर्ट किया गया था। यह माना जाता है कि प्राकृतिक आंसुओं की नकल करते हुए एएस में स्नेहन गुण और आवश्यक एपिथेलियोट्रोपिक जैव रासायनिक घटक दोनों, कॉर्नियल उपकला कोशिकाओं के प्रसार को लाभ पहुंचाते हैं। पिछले दशकों में, इस आधार पर कई अध्ययन किए गए हैं। ट्रॉफिक घटकों में एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर (ईजीएफ), विटामिन ए, ट्रांसफॉर्मिंग ग्रोथ फैक्टर β (टीजीएफ-β), और अन्य साइटोकिन्स शामिल हैं। दिलचस्प बात यह है कि सीरम टीजीएफ-β और विटामिन ए में समृद्ध है, जो माना जाता है कि एपिडर्मल प्रसार 2,3,4,5 में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। इसके अलावा, ओकुलर सतह रोगों वाले रोगियों का इलाज करते समय, कई अध्ययनों ने रोगी-रिपोर्ट किए गए परिणामों में एएस आई ड्रॉप के कुछ फायदे दिखाए हैं, अन्य उद्देश्य शुष्क आंख पैरामीटर6,7, और सूक्ष्म निष्कर्ष जैसे सेल घनत्व8। मेटा-विश्लेषण अध्ययनों से पता चला है कि एएस आई ड्रॉप उपचार के साथ रोगी के सिंड्रोम में सुधार करने में कुछ लाभ हो सकते हैं, लेकिन दीर्घकालिक परिणाम और अवलोकन अभी भी 9,10 की कमी है।
एएस के विपरीत, प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी) तैयारी के दौरान एक थक्कारोधी जोड़ने से प्राप्त होता है, जिसमें प्लेटलेट्स के आगे अंतर सेंट्रीफ्यूजेशन और रासायनिक सक्रियण होता है। एएस की तुलना में, कई रसायन और विकास कारक, जैसे टीजीएफ-β, संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (वीईजीएफ), और ईजीएफ, पीआरपी में मौजूद हैं। यह लक्षण राहत11 में नैदानिक लाभ के साथ ओकुलर सतह रोगों पर भी लागू किया गया है।
उपकला दोष और सूजन के बीच क्रॉस-लिंक जटिल है। विशेष रूप से, इम्यूनोपैथोफिज़ियोलॉजी ओकुलर सतह रोगों में एक और महत्वपूर्ण मुद्दा है। प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स, जैसे आईएल -1 और आईएफएन -γ, को भड़काऊ कैस्केड12 में महत्वपूर्ण मध्यस्थ माना जाता है। इस प्रकार प्रतिरक्षा तंत्र को समझने के आधार पर उपचार के नए रास्ते खुल जाते हैं। इंटरल्यूकिन -1 रिसेप्टर विरोधी (आईएल -1 आरए) और अन्य विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स के उत्पादन सहित इस भड़काऊ प्रक्रिया को रोकने की रणनीतियां, ओकुलर सतह रोगों 13,14,15 में भी महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकती हैं।
1998 के बाद से, ऑर्थोकिन, एक व्यावसायिक ऑटोलॉगस वातानुकूलित सीरम (एसीएस), का उपयोग ऑस्टियोआर्थराइटिस (ओए), रूमेटोइड गठिया (आरए), और रीढ़ की हड्डीके विकारों से पीड़ित आर्थोपेडिक रोगियों में चिकित्सकीय रूप से किया गया है। एएस और पीआरपी की तुलना में, मोनोसाइट्स को सक्रिय करने के लिए रासायनिक रूप से लेपित ग्लास बीड्स और हाइपोक्सिक इनक्यूबेशन के साथ उपचार एसीएस16 की विशिष्ट विशेषताएं हैं। सैद्धांतिक रूप से, कोशिकाओं में जीवित रहने के तनाव को जोड़कर अधिक विरोधी भड़काऊ कारकों को स्रावित किया जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप आईएल -1 आरए सहित आवश्यक प्रतिरक्षा-मॉड्यूलेटिंग घटकों की उच्च एकाग्रता होती है। एएस की तुलना में ओए में एसीएस के बेहतर चिकित्सीय लाभभी बताए गए हैं। ओकुलर सतह रोग कुछ मामलों में आर्थोपेडिक सूजन रोगों के साथ समान प्रतिरक्षा पृष्ठभूमि साझा करते हैं। इसलिए, आर्थोपेडिक क्षेत्र में मानव रक्त-व्युत्पन्न चिकित्सा के सफल परिणामों के आधार पर, एसीएस को एपिथेलियोट्रोपिक और प्रतिरक्षा-मॉड्यूलेटिंग गुणों द्वारा नैदानिक अभ्यास में पारंपरिक उपचार ों पर फायदे हो सकते हैं। यद्यपि एसीएस का व्यापक रूप से आर्थोपेडिक सूजन रोगों में उपयोग किया गया है, नेत्र विज्ञान में इसके नैदानिक अनुप्रयोगों का अभी भी पता लगाने की आवश्यकता है, जो इसकी उच्च लागत, साहित्य समर्थन की कमी और तैयारी प्रक्रिया के मानकीकरण की कमी से बाधित हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप विविध प्रदर्शन हो सकते हैं।
इस वीडियो लेख में, संशोधित एसीएस (एमएसीएस), या विकास कारकों (पीआरजीएफ) में समृद्ध प्लाज्मा उत्पन्न करने के लिए एक उपन्यास, लागत प्रभावी और सुविधाजनक विधि का प्रदर्शन किया गया था, जो व्यावसायिक एसीएस के लिए तुलनीय व्यावहारिक मूल्य के साथ एक आई ड्रॉप समाधान का उत्पादन करता है। एंटीकोआगुलंट्स को जोड़ने और तनावग्रस्त इनक्यूबेशन द्वारा विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स को स्रावित करने के लिए रक्त कोशिकाओं को ट्रिगर करने के प्रमुख विचारों को बरकरार रखा गया था, लेकिन रासायनिक रूप से प्रेरित तरीकों के विपरीत, जैसे कि सीआरएसओ 4-लेपित ग्लास बीड्स और वाणिज्यिक किट पर आधारित, महत्वपूर्ण तनाव की स्थिति शारीरिक रूप से इस विधि में हाइपोक्सिक इनक्यूबेशन द्वारा प्रेरित होती है। इसके अलावा, ग्लिसरॉल को अतिरिक्त लाभ प्रदान करने के लिए जोड़ा गया था, जिसमें रक्त कोशिकाओं की झिल्ली की स्थिरता में वृद्धि, एक उचित आसमाटिक बाह्य तरल दबाव18 का रखरखाव, और हाइपोक्सिक स्थितियों में पोषक तत्वों का एक उपयुक्त स्रोत शामिल है जो कोशिकाओं को ओवरस्ट्रेस करने से बचते हैं।
इस अध्ययन में, एमएसीएस की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है और पशु मॉडल के घाव भरने में एमएसीएस आई ड्रॉप ्स का लाभ आगे दिखाया गया है। इस एमएसीएस प्रोटोकॉल का महत्वपूर्ण संशोधन प्रत्येक टेस…
The authors have nothing to disclose.
लेखक उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए या-लान चिएन और चिया-यिंग ली और भाषाई संस्करण के लिए ऑनलाइन अंग्रेजी कंपनी को धन्यवाद देते हैं। इस अध्ययन को चांग गुंग मेडिकल रिसर्च प्रोजेक्ट (अनुदान संख्या सीएमआरपीजी 3 एल 1491) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
96-well culture plate | Merck KGaA, Germany | CLS3997 | |
Barraquer lid speculum | katena | K1-5355 | 15 mm |
Barraquer needle holder | Katena | K6-3310 | without lock |
Barron Vacuum Punch 8.0 mm | katena | K20-2108 | for cutting filter paper |
BD 10.0 mL vacutainer tubes containing heparin 158 USP units | Becton,Dickinson and Company, US | 367880 | At least 6 tubes, necessary to collect blood for subsequent experiments and to avoid blood agglutination |
BD 21 G butterfly-winged infusion set | Becton,Dickinson and Company, US | 367281 | For even distribution of glycerol solution |
C57BL/6 mice | National Laboratory Animal Center | RMRC11005 | for mouse model |
Castroviejo forceps 0.12 mm | katena | K5-2500 | |
Centrifuge | Eppendorf, Germany | 5811000428 | 3,500 x g for 10 min |
Cheng Yi 10.0 mL sterilized eye dropper bottle | Cheng Yi Chemical, Taiwan | CP405141 | Must be sterile and as the storage container for the final product |
Corneal rust ring remover with 0.5 mm burr | Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX | CHI-675 | for debridement of the corneal epithelium |
Dulbecco's modified minimal essential medium | Merck KGaA, Germany | D6429 | |
Filter paper | Toyo Roshi Kaisha,Ltd. | 1.11 | |
Fluorescein sodium ophthalmic strips U.S.P | OPTITECH | OPTFL100 | staining for corneal epithelial defect |
Incubator | Firstek, Taiwan | S300S | 37 °C for 4 h |
Kanam sterile gloves | Kanam Latex Industries, India | EN455 | For aseptic operation |
Merck 0.22 µm filter | Merck KGaA, Germany | PR05359 | At least 2 filters for mACS filtration |
Nang Kuang 250 mL 10% glycerol solution | Nang Kuang Pharmaceutical, Taiwan | 19496 | To offer suitable membrane stabilization effect and extracellular osmotic pressure for blood cells |
Normal saline | TAIWAN BIOTECH CO., LTD. | 100-120-1101 | |
Skin biopsy punch 2mm | STIEFEL | 22650 | |
Stereomicroscope | Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA | SV11 | microscope for surgery |
Terumo 18 G needle | Terumo, Taiwan | SMACF0120-18BX | 3.0 mL syringe with 18 G needle to extract the supernatant after centrifugation |
Terumo 20.0 mL syringe | Terumo, Taiwan | MDSS20ES | Could be used to collect serum after initial centrifugation and use it for secondary centrifugation. |
Terumo 3.0 mL syringe with the 23 G needle | Terumo, Taiwan | MDSS03S2325 | 3.0 mL syringe is used to extract the supernatant after centrifugation. Then connect the filter and the 23 G needle for injection into the eye drop bottles. |
Westcott Tenotomy Scissors Medium | katena | K4-3004 |