הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן

3.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/65518

⸱

5 בינואר 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Renal Section, Department of Medicine, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 2Vascular Biology Section, Department of Medicine, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 3Division of Interventional Radiology, Department of Radiology, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 4Department of Medicine, Whitaker Cardiovascular Institute, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 5Department of Biochemistry and Cell Biology, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 6Veterans Affairs Boston Healthcare System, 7Institute of Medical Engineering and Sciences, Massachusetts Institute of Technology, 8Center of Cross-Organ Vascular Pathology, Department of Medicine, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University

במאמר זה

סיכום

מאמר זה נועד להציג שיטה אופטימלית להערכת פקקת ורידים במודל סרטן עכברים, באמצעות קליפסים וסקולריים להשגת קשירה ורידית. אופטימיזציה ממזערת את השונות במדידות הקשורות לפקקת ומשפרת את הרלוונטיות לפקקת ורידים הקשורה לסרטן אנושי.

תקציר

מאמר מתודולוגי זה מדגיש את הניואנסים הכירורגיים של מודל מכרסם של פקקת ורידי, במיוחד בהקשר של פקקת הקשורה לסרטן (CAT). פקקת ורידים עמוקים היא סיבוך שכיח בקרב מחלימים מסרטן ועלולה להיות קטלנית. המודלים הנוכחיים של פקקת ורידים מורין כוללים בדרך כלל חסימה מכנית מלאה או חלקית של הווריד הנבוב התחתון (IVC) באמצעות תפר. הליך זה גורם לקיפאון מלא או חלקי של נזק לדם ולאנדותל, ומפעיל טרומבוגנזה. למודלים הנוכחיים מגבלות כגון שונות גבוהה יותר במשקלי קרישי דם, שיעור תמותה משמעותי ועקומת למידה ממושכת. דו"ח זה מציג חידודים כירורגיים באמצעות קליפסים וסקולריים כדי להתמודד עם חלק ממגבלות אלה. באמצעות מודל עכבר סינגני של סרטן המעי הגס, השתמשנו בקליפסים מותאמים אישית של כלי דם כדי לקשור את הווריד האינפרא כלייתי קאווה. קליפסים אלה מאפשרים מרווח שפתיים שיורי בדומה לתפר פוליפרופילן 5-0 לאחר קשירת IVC. עכברים בשיטת התפרים שימשו כבקרות. שיטת קליפס כלי הדם הביאה לחסימה חלקית עקבית של כלי הדם ולמשקלי קריש גדולים יותר עם פחות שונות מאשר שיטת התפרים. משקלי הקריש הגדולים יותר, מסת הקריש הגדולה יותר והקריש לשטח הפנים הלומינלי IVC היו צפויים בשל פרופיל הלחץ הגבוה יותר של אטבי כלי הדם בהשוואה לתפר פוליפרופילן 6-0. הגישה אומתה על ידי אולטרה-סאונד בקנה מידה אפור, אשר חשף מסת קריש גדולה יותר באופן עקבי בווריד הווריד האינפרא כלייתי עם קליפסים וסקולריים בהשוואה לשיטת התפרים. תצפיות אלה אוששו עוד יותר עם צביעת האימונופלואורסצנטיות. מחקר זה מציע שיטה משופרת ליצירת מודל פקקת ורידים בעכברים, אשר ניתן להשתמש בו כדי להעמיק את ההבנה המכניסטית של CAT ובמחקר תרגומי כגון גילוי תרופות.

מבוא

טרומבואמבוליזם ורידי הקשור לסרטן (VTE)
הסיכון לטרומבואמבוליזם ורידי (VTE) גבוה פי 4 עד 7 במחלימים מסרטן בהשוואה לאוכלוסייה הכללית 1,2,3. מצב זה מתגלה כקטלני באחד מכל שבעה חולי סרטן. שכיחות VTE משתנה בהתאם לסוג הסרטן ולנטל הגידול והיא הגבוהה ביותר בקרב חולים עם סרטן הלבלב והקיבה4.

VTE הקשור לסרטן בחולי סרטן יש משמעות פרוגנוסטית. היא קשורה להישרדות כללית שלילית בשנה הראשונה לאחר אבחון סרטן, גם לאחר התאמה לגיל, גזע ושלב של סרטן בסיסי5. ממצאים אלה מדגישים את החשיבות של בחינת VTE הקשור לסרטן ואת הצורך לחקור את המנגנון שלו באמצעות מודל של בעלי חיים. הרלוונטיות התרגומית של תחום זה מודגשת עוד יותר על ידי העובדה כי VTE בחולי סרטן ניתן למניעה וניתן לטיפול עם טרומבופרופילקסיס וטיפול אנטיטרומבוטי6.

מודלים בעלי חיים של סרטן פקקת ורידים
מודלים של סרטן מכונים בדרך כלל xenografts, אשר כרוך הזרקה של תאים סרטניים בעכברים. הזרקת תאים סרטניים באתר כמו מוצאו מכונה מודל אורתוטופי, ואילו באתר אחר (מישור תת עורי מעל האגף) מכונה מודל הטרוטופי. מין המקור של תאי סרטן קובע אותם כמודל אלוגני, כגון קו התאים HT-29 (סרטן המעי הגס האנושי)7,8,9. להיפך, מודלים סינגניים משתמשים בקווי תאי סרטן מורין, כולל RenCa ו- MC-38 קווי תאים 3,10.

הספרות תיארה מודלים של פקקת עורקים, ורידים ונימים במכרסמים. פקקת ורידים נגרמת בווריד הנבוב התחתון (IVC) על ידי פגיעה מכנית (חוט מנחה) או קשירת IVC מלאה, כימית (ברזל כלורי), או פגיעה אלקטרוליטית. פקקת ברזל הנגרמת על ידי כלוריד או קשירת IVC מייצגת מודלים של חסימה מלאה. האחרון גורם לקיפאון של דם וחדירות דלקתיות בוורידים11,12,13. מודל הקשירה המלא מביא לשיעור גבוה של היווצרות פקקת ב-95% עד 100% מהעכברים. מודל קשירת IVC חלקית עשוי לכלול הפרעה של ענפים איליומותניים לטרליים, והחזרה הוורידית מתבטלת על ידי החלת קשירת תפרים בנקודות המטרה הדיסטליות של IVC12. לעיתים, נעשה שימוש במחזיק חלל כדי לקטוע את החזרה הוורידית באופן חלקי. עם זאת, משקל הפקקת אינו עקבי במודל החסימה החלקי הנוכחי, וכתוצאה מכך שונות גבוהה במשקלי קריש ובגבהים12,14.

לשני המודלים המכניים הגדולים הללו (חלקיים ומלאים) יש מגבלות. ראשית, קשירת IVC (מודל קיפאון) גורמת לעיתים קרובות ללחץ דם נמוך. הדם מוזרם דרך ורידי החוליות. אמנם בידיים מנוסות, התמותה במודל זה נעה בין 5%-30%, כאשר השיעור הגבוה יותר צפוי במהלך עקומת הלמידה. חשוב לציין, מודל החסימה המלאה אינו משחזר פקקת ורידים עמוקים (DVT) בבני אדם, שם פקקת בדרך כלל אינה חסימתית. חסימה מלאה עשויה לשנות גורמים דימולוגיים ופרמטרים פרמקודינמיים, ולשנות את הזמינות הביולוגית של תרכובות באתר המקומי. בשל מגבלות אלה, מודלים מלאים של חסימה עשויים שלא להיות אופטימליים לבדיקת תרכובות כימיות חדשות למטרות טיפוליות ותגליות תרופות12.

יש לציין כי כדי לספק מודל מוריני רלוונטי יותר מבחינה קלינית של פקקת ורידים עם ירידה בזרימה עם נזק לאנדותל, הוצג מודל פקקת ורידי, שבו DVT מופעל על ידי הגבלת זרימת הדם בהיעדר הפרעה אנדותל. המודל אומת על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים סורק15. מודל פקקת רלוונטי קלינית מועדף הוא מודל עם פקקת כמעט מלאה המאפשרת גילוי תרופות. היווצרות הקריש במודלים הנוכחיים של חסימה חלקית אינה עקבית, וכתוצאה מכך שונות גבוהה במשקל הקריש ובגבהים12,16. יתר על כן, משקל הקריש משתנה בשיטות הקונבנציונליות, ודורש יותר עכברים לכל מחקר12.

מודלים קודמים של פקקת הקשורה לסרטן התמקדו בסרטן המעי הגס, הלבלב והריאות וכולם היו מודלים של חסימה מלאה17,18,19. כתב היד הזה משנה את מודל פקקת החסימה החלקית כדי לספק לקרישי דם שונות נמוכה יותר ותמותת עכברים (איור 1). מחקרים קודמים השתמשו בשורות תאים אלוגניים של סרטן על עכברים אתימיים מדוכאי חיסוןרקע 19,20,21. כתב יד זה משתמש בקסנוגרפט סינגני של תאי MC-38 בעכברי C57Bl6/J, המאפשר שימוש בעכברים בעלי יכולת חיסונית ובדיקת רכיבים חיסוניים לטרומבוגנזה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

במחקר זה נעשה שימוש ב-16 נקבות עכברי C57Bl6/J, בגילאי 8-12 שבועות ובמשקל גוף של 20 עד 25 גרם. העכברים שוכנו בתנאים סטנדרטיים והוזנו בצ'או ובמים אד ליביטום. מחקר זה בוצע באישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) באוניברסיטת בוסטון. ההליכים הפתוחים המתוארים כאן נעשו במצב סטרילי.

1. מודל Xenograft

  1. תרבית תאים
    1. לפני ההשתלה ההטרוטופית התת עורית, יש לגדל תאי MC-38 כחד-שכבה למפגש של 80%.
    2. לאחר טריפסיניזציה והשעיה במדיה 10% המכילה FBS, תאי צנטריפוגות ב 277 x גרם, 4 ° C למשך 5 דקות. לאחר מכן, השהה מחדש את התאים במדיה נטולת סרום לריכוז של 1 x 104 תאי MC-38 / מדיה נטולת μL בסרום.
      1. עבור טריפסיניזציה, תרבית את תאי MC-38 עד שהם מגיעים למפגש הרצוי (בדרך כלל סביב 70%-80%) ולאחר מכן שאפו את מדיום התרבית מצלחת הפטרי.
      2. הוסף 1 מ"ל של תמיסת טריפסין-EDTA ודגר על התאים עם טריפסין במשך דקה אחת ב 37 ° C כדי לאפשר ניתוק. טפחו בעדינות או נערו את צלחת הפטרי כדי להבטיח ניתוק אחיד.
      3. הוסף מדיום תרבית המכיל סרום או מעכב טריפסין כדי לנטרל את הפעילות ולמנוע דיסוציאציה נוספת של התא. אספו את התאים המנותקים יחד עם תמיסת הטריפסין המנוטרלת.
      4. להשעיה, ברגע שהתאים מנותקים באמצעות טריפסיניזציה, הכינו אותם להשתלה או לניסויים נוספים. צנטריפוגה את תרחיף התא שנאסף ב 277 x גרם כדי pellet את התאים.
      5. בזהירות להסיר את supernatant (נוזל מעל גלולת התא). הוסף 9 מ"ל של מדיום תרבית, חיץ או תמיסה לגלולת התא כדי להשיג את ריכוז התא הרצוי להשתלה או לניסוי.
      6. השהה מחדש בעדינות את התאים על ידי פיפטציה למעלה ולמטה או באמצעות שייקר בקבוקים לתרבית. הימנע pipetting נמרץ שעלול להזיק לתאים.
        הערה: בהתאם לגרסה או לקו התאים שבהם נעשה שימוש, ניתן להשעות מחדש תאים ביחס של 1:1 של מטריצת קרום מרתף מסיסה ומדיה נטולת סרום כדי להאט את הצמיחה וההפצה של תאי עכבר אגרסיביים במיוחד לאחר ההשתלה. כל שלבי תרביות התאים צריכים להתבצע במכסה מנוע אספטי שלם בתרבית תאים שהוקצה במיוחד לשטח ונבדקו למיקופלסמה באופן קבוע.
    3. ספור את התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי בהתאם לפרוטוקול הידני שסופק.
  2. השתלת תאים
    1. הקצו באופן אקראי שמונה עכברים לקבוצת הניסוי, ושמונה עכברים לקבוצת הביקורת באופן הבא. בקבוצת הביקורת, יש להשתמש בעכברים עם קסנוגרפט MC38 ולבצע קשירת IVC בתפר פוליפרופילן 5-0. בקבוצת הניסוי, השתמשו בעכברים עם קסנוגרפט MC38 ובצעו קשירת IVC עם קליפס כלי דם מותאם אישית.
    2. מניחים את העכבר בשכיבה צידית שמאלית ומגלחים את צד ימין בין הגפיים הקדמיות והאחוריות. יש למרוח אלכוהול ויוד לאורך האזור המותני הגבי כדי להכין את האזור להזרקה.
    3. הזריקו 2 x 106 תאי MC-38 שהוכנו ב 200 μL של מדיום תת עורי באגף, באמצע הדרך בין הצלע הדיסטלית ביותר של החיה לבין בולטות האגן באמצעות מחט 27G תוך החזקת החיה בעדינות ביד הלא דומיננטית.
    4. לאחר ההזרקה, בדקו היטב את בעלי החיים והחזירו אותם לכלוב. בעלי החיים צריכים להיבדק עבור הדברים הבאים; 1. שינויים בהתנהגות, ברמות הפעילות ובניידות הכללית של העכברים. כל שינוי משמעותי עלול להצביע על אי נוחות או בעיות בריאותיות. 2. מצבם הגופני הכללי של העכברים, כולל איכות הפרווה, הרגלי טיפוח וכל סימן נראה לעין של מצוקה או חריגות 3. חזרה לצריכת מזון וצריכת מים 4. כל שינוי ברמת הפעילות, ביציבה או באינטראקציות שלהם עם חברים לכלוב. עייפות או תוקפנות מוגברת יכולים להיות סימנים למצוקה.

2. מעקב אחר צמיחת הגידול

  1. עקוב אחר בעלי החיים על בסיס דו-שבועי עבור מגמות צמיחת הגידול במשך 3-4 שבועות. למדוד את הגידולים עם קליפר ולרשום את ממדי הגידול.
    1. מדדו את הגידולים לאורך הציר הארוך ביותר שלהם (L) ואת הציר המאונך לציר הארוך (W). חשב את נפח הגידול (V) באמצעות המשוואה L x (W2) = V. אם גודל הגידול עולה על 20 מ"מ בכל ממד או שיש עדות לכיב, יש להרדים את בעלי החיים לפני סיום הניסוי.
  2. לאחר שנפח הגידול מגיע ל-400 מ"מ3, תכננו להשתמש בעכברים לקשירת IVC.

3. הרדמה והכנה

  1. מרדימים את העכבר בתא איזופלורן ומזריקים את משכך הכאבים תת עורית: מחזיקים את בעל החיים מבסיס הזנב. שמור את החיה על פני השטח הגבי של היד הלא דומיננטית.
  2. מעבירים את בעל החיים לתא השראת הרדמה רציפה מלא באיזופלורן 3%-4%. ודא הרדמה כללית נאותה עם היעדר רפלקס צביטת בוהן. יש להשתמש במינון תחזוקה של 1%-3% איזופלורן. יש למרוח משחה וטרינרית על שתי העיניים.
  3. הזרקה תת עורית עם buprenorphine (אופיואיד להקלה על כאב): להמיס את מלאי buprenorphine בריכוז של 0.3 מ"ג / מ"ל ב 0.9% נתרן כלורי (NaCl) כדי להשיג ריכוז של 0.03 מ"ג / מ"ל.
  4. יש להזריק מינון של 0.05-0.1 מ"ג/ק"ג של 0.03 מ"ג/מ"ל בופרנורפין יחד עם 500 מיקרוליטר של 0.9% NaCl סטרילי תת עורית לפני ניתוח. בכמות עכבר של 20 גרם של 2 מיקרוגרם או 66 מיקרוליטר של 0.03 מ"ג/מ"ל נדרש בופרנורפין.
  5. הכנת העור: הניחו את העכבר מורדם לחלוטין במצב שכיבה מעל שמיכת החימום. יש לחטא את אזור הבטן הקדמי בתמיסת כלורהקסידין 0.5%, 2x. לעתים קרובות לבדוק את הטמפרטורה של שמיכת חימום במהלך ההליך ולוודא כי הטמפרטורה לא נופל.

4. קשירת IVC

  1. לפרוטומיה בקו האמצע
    1. חתכו את עור הבטן עם מספריים עדינים החל מהבולטות הקסיפואידית ועד לשלפוחית השתן. צובטים את הצפק באמצע הדרך לאורך חתך העור עם מלקחיים א-טראומטיים. ודאו רווח הולם בין החתך למעי שמעליו (איור 2A).
    2. פתח את הצפק באופן אורכי יחד עם linea alba avascular.
  2. יציאה חיצונית של המעיים לצד ימין של הבטן
    1. משוך את המעיים עם קצות כותנה רטובים. מכסים את המעיים בגזה סטרילית לחה לחלוטין. ודא כי המעיים המכוסים נמצאים בכיוון ללא מתיחה ללא כל מתיחה מוגזמת על כלי הדם mesenteric.
  3. חשיפה מלאה של IVC וענפים, כולל מפגש של וריד הכליה השמאלי עם IVC (איור 2B).
    1. טיפה 200-300 μL של מלוחים רגילים. חקרו את מסלול השופכנים, IVC, אבי העורקים וורידי הכליה (איור 2).
  4. מישור כלי הדם בנקודת המפגש של IVC אינפרא כלייתי ומפגש ורידי הכליה השמאלי.
    1. מעבירים את תפר הפוליפרופילן 6-0 דרך מישור האווסקולרי בעדינות 2x-3x עם תנועות קאודליות לצפלדות עם המלקחיים הא-טראומטיים בקצה הסגור.
    2. יש לוודא שכל נוזל מינימלי נשלט בלחץ עדין המסופק עם טמפונדה עם קצה כותנה. הרחב את המישור שסופק על ידי העברת תפר פוליפרופילן 6-0 עם תנועות קאודליות עדינות לגולגולת.
  5. צריבת ענפי הגונדל והמותני (איור 2D)
    1. עד 4 ענפים אחוריים או מותניים עשויים להיות נוכחים. כדי למנוע סיבוכים פוטנציאליים של איסכמיה בעמוד השדרה וצליעה, השאר את ענפי המותניים שלמים בפרוטוקול הנוכחי.
    2. בדוק כי 2 עד 3 ענפים צדדיים, כולל אספקת עורקי קרן הרחם דו צדדית וכלי דם hypogastric נמצאים. להבטיח הפרעה עקבית של הסניפים הראשונים הנוכחיים באופן דו-צדדי. לצרוב את הענפים הדו-צדדיים רק דיסטליים למפגש של וריד הכליה השמאלי ו- IVC (IVC אינפרא כלייתי ). ודא כי כלי ניקוז ורידי של קרן הרחם אינם משובשים.
      הערה: צריבה צדדית נבחרת מכיוון ששיטה זו מספקת משטח חלק וללא הפרעה, ומפחיתה כל פוטנציאל לדימום בלתי מבוקר. יתר על כן, צריבה מהירה ואפשרית יותר מקשירת תפרים עם 10-0 תפרים. לכן, בעלי החיים ייחשפו להליך קצר ובטוח יותר.
  6. בדקו שוב את מהלך השופכן ואת כלי הדם כדי לוודא שאין צריבה נוטפת או לא מכוונת (איור 2C).
  7. קשירת IVC עם קליפסים וסקולריים בקבוצת הניסוי
    1. התאם אישית את אטבי כלי הדם ברוחב של תפר ניילון 2-0 על ידי מלקחיים א-טראומטיים. החל את קליפסי כלי הדם המותאמים אישית בקבוצת הניסוי סביב IVC אינפרא כלייתי.
    2. יש למרוח את תפסי כלי הדם על התפר. מעבר התפר הראשי מספק מישור אווסקולרי מספיק עם שתיים עד שלוש תנועות קאודליות לגולגולת קפדניות (איור 2E-F).
    3. עוד להעביר את קליפים כלי הדם דרך המטוס מוכן. הכינו את המישור במפגש של וריד הכליה השמאלי וה-IVC רחב מספיק כדי לאפשר מעבר קליפס ללא אירועים (איור 2E).
    4. מניחים את תפס כלי הדם המותאם אישית בצורה אופקית, בניצב למסלול IVC, דרך המישור המוכן. הניחו את אטבי כלי הדם מעל תפר פוליפרופילן 5-0 כדי להבטיח מספיק מקום שנותר (איור 2G).
    5. ודא כי השלבים לעיל מבוצעים בעדינות כדי למנוע כל נזק כלי דם או דימום באתר של קליפים כלי הדם. שימו לב לשדה הניתוחי לנטיפת פוטנציאל. יש להפעיל לחץ עדין עם קצה הכותנה על שדה הניתוח במקרה של נטיפה.
  8. קשירת IVC עם תפר בקבוצת הביקורת
    1. קשירת תפרים עם תפר פוליפרופילן 6-0. בצע תפר קשר מרובע כירורגי סביב IVC אינפרא כליות במישור מוכן מעל תפר משי 5-0.
    2. לאחר השלמת התפר, הסר בעדינות את תפר המשי כדי להבטיח מקום מספיק בשאריות.
  9. לבצע הזרקה תת עורית של 200 μL של מלוחים רגילים.
    הערה: כדי לספק טכניקה דומה לחסימה חלקית של IVC עם מריחת מהדק, תפס כלי הדם מותאם אישית במחקר הנוכחי כדי לספק רווח בין השפתיים. לאחר מכן ממוקם קליפ כלי הדם במישור האווסקולרי המוכן במפגש של וריד הכליה השמאלי וה- IVC.
  10. סגור את laparotomy עם ריצה רציפה 4-0 תפר vicryl.

5. מעקב לאחר ניתוח האינדקס

  1. יש להשגיח על בעל החיים ברציפות לאחר הניתוח במשך שעה אחת או עד להחזרת שיווי המשקל ויכולת התיקון, מה שמגיע ראשון בכלוב נקי ומבודד עד להחלמה מלאה.
  2. לפקח על החיה מדי יום במשך 2 ימים. אם בעל החיים נראה במצוקה, לפקח עליו פעמיים ביום במשך יומיים. ניהול שיכוך כאבים לאחר הניתוח ונוזלים לפי פרוטוקול.
    1. להמיס את מלאי buprenorphine עם ריכוז של 0.3 מ"ג / מ"ל ב 0.9% נתרן כלורי (NaCl) כדי להשיג את הריכוז של 0.03 מ"ג / מ"ל.
    2. יש להזריק מינון של 0.05-0.1 מ"ג/ק"ג של 0.03 מ"ג/מ"ל בופרנורפין תת עורית יחד עם 500 מיקרוליטר של 0.9% NaCl סטרילי, כל 8 עד 12 שעות במהלך 48 השעות הראשונות לאחר ניתוח המדד. בעכבר של 20 גרם, יהיה צורך ב-2 מיקרוגרם או 66 מיקרוליטר של 0.03 מ"ג/מ"ל בופרנורפין.

6. המתת חסד וקצירת IVC המכיל את הקריש

  1. מרדימים את העכבר בתא איזופלורן, מחזיקים את בעל החיים מבסיס הזנב ושומרים אותו על משטח הגב של היד.
  2. מעבירים את בעל החיים לתא השראת הרדמה רציפה מלא באיזופלורן 3%-4%. הניחו את בעל החיים במצב שכיבה.
  3. בצע לפרוטומיה ארוכה בקו האמצע החל מהקסיפואיד ועד לשלפוחית השתן כמתואר.
  4. הגדירו את המעי לצד ימין של הבטן וקצרו את ה-IVC הדיסטלי המהודק לביפורקציה האיליאק עד לרמה של IVC אינפרא-כלייתי (איור 2G).
  5. לאחר קצירת הקריש והגידול, יש להרדים את בעל החיים עם נקע צוואר הרחם.

7. ניתוח סטטיסטי

  1. הצג ניתוח סטטיסטי כממוצע, חציון וסטיית תקן (SD) או שגיאת תקן של הממוצע (SEM), אחוזון 25 או 75, או את כל טווח הערכים, כולל ערכי מינימום ומקסימום, לפי הצורך. בצע מבחן t לתלמיד, ואת מבחן F לפי הצורך. להעריך מובהקות סטטיסטית ברמת p <0.05.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

לקבוצה של נקבות עכברי C57Bl6/J, בנות 8-12 שבועות, הוזרקו תאי MC-38 בשלב הלוגריתמי של גדילת התא. הקסנוגרפטים גדלו במהירות בין השבוע השלישי לרביעי לאחר ההזרקה18. ברגע שהגידולים הגיעו לנפח ממוצע של 400 מ"מ3, עכברים חולקו באופן אקראי לקבוצות הביקורת והניסוי. קבוצת הביקורת עברה קשירת IVC עם תפר, ואילו עכברי הניסוי עברו קשירת IVC עם יישום קליפס כלי דם. נפחי הגידול בקבוצת הביקורת ובקבוצות הניסוי היו דומים ללא הבדלים משמעותיים (353 ± 100 מ"מ 3 לעומת 367 ± 46.2 מ"מ3, p = 0.445).<...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

במודל סינגני של סרטן המעי הגס, אנו רואים טרומבוגניות גבוהה יותר וביטויים גבוהים יותר של סמני קרישה בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת הביקורת. חשוב לציין כי השונות בכל הפרמטרים הללו הייתה נמוכה יותר בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת הביקורת. השינוי כלל החדרת קליפ כלי דם עם פרופיל לחץ ספציפי בנקודת המפגש של IVC ווריד הכליה השמאלי. הקליפ הונח מעל ספייסר, שהיה תפר פוליפרופילן 5-0. שינוי זה מפחית את השונות בגודל הקריש ובסמני פקקת. כל העכברים חוו 100% הישרדות.

ניואנסים טכניים
ההליך כלל תשו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי AHA קרדיו-אונקולוגיה SFRN CAT-HD CENTER GRANT 857078 (KR, VCC, XY ו- SL) ו- R01HL166608 (KR ו- VCC).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
בופרנורפין 0.3 מ"ג/מ"לPAR פרמצבטי&nbsp; NDC 42023-179-05
עכברי C57BL/6Jמעבדת ג'קסוןIMSR_JAX:000664
קליפרVWR International, רדנור, פנסילבניה12777-830
CD31AbcamAb9498
מונה תאיםMOXIEMXZ000
מהדק  כלים מדעיים    13002-10
קליפים ASSI. מהדק יחיד B2V, מטרה כללית,כירורגי מדויק & מכשירים מדעייםPR 2 144.50 289.00
Dumont #5SF מלקחייםכלים מדעיים עדינים11252-00
פיבריןMilliporeMABS2155-100UG
מספריים עדינים - לולאות גדולותכלי מדע עדינים14040-10
מלקחיים  Fine Science Tools11002-12
Hill HemostatFine Science Tools13111-12
Isoflurane, USP  CovetrusNDC 11695-6777-2
MC-38 תאסיגמא אולדריץ'SCC172
מיקרוסקופניקון אקליפס מיקרוסקופ הפוךTE2000
מספריים  כלי מדע עדין  14079-10
תפירה- ויקרילAD-כירורגי#L-G330R24
תפירה-ניילון 2-0אתילון664H
תפירה-פרולן 5-0אתיקון8661G
תפירה-פרולן 6-0אתיקוןPDP127
VEV03100VisualSonicsFujiFilm
Vitrogel מטריג'ל מטריקסהבאר ביו-סיינסVHM01 

מקורות

  1. Blom, J. W., et al. Incidence of venous thrombosis in a large cohort of 66,329 cancer patients: results of a record linkage study. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 4 (3), 529-535 (2006).
  2. Gabre, J., et al. Activated protein C accelerates venous thrombus resolution through heme oxygenase-1 induction. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 12 (1), 93-102 (2014).
  3. Chang, Y. S., et al. Sorafenib (BAY 43-9006) inhibits tumor growth and vascularization and induces tumor apoptosis and hypoxia in RCC xenograft models. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 59 (5), 561-574 (2007).
  4. Khorana, A. A., Kuderer, N. M., Culakova, E., Lyman, G. H., Francis, C. W. Development and validation of a predictive model for chemotherapy-associated thrombosis. Blood. 111 (10), 4902-4907 (2008).
  5. Chew, H. K., Wun, T., Harvey, D., Zhou, H., White, R. H. Incidence of venous thromboembolism and its effect on survival among patients with common cancers. Archives of Internal Medicine. 166 (4), 458-464 (2006).
  6. Leiva, O., Newcomb, R., Connors, J. M., Al-Samkari, H. Cancer and thrombosis: new insights to an old problem. Journal de Medecine Vasculaire. 45 (6S), 6S8-6S16 (2020).
  7. Chen, N., et al. Bevacizumab promotes venous thromboembolism through the induction of PAI-1 in a mouse xenograft model of human lung carcinoma. Molecular Cancer. 14, 140(2015).
  8. Goto, H., et al. Activity of a new vascular targeting agent, ZD6126, in pulmonary metastases by human lung adenocarcinoma in nude mice. Cancer Research. 62 (13), 3711-3715 (2002).
  9. Jiang, Y., et al. Inhibition of anchorage-independent growth and lung metastasis of A549 lung carcinoma cells by IkappaBbeta. Oncogene. 20 (18), 2254-2263 (2001).
  10. Salup, R. R., Wiltrout, R. H. Adjuvant immunotherapy of established murine renal cancer by interleukin 2-stimulated cytotoxic lymphocytes. Cancer Research. 46 (7), 3358-3363 (1986).
  11. Deatrick, K. B., et al. The effect of matrix metalloproteinase 2 and matrix metalloproteinase 2/9 deletion in experimental post-thrombotic vein wall remodeling. Journal of Vascular Surgery. 58 (5), 1375.e2-1384.e2 (2013).
  12. Diaz, J. A., et al. Choosing a mouse model of venous thrombosis: a consensus assessment of utility and application. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 17 (4), 699-707 (2019).
  13. Henke, P. K., et al. Toll-like receptor 9 signaling is critical for early experimental deep vein thrombosis resolution. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 31 (1), 43-49 (2011).
  14. Liu, H., et al. Inferior vena cava stenosis-induced deep vein thrombosis is influenced by multiple factors in rats. Biomedicine & Pharmacotherapy. 128, 110270(2020).
  15. von Brühl, M. L., et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo. The Journal of Experimental Medicine. 209 (4), 819-835 (2012).
  16. Brill, A., et al. von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models. Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).
  17. Stark, K., et al. Distinct Pathogenesis of Pancreatic Cancer Microvesicle-Associated Venous Thrombosis Identifies New Antithrombotic Targets In Vivo. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 38 (4), 772-786 (2018).
  18. Belghasem, M., et al. Metabolites in a mouse cancer model enhance venous thrombogenicity through the aryl hydrocarbon receptor-tissue factor axis. Blood. 134 (26), 2399-2413 (2019).
  19. Tracz, A., Mastri, M., Lee, C. R., Pili, R., Ebos, J. M. Modeling spontaneous metastatic renal cell carcinoma (mRCC) in mice following nephrectomy. Journal of Visualized Experiments. (86), e51485(2014).
  20. Lertkiatmongkol, P., Liao, D., Mei, H., Hu, Y., Newman, P. J. Endothelial functions of platelet/endothelial cell adhesion molecule-1 (CD31). Current Opinion in Hematology. 23 (3), 253-259 (2016).
  21. Payne, H., Brill, A. Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis. Journal of Visualized Experiments. (130), e56697(2017).
  22. Yabit, F., Hughes, L., Sylvester, B., Tiesenga, F. Hypersensitivity Reaction Post Laparoscopic Cholecystectomy Due to Retained Titanium Clips. Cureus. 14 (6), e26167(2022).
  23. Nagorni, E. A., et al. Post-laparoscopic cholecystectomy Mirizzi syndrome induced by polymeric surgical clips: a case report and review of the literature. Journal of Medical Case Reports. 10, 135(2016).
  24. Zemelka-Wiacek, M. Metal Allergy: State-of-the-Art Mechanisms, Biomarkers, Hypersensitivity to Implants. Journal of Clinical Medicine. 11 (23), 6971(2022).
  25. Poyyamoli, S., et al. May-Thurner syndrome. Cardiovascular Diagnosis and Therapy. 11 (5), 1104-1111 (2021).
  26. Streiff, M. B., et al. NCCN Guidelines Insights: Cancer-Associated Venous Thromboembolic Disease, Version 2.2018. Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 16 (11), 1289-1303 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

תרומבוזה הקשורה לסרטןסגורי כלי דםהווריד הרחב התחתוןמודל קסנוגרפטהיווצרות קרישצביעה אימונופלורסצנטיתאולטרסונוגרפיהביטוי פיברין
בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.