Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Tuina manipulasjon for å redusere betennelse og brusk tap i kneet slitasjegikt rotter

Published: June 30, 2023 doi: 10.3791/65451
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1
1Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
* These authors contributed equally

Summary

Vi presenterer en protokoll for Tuina-manipulasjon utført på gips-immobilisert-induserte kneartroserotter. Basert på de foreløpige resultatene, antydet det at effekten av metoden stod på reduksjon av betennelse og brusktap.

Abstract

Kliniske studier tyder på at Tuina manipulasjon er effektiv i behandling av knet artrose (KOA), mens videre studier er nødvendig for å oppdage mekanismen. Derfor er manipulering av dyremodeller av knet artrose kritisk. Denne protokollen gir en standardprosess for Tuina-manipulering på KOA-rotter og en foreløpig utforskning av Tuina-mekanismen for KOA. Press- og eltemanipulasjonsmetoden (en slags Tuina-manipulasjon som refererer til å trykke og elte det spesifikke området av kroppsoverflaten) påføres på 5 akupunkter rundt kneleddet av rotter. Kraften og frekvensen av manipulasjonen ble standardisert ved fingertrykkopptak, og rottens posisjon under manipulering er beskrevet i detalj i protokollen. Effekten av manipulasjon kan måles ved smerteatferdstester og mikroskopiske funn ved synovial og brusk. KOA-rotter viste signifikant forbedring i smerteadferd. Synovialvevsinfiltrasjonen var redusert i Tuinagruppen, og uttrykket av tumornekrosefaktor (TNF)-α var signifikant lavere. Sammenlignet med kontrollgruppen var kondrocyttapoptose mindre i Tuinagruppen. Denne studien gir en standardisert protokoll for Tuina-manipulering på KOA-rotter og foreløpig bevis på at de terapeutiske effektene av Tuina kan være relatert til å redusere synovial betennelse og forsinket kondrocyttapoptose.

Introduction

Knet artrose (KOA) er en degenerativ sykdom hovedsakelig manifestert i leddsmerter. Fibrose, sprekker, sårdannelse og tap av leddbrusk er hovedårsakene til denne sykdommen1. KOA har høy prevalens og kan resultere i en dyp innvirkning på pasientens daglige liv, forårsaker funksjonshemming i alvorlige tilfeller. Blant personer i alderen 45-84 år øker forekomsten av KOA med alderen, og forekomsten blant personer i alderen 85 år og over er 15%, med en overvekt hos kvinner 2,3. I tillegg kan KOA medføre en alvorlig økonomisk belastning for både individet og samfunnet. En undersøkelse viste at direkte helsekostnader på KOA per innbygger nådde opp til $ 8,858 ± $ 5,120 per år4. Med aldringen av samfunnet har KOA blitt et verdensomspennende helseproblem og et stort sosialt problem, samt et aktuelt problem for vitenskapelig forskning.

Evidensbaserte studier har vist effektiviteten av Tuina-manipulasjon ved behandling av KOA5. Tuina-manipulasjon kan lindre smerte og forbedre dysfunksjon hos KOA-pasienter, hvis mekanisme er relatert til antiinflammatoriske effekter 6,7. Forskere fant at Tuina-manipulasjon effektivt hemmet uttrykket av inflammatoriske faktorer interleukin (IL) -β og 5-hydroksytryptamin og reduserte degenerasjonen av leddbrusk i en kanin KOA modell8. Det antydet at Tuina kunne fremme blodsirkulasjon og metabolisme på lesjonsstedet, noe som bidro til å fjerne inflammatoriske faktorer som IL-1, IL-6 og tumornekrosefaktor (TNF) -α, og dermed lindre de kliniske symptomene på KOA9. I tillegg kan passiv bevegelse av leddet gjennom Tuina-manipulasjon fremme penetrasjon og diffusjon av synovialvæske i leddbrusk og forbedrer vevets næringsstoffskifte10. Andre studier antydet at Tuina-manipulering effektivt kan forbedre de biomekaniske indeksene hos KOA-pasienter11. Manipulasjoner brukt på bløtvev kan forbedre stressfordelingen over lemmer og forbedre balansefunksjonen12,13. Samtidig, med noen leddjusteringsmanipulasjoner, kan justeringen av underekstremitetene også justeres for å korrigere unormale gangarter14,15.

Virkningsmekanismen for Tuina-manipulasjon ved behandling av KOA gjenstår å bli utforsket, og derfor er det nødvendig med en eksperimentell studie. Nøkkelen til anvendelsen av Tuina i forsøksdyr er standardisering av modellering, dyrefiksering og intervensjonsmetoder16. Modelleringsmetoden bestemmer om forsøksdyret kan utvise sykdommens egenskaper. I mellomtiden kan passende fikseringsmetoder lette inngrepet av Tuina-manipulasjonen og bedre reflektere effekten av Tuina. Standardiseringen av intervensjonsmetoder er den vanskeligste delen av Tuina-manipulasjon. I 2010 nevnte det grunnleggende systemet med kinesiske akupunkturstandarder akupunkturpunktstandardene for forsøksdyr, noe som gir mulighet for akupunktur- og Tuina-operasjoner i dyreforsøk17. Imidlertid er det fortsatt vanskeligheter med å standardisere Tuina-manipulasjon. Det finnes flere typer Tuina-manipulasjon18. Valget av den spesifikke manipulasjonen avhenger hovedsakelig av sykdommen som skal behandles og de terapeutiske teoriene utøveren foretrekker. I studien av Tuina for KOA har mer oppmerksomhet blitt gitt til punkttrykkmanipulasjonen (trykke på de spesifikke akupunktene med tommelen eller albuen), Yizhichan skyve manipulasjon (en skyvemanipulasjon ved å vri på tommelen), og trykk og eltemanipulasjon (som refererer til å trykke og elte det spesifikke området av kroppsoverflaten med finger eller håndflate)19. Presse- og eltemanipulasjon er en av de mest brukte Tuina-manipulasjonene, som kombinerer pressing og æltning for å bevege det subkutane vevet20. Presse- og eltemanipulasjon brukt på akupunkter kan fremme blodsirkulasjonen og lindre smerte og representerer den terapeutiske effekten av Tuina på KOA19.

I denne protokollen vil operasjonen av presse- og eltemanipulasjon på KOA-rotter bli beskrevet i detalj, inkludert utvalgte akupunkter, intensitet og hyppighet av manipulasjonen og rottens kroppsposisjon, for å gi en referanse for fremtidig forskning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denne studien har bestått dyreetikkvurderingen utført av den eksperimentelle dyreetikkkomiteen ved Yueyang Hospital av integrert tradisjonell kinesisk og vestlig medisin tilknyttet Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (YYLAC-2022-166).

1. Eksperimentell dyreforberedelse og gruppering

  1. Dyr forberedelse
    1. Bak totalt 10 friske SPF SD-hunnrotter på 200-220 g ved romtemperatur (18-21 °C), fuktighet 40%-50%, 12 timer: 12 timers døgnrytmevekslinger. Gjennomføre smerterelaterte dyreforsøk i strengt samsvar med relevante bestemmelser i dyreetiske retningslinjer og retningslinjer.
  2. Gruppering av dyr
    1. Del rottene tilfeldig inn i Tuina-gruppen og kontrollgruppen. Behandle rotter av Tuina-gruppen med presse- og eltemanipulasjon i 21 dager etter modellering. Sett rotter fra kontrollgruppen i samme Tuina-rom og legg dem i en svart tøypose samtidig mens Tuina-gruppen er under behandling.

2. Modellering av dyr

  1. Bedøvelse av dyret
    1. Bruk isofluran til gassanestesi. Plasser rotta i induksjonsboksen med en induksjonskonsentrasjon på 3 %. Vingle boksen etter å ha lagt rotta ned og bekreft bedøvelsen når rotta velter uten forsøk på å gå tilbake til utsatt stilling.
    2. Fjern rotta fra induksjonsboksen og fest nesen i bedøvelsesmasken. Juster isofluran konsentrasjonen til 2% for å opprettholde anestesi. Bekreft bedøvelsen når rotta ikke reagerer når du klemmer pote. Påfør øyesalve til rotter for å forhindre tørrhet når rotter er bedøvet, da øyelokkene ikke kan lukkes.
  2. Modelleringsmetode21
    1. Bruk barbermaskin for å fjerne håret på høyre baklem. Plasser en medisinsk bomullspute mellom rottens høyre ankel og hofteledd. Fest høyre kneledd ved 180° forlengelse med 5-6 lag våt gipsbandasje jevnt. Spiral vikle gipsbandasjen fra ankelen og dekker 1/3 av den forrige. Bruk en hårføner til å tørke og herde gipset.
    2. Ekstern innpakning gipset med protesebunnmateriale etter at gipsbandasjen tørker og herdes for å fikse gipset og forhindre at det gnager.
    3. Bland protesebasematerialene for å gjøre det klebrig og fest blandingen til utsiden av gipset (blandingen skal ikke overstige kanten av bandasjen, figur 1). Etter at blandingen blir vanskelig, slå av anestesimaskinen og vent på at dyret våkner naturlig. Overvåke rottene for å forhindre anestesiulykker før rottene våkner.
    4. Fest gipset på riktig måte på rottens høyre baklem, da en tett fiksering begrenser blodsirkulasjonen, mens en løs fiksering har en tendens til å falle av. Vær oppmerksom på blodsirkulasjonen i terminalbenet. Hvis hevelse i terminalekstremiteten eller en lilla hudfarge oppdages, kutt straks av en del av gipset for å gjenopprette sirkulasjonen. Lag gipset på nytt hvis det er ødelagt og ikke klarer å opprettholde forlengelsen av underekstremiteten.
    5. Fjern gipset etter 3 uker med kontinuerlig immobilisering. Bruk kirurgisk saks til å kutte av protesebunnmaterialet utenfor og gipsbandasje. Skyll rottens underekstremitet med saltvann og tørk den med gasbind. Hvis det er lokale hudlidelser, steriliser med iodophor.
  3. Modell bekreftelse22
    1. Røntgenbasert verifisering
      1. Utfør en røntgenundersøkelse av høyre kne 1 dag etter slutten av modelleringen. Ta anteroposterior røntgenbilde i ryggleie med hoftefleksjon ved 30°, kneekstensjon ved 0° og hofteabduksjon ved 15°. Hold patella rett foran kneet og sett radiatorrøret 110 mm fra kneleddet.
      2. Ta laterale røntgenbilder i høyre laterale decubitusstilling med høyre hoftefleksjon ved 30° og høyre kneekstensjon ved 0°. Gjør venstre lem hoftefleksjon ved 70°, og knefleksjon ved 45°, og sett radiatorrøret 110 mm fra kneleddet. Still deteksjonsparametrene som eksponeringsspenning 50 kV, strøm 250 mA, eksponeringsdose 32 mAs og eksponeringstid 128 ms.
      3. Sammenlign med normale rotters røntgen, sjekk at det modellerte røntgenbildet av kneet viser smalere leddrom med osteofytthyperplasi i kanten.
    2. Osteoarthritis Research Society International (OARSI) scoring23
      1. Plasser rotta i eutanasiboksen og perfuser CO2 med en hastighet på 30% -70% burvolum per minutt. Slutt å perfusere CO2 etter å ha oppdaget at rotta er immobile, ikke puster, og at pupillen er utvidet. Observer i ytterligere 2 minutter for å bekrefte døden.
        MERK: Cervical dislokasjon kan utføres etter CO2-basert eutanasi som en sekundær form for å bekrefte død. Fest rotta på bordet og ta tak i halen med en hånd. Trykk ned på rottehodet med tommelen og pekefingeren på den andre hånden. Bekreft døden når du hører lyden av en sprekk, og rotta mister bevegelse og hjerteslag samtidig.
      2. Fest rotta i liggende stilling med en sprøytenål på et skumbrett med høyre bakre lem bøyd i bortføring og ekstern rotasjon. Klyp sammen huden rundt kneleddet med kirurgisk saks. Utsett musklene rundt kneleddet ved å kutte huden og deretter kutte den subkutane fascia.
      3. Klipp av lårbenet og tibia diafysen med bensaks og fjern høyre kneledd. Fjern forsiktig det ekstra myke vevet, som muskler og leddbånd, utenfor leddet.
      4. Fest skjøten i 4% paraformaldehyd i 24-48 timer ved 4 °C. Avkalk leddet i 10% maursyreoppløsning i 3 dager til beinvevet lett kan stikkes med en nål.
      5. Plasser og trim det avkalkede vevet i avtrekkshetten og overfør det til en dehydreringsboks i dehydreringsmaskinen. Tilsett 75% etanol i 4 timer, deretter 90% etanol i 2 timer, etterfulgt av 95% etanol i 1 time, absolutt etanol i 30 minutter, en ny runde med fersk absolutt etanol i 30 minutter, alkoholbenzen i 5-10 min, xylen i 5-10 min, en ny runde fersk xylen i 5-10 min, voks i 1 time, en ny runde fersk voks i 1 time, og siste runde med fersk voks i 1 time for dehydrering og gjennomsiktig voks nedsenking.
      6. Plasser deretter vevet i maskinen for innebygging. Skjær voksblokken i voksskiver på 4 μm etter at parafinen har stivnet og flat skiven i varmt vann. Legg skiven på en glassglass og tørk. Oppbevar den ved romtemperatur.
      7. Observer bruskprøven og skår den i henhold til OA-bruskhistopatologigradsvurdering (tabell 1)23. Hvis poengsummen for rotter etter modellering er betydelig høyere enn for de normale rotter, var modellering vellykket.

Tabell 1. OA brusk histopatologi grad vurdering. Grad er dybdeprogresjon i brusk. Total poengsum = Karakter x Staging. 0 for normale ledd, 24 for alvorlig leddgikt. Klikk her for å laste ned denne tabellen.

Figure 1
Figur 1. Rotter immobilisert i gips. Etter at rottene ble bedøvet, ble deres høyre underekstremiteter pakket inn med gipsbandasjer, festet i hyperutvidet stilling og dekket med et lag protesebasematerialer utenfor. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

3. Tuina manipulering

  1. anvendelsesområde
    1. Velg totalt 5 akupunkter på høyre baklem hos rotter, inkludert ST34, ST35, SP10, EX-LE4 og BL40 (figur 2). Finn akupunktene i henhold til prinsippene for akupunktposisjonering i 24.
  2. Stilling for søknad
    1. Klipp en svart klut i en 9 cm x 15 cm pose med en sideåpning og stram åpningen med et tau. Før Tuina-manipulasjonen, trekk forsiktig rottens hale for å få den til å grave seg ned i posen og eksponere baklemmene utenfor posen.
    2. Bruk den ene hånden til å holde rotta i mageleie, hold halen og bakbenet mens den andre hånden bruker trykk- og eltemanipulasjon på et spesifikt akupunkt (figur 3).
  3. Tuina manipulasjon
    1. Bruk presse- og eltemanipulasjon på de 5 akupunktene på høyre baklem i 2 min hver. Plasser utøvernes tommel på det valgte akupunkturpunktet for å utføre rytmisk trykk og elting, kjøre huden og subkutant vev sammen i en sirkulær bevegelse.
    2. Bruk fingertrykkopptak (enheter i Newton) for å sikre konsistent intensitet og frekvens av manipulasjonen. Hold intensiteten mellom 3-5 N og frekvensen på 2 Hz (figur 4). Påfør manipulasjonen en gang daglig i 21 dager.

Figure 2
Figur 2. Acupoints posisjon. SP10 ligger 5 mm over det indre kneleddet hos rotter. ST34 ligger 5 mm over det ytre kneleddet hos rotter. EX-LE4 ligger i medialsiden av kneleddbåndet hos rotter. ST35 ligger i sidesiden av knebåndet hos rotter. BL40 er plassert på midtpunktet av den tverrgående popliteale stripen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 3
Figur 3. Tuina-manipulasjon brukt på rotter. Rottene ble holdt i en svart pose med baklemmene blottlagt. Utøveren holdt rottens hale med venstre hånd mens høyre hånd utførte manipulasjonen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 4
Figur 4. Opptak av fingertrykk. En enhet som registrerer kraften og frekvensen av fingertrykk, brukes til tilbakemelding i sanntid om intensiteten og frekvensen i prosessen med Tuina-manipulasjon. (A) Trykksensor og overføringsutstyr. (B) Registrering av fingertrykk. (C) Kraften registrert under Tuina-manipulasjon. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

4. Smerteadferdstester

  1. Test smerteatferd før og etter modellering, og 1 dag etter (D1), 7 dager etter (D7), 14 dager etter (D14) og 21 dager etter (D21) Tuina-manipulasjonen, inkludert mekanisk uttaksterskel og labbeuttakslatenstester.
  2. Mekanisk uttaksterskel (MWT)
    1. Plasser rottene i et 20 cm x 10 cm x 20 cm gjennomsiktig herdet glasskabinett plassert på et 40 cm høyt stadium som består av et ledningsgitter med en størrelse på 10 mm x 10 mm blenderåpning. Romtemperaturen holdes ved 23 °C ± 2 °C.
    2. Sett rottene i atferdslaboratoriet i minst 2 timer per dag i atferdstestfasen for å unngå forstyrrelser i testresultatene på grunn av dyrenes manglende tilpasning til miljøet i begynnelsen av den formelle testen. Plasser rottene i atferdslaboratoriet i 30 minutter før starten av den formelle testen for å lette deres tilpasning til miljøet og for å redusere distraherende faktorer.
    3. Bruk elektroniske Von Frey-fibre til å måle MWT. Stimuler rotta med fiberen i midten av foten og trekk ut fiberen når rotta viser åpenbare bevegelser som å heve benet og unngå. Maskinen kan automatisk registrere maksimal trykkverdi (N) for øyeblikket.
    4. Start neste stimulering i samme rotte minst 15 s etter gjeldende stimulering. Ikke overskrid 5 s under hver stimulering for å forhindre sensibilisering for taktile stimuli i rottens poter. Gjenta testen 5x til forskjellen mellom de tre påfølgende målingene er ubetydelig (innen 10 N).
    5. Slett verdiene med store forskjeller (maksimums- og minimumsverdiene), og ta gjennomsnittet av de resterende tre verdiene som den mekaniske uttaksterskelen.
  3. Ventetid for poteuttak (PWL)
    1. Plasser rottene i et lite rom med gjennomsiktig herdet glass med en størrelse på 20 cm x 10 cm x 20 cm. Dekk toppen av rommet med et gjennomsiktig glassdeksel med ventilasjonshull. Hold temperaturen på den gjennomsiktige glassplaten på 28-30 °C, som rommet er plassert på.
    2. Sett rottene i dette miljøet i minst 30 minutter for å akklimatisere før starten av hver formelle test. Hvis rotter urinerer eller gjør fra seg i rommet, rengjør det med absorberende papir i tide for å unngå å påvirke den påfølgende varmeoverføringen med lysstråling.
    3. Fokuser spotlighten på midten av rottens fot og trykk på Start-knappen . Trykk på Stopp-knappen når rotta viser åpenbar oppførsel som fottilbaketrekning eller poteslikking og registrer tiden på dette tidspunktet. Bestrålingstiden for spotlight bør ikke overstige 20 s for å unngå skade på rottens hud.
    4. Utfør neste bestråling på samme rotte etter minst 10 minutter for å forhindre sensibilisering. Mål 5x på hver rotte.
    5. Fjern verdiene med store forskjeller (maksimums- og minimumsverdien). Ta gjennomsnittet av de gjenværende verdiene som PWL.

5. Forberedelse av prøver

  1. Utfør eutanasi på mus som beskrevet i 2.3.2.1.
  2. Synovial membran forberedelse
    1. Fest rotta i liggende stilling med en sprøytenål på et skumbrett med høyre bakre lem bøyd i bortføringen og ekstern rotasjon. Klyp opp huden rundt kneleddet med kirurgisk saks og utsett musklene rundt kneleddet hos rotter ved å kutte huden og deretter kutte den subkutane fascien.
    2. Ta patellarligamentet som et landemerke for å stripe muskelgruppene over patellarligamentet. Snitt avslutningen av patellarligamentet (ved tibial tuberositet) nøye og finn synovialmembranen når ligamentet klemmes oppover nedenfra.
    3. Klipp forsiktig av synovialvevet med oftalmisk saks og vask av blodet og synovialvæsken med forkjølt saltvann. Fest synovialmembranen i 4% paraformaldehyd i minst 48 timer etter å ha absorbert vann fra vevoverflaten med rent gasbind.
    4. Forbered prøven som i trinn 2.3.2.5- 2.3.2.6. Utfør scoring som i trinn 2.3.2.7.
  3. Utfører hematoksylin- og eosinfarging
    1. Avvoks til vann med xylen i 20 minutter, erstatt med en ny runde fersk xylen i 20 minutter, etterfulgt av behandling med vannfri etanol i 5 minutter, erstatt med en ny runde med fersk vannfri etanol i 5 minutter, tilsett deretter 90 volumprosent etanol i 5 minutter, 80 volumprosent etanol i 5 minutter, 70 volumprosent etanol i 5 minutter, og til slutt destillert vann i 5 min.
    2. Fordyp lysbildet i hematoksylinfargeløsning i 3-8 minutter. Fjern lysbildet og skyll av flekken med destillert vann. Flytt den inn i differensieringsvæsken (1% saltsyrealkohol) i nesten 30 s, slik at lysbildet blekner til lyseblått. Skyll det med destillert vann, og legg i eosinfargeløsning i 1-3 min.
    3. Dehydrer lysbildet med 95% etanolvolumfraksjon i 5 minutter, erstatt med en ny runde fersk 95% etanol i 5 minutter, etterfulgt av vannfri etanol i 5 minutter, erstatt med en ny runde med fersk vannfri etanol i 5 minutter.
    4. Gjør lysbildet gjennomsiktig ved å legge til xylen i 5 minutter, erstatt det med en ny runde frisk xylen i 5 minutter, og forsegl den deretter med nøytral harpiks.
  4. Terminal-deoksynukleotidyltransferase-mediert nick end labeling (TUNEL) på brusk
    1. Dehydrer bruskprøven i vannfri etanol, 90% etanol, 85% etanol og 75% etanol til avvoksingshydreringen er fullført. Bløtlegg PBS i 5 min. Tilsett 3% H2 O2 dråpevis i 10 minutter.
    2. Tilsett proteinase K arbeidsløsning dråpevis og fordøy ved 37 °C i 10 minutter. Tilsett 20 μL merkingsbuffer per skive for å holde den fuktig og rist av overflødig væske etter å ha forberedt arbeidsløsningen. Tilsett 20 μL arbeidsløsning på hvert lysbilde og rug i 2 timer ved 37 °C i en våt boks.
    3. Tilsett 50 μL av lukkeløsningen dråpe for dråpe og lukk i 30 minutter. Tilsett deretter 50 μL fortynnet biotinylert antidigoksinantistoff (1:100 fortynning) dråpevis og inkuber ved 37 °C i 2 timer i en våt boks. Tilsett 10 mikrol SABC-antistofffortynningsmiddel (1:100 fortynning) dråpevis og inkuber ved 37 °C i 2 timer i en våt boks.
    4. Tilsett DAB-fargeutviklingsløsning (50 μL hver av reagensene A, B og C i 1000 μL destillert vann) dråpevis i 10-15 min. Fargeutviklingen fullføres når den er brungul granulær.
    5. Re-flekk med hematoksylin i 3 s. Etter gradient dehydrering og gjennomsiktig behandling, tørk ved romtemperatur og tett lysbildet forsiktig med nøytral tannkjøtt. Vær oppmerksom på å unngå å forlate bobler og overfylt lim.
  5. Immunhistokjemisk analyse av IL-1β og TNF-α
    1. Devoks lysbildene rutinemessig i xylen og hydrer dem i gradientalkohol. Inaktiver den endogene peroksidasen i seksjonene med 3%H2O2. Plasser glideholderen i 95 °C citratbuffer (pH 6,0) og rug i vannbad over 95 °C i over 20 minutter. Ta ut inkubasjonsboksen og la den stå i romtemperatur i minst 20 minutter.
    2. Inkuber 5% normalt geiteserum med PBS i 10 minutter ved 37 °C og rist av overflødig væske. Tilsett 150 μL antistoff I dråpe for dråpe og la stå ved 37 °C i 1 time, og oppbevar deretter over natten ved 4 °C. Neste dag, varm opp igjen ved 37 °C i 45 minutter.
    3. Vask 3x med PBS i 5 min hver. Dekk vevet på lysbildet med 3 % BSA og forsegl det ved 37 °C i 30 minutter. Tilsett 150 μL antistoff II dråpe for dråpe og la stå i romtemperatur i 1 time. Vask 3x med PBS i 5 min hver og tilsett 150 pL DAB fargeutvikling væskedråpevis. Vær oppmerksom på graden av farging under mikroskopet til prøven blir brungul selv for det blotte øye.
    4. Skyll umiddelbart med PBS i 10 minutter. Flekk igjen med hematoksylin, dehydrer i gradientalkohol, gjør lysbilder gjennomsiktige i xylen og tett med nøytral tannkjøtt.
  6. Statistisk analyse
    1. Immunhistokjemisk fargede seksjoner med positivt uttrykk for det tilknyttede proteinet er gule eller brungule. Skår intensiteten av positivt uttrykk med Image J-programvare for hver gruppe immunhistokjemiske seksjoner og bruk evalueringskriteriene for gjennomsnittlig optisk tetthet (AOD), beregnet ved IOD delt på areal.
    2. Bruk analyseprogramvare for statistisk analyse. Bruk t-test hvis dataene samsvarte med normalfordeling og khikvadrat, og bruk ikke-parametrisk test hvis de ikke samsvarte med normalfordelingen. Analyser gjentatte måledata ved generaliserte estimeringsligninger.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Tester for smerteatferd
MWT-resultatene viste at MWT i høyre bakben etter modellering var signifikant lavere enn tidligere (s<0,05). Sammenlignet med kontrollgruppen var MWT hos rotter signifikant forhøyet etter Tuina (s<0,05; figur 5 og tabell 2).

Figure 5
Figur 5. Resultater av den mekaniske uttaksterskeltesten (Equation 1, Newton). Det var 5 rotter hver i Tuinagruppen og kontrollgruppen. MWT av rotter på forskjellige tidspunkter er vist i figuren. Etter modelleringen reduserte rotternes MWT betydelig, noe som tyder på at smerten hos rotter ble forverret, og KOA-modellen ble vellykket utarbeidet. Deretter ble MWT gradvis forbedret, noe som tyder på smertelindring. Den generaliserte estimeringsligningen ble brukt til statistisk beregning. Forskjellen i MWT mellom Tuinagruppen og kontrollgruppen var statistisk signifikant på dag 21 sammenlignet med den etter modellering. Sammenligningen mellom de to gruppene var statistisk signifikant ved D7, D14 og D21, *p<0,05. Videre har rotter i Tuina-gruppen høyere MWT enn i kontrollgruppen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Tabell 2. Mekanisk uttaksterskel ( Equation 1, n). Sammenligning før og etter modellering, #p<0.05. Sammenligning mellom Tuinagruppe og kontrollgruppe, *p<0,05. Klikk her for å laste ned denne tabellen.

PWL-resultatene viste at PWL i høyre bakben etter modellering var signifikant kortere enn tidligere (s<0,05). Sammenlignet med kontrollgruppen var MWT hos rotter signifikant forlenget etter Tuina (s<0,001; Figur 6 og tabell 3).

Figure 6
Figur 6. Resultater av latenstesten for poteuttak (Equation 1, andre). Det var 5 rotter hver i Tuinagruppen og kontrollgruppen. PWL av rotter på forskjellige tidspunkter er vist i figuren. Etter modelleringen reduserte rotternes PWL betydelig, noe som tyder på at smerten hos rotter ble forverret, og KOA-modellen ble vellykket utarbeidet. I begynnelsen var forbedringen av PWT i Tuina-gruppen langsommere enn i kontrollgruppen. Etter D7 forbedret rottene i Tuinagruppen seg raskt og overgikk kontrollgruppen ved D21. Den generaliserte estimeringsligningen ble brukt til statistisk beregning. Forskjellen i MWT mellom Tuinagruppen og kontrollgruppen var statistisk signifikant på dag 21 sammenlignet med den etter modellering. Sammenligningen mellom de to gruppene var statistisk signifikant ved D7, D14 og D21, ***p<0,001. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Tabell 3. Latensforsinkelse for poteuttak (Equation 1, s). Sammenligning før og etter modellering, #p<0.05. Sammenligning mellom Tuina-gruppen og kontrollgruppen, ***p<0.001. Klikk her for å laste ned denne tabellen.

Histomorfologisk analyse
Ved analyse av synovialmembranen i kontrollgruppen ble det sett inflammatorisk celleinfiltrasjon og fibrøs vevshyperplasi i synovialvev. Synovialcellene var uorganiserte, og man så en liten mengde kapillærhyperplasi rundt leddvevet (figur 7).

Figure 7
Figur 7. Mikroskopisk observasjon av synovialvevet. (A) Synovialvev i kontrollgruppen. Det uorganiserte arrangementet av synoviale celler er sett i figuren. De prolifererende karene er merket med røde piler, og betennelsesceller er merket med svarte piler. (B) Synovialvev i Tuina-gruppen. Synoviale celler var mer pent arrangert. Inflammatoriske celler distribueres hovedsakelig i kantene i stedet for å infiltrere innover. De prolifererende karene er merket med røde piler, og betennelsesceller er merket med svarte piler. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

I Tuina-gruppen var synovialceller pent arrangert, med en liten mengde inflammatorisk celleinfiltrasjon, fibrøs vevshyperplasi og en liten mengde kapillær hyperplasi synlig ved vevsmarginene.

Ved analyse av brusken så man at det positive området TUNEL i Tuinagruppen var signifikant mindre enn i kontrollgruppen, noe som indikerer at det var færre apoptotiske kondrocytter i Tuinagruppen (figur 8).

Figure 8
Figur 8. TUNEL farging av brusk. (A) Brusk i kontrollgruppen. Den røde delen av figuren er det positive området med TUNEL-farging. (B) Brusk i Tuina-gruppen. Den røde delen av figuren er det positive området med TUNEL-farging. Det positive området i Tuina-gruppen er betydelig mindre enn i kontrollgruppen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Immunhistokjemi
For TNF-α var det signifikant forskjell i synovialt TNF-α-uttrykk mellom de to gruppene, og uttrykket i Tuinagruppen var signifikant lavere enn i kontrollgruppen (tab 4).

Tabell 4. TNF-α uttrykk i synovium (Equation 1, *10-2). To uavhengige t-test for utvalg ble brukt til statistisk analyse, *p<0,05. Klikk her for å laste ned denne tabellen.

For IL-1β var det ingen signifikant forskjell i mengden synovialt IL-1β-uttrykk mellom de to gruppene, målt ved statistikken til bilde J. Gjennomsnittsverdien for Tuinagruppen var imidlertid subtilt lavere, noe som indikerer mindre uttrykk (tabell 5).

Tabell 5. IL-β uttrykk i synovium (Equation 1, *10-2). To uavhengige t-test for utvalg ble brukt til statistisk analyse. Klikk her for å laste ned denne tabellen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denne studien gir en protokoll for Tuina-manipulering på KOA-rotter. Gjennom smerteadferdstester og histomorfologiske funn foreslo det at en slik serie Tuina-manipulasjon brukt på KOA-rotter kunne redusere synovial betennelse og bruskaboptose, noe som kunne være en referanse til Tuina-manipulasjon på dyremodeller av KOA.

Det er flere kritiske prosedyrer under protokollen. For det første er det viktig å velge en passende metode for å indusere KOA-modellen. Det finnes ulike metoder for å indusere KOA-modellen, inkludert leddhuleinjeksjon25, intraartikulær kirurgi 26,27, leddbremsemetode 28,29 osv. Siden KOA-modeller indusert av invasive metoder ville etterlate sår nær leddene, noe som kan forstyrre effekten av Tuina-manipulasjon, valgte vi den ikke-invasive metoden for leddimmobilisering. Den felles immobiliseringsmetoden kan deles inn i hyperekstensjon og hyperfleksjonsfiksering. Shang et al. sammenlignet effekten av disse to fikseringsmetodene og fant at det var liten forskjell i effekten av bruskaboptose23. Imidlertid var deres eksperimentelle kaniner, som er større i størrelse og relativt enkle å fikse sammenlignet med rotter. Fast gips i fleksjonsstilling er mer sannsynlig å falle av under rotter som gnager. Derfor valgte vi immobiliseringsmetoden for hyperekstensjonsfiksering for å indusere KOA. Vi viste til He et al. og brukte gipsbandasjen med tungedemper som fikseringsanordning30. Imidlertid var rotters gnaveevne sterkere enn forventet, og enheten kunne ikke tjene som fiksering. Senere fant vi et slags protesebasismateriale, som kan danne et formbart, men hardt skall på utsiden av gipset, og effektivt redusere slitasjen på fikseringsenheten ved at rotter gnager. En tett fiksering ville påvirke blodsirkulasjonen i underekstremitetene, mens for løs fiksering ville være lett å falle av. Derfor bør sirkulasjonen av rottens nedre lemmer observeres daglig i løpet av de 3 ukene med modellering. Fikseringen skal frigjøres når underdelene blir hovne og lilla. Installer fikseringen på nytt når den er løs, og rottene kan bøye knærne. Under denne studien ble rottene ikke begrenset fra å sosialisere seg under modellering, men det ble funnet at de ville tygge hverandres fiksering for å hjelpe hverandre å bryte fri. Kanskje ville isolering av rottene ha resultert i bedre modellering. Imidlertid kan isolasjon bidra til rotternes depresjon og stereotype oppførsel.

Vi anser at nøkkelpunktet med Tuina-manipulasjon er å holde konsistensen av intensiteten og frekvensen. Tidligere forskning konkluderte med at den optimale intensiteten for dyr Tuina bør være 80% av sin maksimale tolerable intensitet31. På dette tidspunktet skal rottene vise tegn på å motta mekanisk stimulering, men uten tegn på smerte eller potetilbaketrekning. Vi testet den maksimale tolerable intensiteten til rotter, som er rundt 5-8 N. Så vi setter skyveintensiteten til 3-5 N, noe som kan føre til bedre effekt. Frekvensen av manipulasjonen er 2 Hz, ifølge læreboken til Tuina. Tidligere studier har ikke satt en standardisering for Tuina-manipulasjon, og intensiteten og frekvensen kan variere etter å ha operert forskjellige akupunkter og endret venstre og høyre hånd under forsøket, noe som kan påvirke nøyaktigheten av resultatene. Fingertrykkopptakene som brukes i dette eksperimentet gir sanntidsobservasjon av intensiteten og frekvensen av manipulasjonen under forsøket, noe som kan holde konsistensen av manipulasjonen. Noen lærde bruker maskiner for å simulere Tuina-manipulasjon og bruke den på dyr, noe som har fordelen av standardisering av manipulasjonen32.

For valg av akupunkter henviste vi til studien til Wang og Liu og valgte fem akupunkter rundt kneleddet for å lette manipulasjon33,34. Vi valgte den gipsimmobiliserte metoden for å indusere KOA, som stort sett ender opp med muskelatrofi og leddstivhet35. ST34 og ST35 tilhører foten Yangming mage meridianen som er kritisk i behandling av atrofi (for det meste manifestert som svakhet og muskelatrofi) i tradisjonell kinesisk medisin teori og har god tilpasningsevne for KOA indusert av gips-immobilisert metode. EX-LE4 er et vanlig akupunkt for klinisk behandling av KOA, mest brukt sammen med ST35. Tan et al. fant at akupunktur og moxibustion på ST35, ST36 og EX-LE4 kunne redusere inflammatorisk faktoruttrykk i synovialmembranen36. SP10 og BL40 er kjerneakupunktene i klinisk Tuina-behandling for KOA 37,38, og SP10 brukes hyppigst i Tuina-resepter for KOA39.

En vanskelig del av Tuina-manipulasjon er fiksering av rotter. Rotter kan kjempe eller unngå manipulasjon, noe som øker vanskeligheten ved å utføre forsøket. Selv om rottestartsperre kan immobilisere rotter og avsløre bakre lemmer, begrenser utviklingen av KOA bakre lemmerfleksjon og forlengelse. Derfor kan sedimentering av rotter med startsperre føre til smerte og ufullstendig eksponering av bakre lemmer, noe som kan påvirke Tuina-manipulasjon. Vi designet en tøypose med én utgang basert på rottens preferanse for mørke omgivelser og dens tendens til å grave seg ned. Lukk klutposen når rotta kommer inn, det vil si at hodet og forbenene er plassert i posen, og bakre lemmer er utsatt utenfor. Denne metoden kan effektivt redusere rotters kamp og holde dem stille under Tuina.

Resultatene av pre-eksperimentet antyder at Tuina-manipulering kan redusere den inflammatoriske responsen av synovialvev og redusere apoptosen av kondrocytter, og dermed fungere som en behandling for KOA. Imidlertid er det behov for flere studier for å bekrefte dette.

Det er flere mangler ved denne protokollen. For det første gjør den lille størrelsen på rotter det vanskelig å lokalisere akupunktene nøyaktig. Operatørens fingre er for store sammenlignet med akupunktene på rotter, noe som kan påvirke effekten av Tuina-manipulasjon. Vi hadde vurdert å legge til en gummipartikkel på ca. 2 mm i diameter på fingertuppen for å øke nøyaktigheten av stimulerende akupunkter. Men partiklene kan føre til høyere intensitet av trykk og øke vanskeligheten med å kontrollere konsistensen. I tillegg var det mer sannsynlig å skade fingertrykkopptakene, så vi valgte ikke denne metoden. For det andre ignorerte vår studie endringen av inflammatoriske faktorer i synovialvæsken og kondrocyttapoptose, noe som kan svekke studiens troverdighet. Vi vil intensivere forskningen på dette området fremover. For det tredje er presse- og eltemanipulasjon en av Tuina-manipulasjonene, og kan ikke omfatte effekten av Tuina ved behandling av KOA. Andre Tuina-manipulasjoner implementert i dyr må utforskes nærmere, inkludert leddbevegelsesmanipulasjoner og gnidningsmanipulasjon. Videre vil positiv kontroll bedre vise effektiviteten av manipulasjonen, men den ble ikke designet i denne studien, og vi vil legge til dette i en oppfølgingsstudie.

Samlet sett gir denne studien en standardisert protokoll for Tuina-manipulering på KOA-rotter, og effektiviteten av manipulasjonen er verifisert av smerteadferdstester og mikroskopiske funn. Protokollen foreløpig beviser at de terapeutiske effektene av Tuina kan være relatert til å redusere synovial betennelse og forsinket kondrocytt apoptose. Mer forskning er nødvendig for å utforske mekanismen til Tuina for KOA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer at de ikke har noen konkurrerende interesser.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av Shanghai Critical Clinical Specialties Construction Project (tilskuddsnummer: Shslczdzk04001); seilingsprogrammet til Shanghai Science and Technology Commission (tilskuddsnummer: 22YF1444300); Prosjekter innenfor budsjettet til Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (Grant Number: 2021LK091).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
absolute ethanol Supelco PHR1070 For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus ahlborn 2450-1 For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody Sigma-Aldrich SAB4200669 For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta abcam ab283818 For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit Solarbio DA1010 For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials Shanghai New Century 20000356 For model making
eosin bioswamp  PAB180016  For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings Suzhou Changxian Optoelectronic Technology CX1003w For Tuina manipulation
formic acid solution Sigma-Aldrich 695076 For decalcification
H2O2 Sigma-Aldrich 386790-M For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin bioswamp  PAB180015 For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company S10010533 For gas anesthesia
neutral resins bioswamp  PAB180017 For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution Sigma-Aldrich 100496 For histology
PBS Sigma-Aldrich P3813 For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus IITC Life Science / For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage WANDE 20150023 For model making
Proteinase K Sigma-Aldrich 124568 For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody Proteintech 60291-1-Ig For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL  Servicebio GDP1042 For HE stain IHC or TUNEL
Wax Sigma-Aldrich 327204 For making specimen
xylene Shanghai Sinopharm Group 100092 For making specimen

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Joint Surgery Group of Chinese Orthopaedic Association, Chinese Association of Orthopaedic Surgeons, National Clinical Research Center for Geriatric Diseases, Chinese Journal of Orthopaedics. Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Orthopaedics. 41 (18), 24 (2021).
  2. David, S., et al. Epidemiology of knee osteoarthritis in general practice: a registry-based study. BMJ Open. 10 (1), 031734 (2020).
  3. Callahan, L. F., Cleveland, R. J., Allen, K. D., Golightly, Y. Racial/Ethnic, Socioeconomic, and Geographic Disparities in the Epidemiology of Knee and Hip Osteoarthritis. Rheumatic Disease Clinics of North America. 47 (1), 1-20 (2021).
  4. Wang, K., Dong, X., Lin, J. H. Investigation of Medical Costs of Disease In Patients With Osteoarthritis of the Knee Joint. National Medical Journal of China. 97 (1), 4 (2017).
  5. Perlman, A., et al. Efficacy and Safety of Massage for Osteoarthritis of the Knee: a Randomized Clinical Trial. Journal of General Internal Medicine. 34 (3), 379-386 (2019).
  6. Xing, H., et al. Therapeutic massage for knee osteoarthritis: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Journal of Acupuncture and Tuina Science. 19 (5), 354-363 (2021).
  7. Seo, B. R., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science translational medicine. 13 (614), (2021).
  8. Wu, J. H., Zhang, C., Dong, S. J., Yin, H. Effects of Massage with #34;Relaxing Tendons" Technique on the Interleukin-1B and 5-hydroxytryptamine Levels in the Joint Fluid of a Rabbit Knee Osteoarthritis Model. Chinese General Practice. 21 (6), 688-693 (2018).
  9. Luo, R. The effects of IL-1B,IL-6,IL-13,IL-26,TNF-a by patellar manipulations on rabbit knee osteoarthritis model. Guangxi University of Traditional Chinese Medicine. , (2017).
  10. Qiu, F., Li, C., Wu, X., Liu, Y., Zhang, X. Effect of Massage on the Function of Foot-Yangming Meridian-Muscle in Patients with Knee Osteoarthritis. Acta Chinese Medicine. 36 (3), 649-655 (2021).
  11. Yang, B., Li, S. Research Progress of Massage in Improving Biomechanical Indexes of Knee Osteoarthritis. Acta Chinese Medicine. 37 (12), 2571-2576 (2022).
  12. Li, C., Qiu, F., Ding, J., Hu, G., Zhang, X. Curative Observation of Retaining of Heated Needle at Trigger Points Combined with Manipulation for Muscles along Meridians in Treating Knee Osteoarthritis. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 37 (11), 2157-2162 (2020).
  13. Ding, X., Zhang, X., Hou, Y., Zhao, Z., Ye, X. Effect of massage manipulation on joint stiffness of knee osteoarthritis patients based on "spine-pelvis-knee" holistic diagnosis and treatment pattern. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine. 55 (08), 54-57 (2021).
  14. Fu, Y., Gong, L., Li, Y. The clinical studies of Rolling combined with Pulling Manipulation on Early and Middle-term. Jilin Journal of Chinese Medicine. 40 (07), 958-962 (2020).
  15. Jiang, J., Hu, X., Tang, R., Qiu, F., Huang, L. Change of lower limb force line in treating knee osteoarthritis with manipulation. Journal of Changchun University of Chinese Medicine. 34 (01), 129-132 (2018).
  16. Liang, Y., et al. Some issues on animal experiments standardization of acupuncture and moxibustion. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 25 (09), 2299-2300 (2014).
  17. Guo, Y., Liu, Y., Liu, Q., Chen, Z., Zhao, X. Basic System of Chinese Acupuncture Standard. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 31 (6), 549-550 (2011).
  18. YAN, X., Yan, J. Study on the Standardization of Classification of Tuina Manipulation. Acta Chinese Medicine. 32 (5), 875-878 (2017).
  19. Aikebaier, G., Lu, X., Liu, J., Liu, l, Wang, S. Analysis on Manipulation and Acupoint Selection Laws of Massage for Treatment of Knee Osteoarthritis Based on Data Mining Technology. Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine. 29 (5), 23-29 (2022).
  20. Gong, L., Wuquan, S., Zhang, H., Chen, Z. Research of Yan Juntao's Academic Experiences of Differential Treatment and Manipulation for Treating of Knee Osteoarthritis. Chinese Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics. 24 (7), 16-19 (2016).
  21. Qian, J., Xing, X., Liang, J. Two Methods to Establish Rat Model of Osteoarthritis of the Knee. Research and Exploration in Laboratory. 33 (11), 23-27 (2014).
  22. Liu, J., et al. Experimental study of a modified Videman method for replicating knee osteoarthritis on rabbit. Rehabilitation Medicine. 30 (03), 212-219 (2020).
  23. Moskowitz, R. W. Osteoarthritis cartilage histopathology: grading and staging. Osteoarthritis and Cartilage. 14 (1), 1-2 (2005).
  24. Shen, M., Li, Z., Shen, J. Preliminary Exploration of Experiment Teaching on Experiment Acupuncture Science. Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 7 (02), 130-131 (2009).
  25. Jeong, J., et al. Anti-osteoarthritic effects of ChondroT in a rat model of collagenase-induced osteoarthritis. BMC complementary and alternative medicine. 18 (1), 131 (2018).
  26. Hulth, A., Lindberg, L., Telhag, H. Experimental osteoarthritis in rabbits. Preliminary report. Acta orthopaedica Scandinavica. 41 (5), 522-530 (1970).
  27. Tawonsawatruk, T., Sriwatananukulkit, O., Himakhun, W., Hemstapat, W. Comparison of pain behaviour and osteoarthritis progression between anterior cruciate ligament transection and osteochondral injury in rat models. Bone & Joint Research. 7 (3), 244-251 (2018).
  28. Zhou, Q., et al. Cartilage matrix changes in contralateral mobile knees in a rabbit model of osteoarthritis induced by immobilization. BMC musculoskeletal disorders. 16, 224 (2015).
  29. Zeng, J., et al. Establishment and identification of experimental rabbit model of knee osteoarthritis. Chinese Journal of Clinical Research. 29 (5), 679-682 (2016).
  30. Shang, P., et al. Comparison with two kind osteoarthritis animal models reduced by plaster immobilization in extend excessive position and bend excessive position respectively. Orthopaedic Biomechanics Materials and Clinical Study. (1), 11-14 (2006).
  31. He, Y., et al. Evaluation of the effect of improved cast immobilization method on rabbit knee osteoarthritis model. Chinese Imaging Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 18 (2), 198-219 (2020).
  32. Pengfei, S., et al. Possible mechanism underlying analgesic effect of Tuina in rats may involve piezo mechanosensitive channels within dorsal root ganglia axon. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (6), 834-841 (2018).
  33. Wang, Y. Mechanisms of Massage Mediating Chondrocyte Apoptosis in Knee Osteoarthritis Through Piezo 1/JAK2 Signaling Pathway. Shandong University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  34. Liu, J. Effect of Massage on TLR4/MyD88 Signal Transduction Pathway in Rat Knee Osteoarthritis Model. Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  35. Yu, S., Zhou, J., Pang, X. Advances in induced animal models of knee osteoarthritis. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 25 (5), 50-55 (2022).
  36. Tan, Q., et al. Acupuncture combined with moxibustion regulates the expression of circadian clock protein in the synovium of rats with osteoarthritis. Chinese Journal of Tissue Engineering Research. 26 (11), 1714-1719 (2022).
  37. Zhang, Z., et al. A Review of Massage Therapy for Knee Osteoarthritis. Henan Traditional Chinese Medicine. 39 (1), 146-149 (2019).
  38. Gong, L., Sun, W., Zhang, H., Chen, Z. Research of Yan Juntao's Academic Experiences of Differential Treatment and Manipulation for Treating of Knee Osteoarthritis. Chinese Journal of Traditional Medical Traumatology & Orthopedics. 24 (7), 16-19 (2016).
  39. Chen, C., Zhang, H. Research on the rules of acupoint selection for the treatment of knee osteoarthritis with massage based on data mining. Hainan Medical Journal. 29 (18), 2617-2619 (2018).

Tags

Medisin utgave 196
Tuina manipulasjon for å redusere betennelse og brusk tap i kneet slitasjegikt rotter
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W.,… More

Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W., Xing, H., Zhang, H. Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats. J. Vis. Exp. (196), e65451, doi:10.3791/65451 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter