Etablierung eines Oronasale Fistel-Mausmodells

Summary

In diesem Artikel wird eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Etablierung eines Mausmodells mit einer Mund-Nasen-Fistel beschrieben. Die oronasale Fistel wurde durch den Einsatz eines erhitzten ophthalmologischen Kauters erzeugt, um den Mittellinienteil des harten Gaumens zu schädigen, was zur Bildung einer Öffnung zwischen Mund- und Nasenhöhle führte.

Abstract

In dieser Studie wird eine Methode vorgestellt, bei der erhitzter ophthalmologischer Kauter verwendet wird, um ein tragfähiges Modell für die Untersuchung oronasaler Fisteln zu entwickeln. C57BL/6-Mäuse wurden verwendet, um das Modell der oronasalen Fistel (ONF) zu etablieren. Um die ONF zu erzeugen, wurden die Mäuse betäubt, immobilisiert und ihre harten Gaumen freigelegt. Während des chirurgischen Eingriffs wurde eine 2,0 x 1,5 mm große Schleimhautverletzung in voller Dicke in der Mittellinie des harten Gaumens mittels ophthalmologischem Kauter induziert. Es war entscheidend, die Größe des ONF zu kontrollieren und Blutungen zu minimieren, um den Erfolg des Experiments sicherzustellen. Die Überprüfung der Wirksamkeit des ONF-Modells wurde am 7. Tag nach der Operation durchgeführt und umfasste sowohl anatomische als auch funktionelle Beurteilungen. Das Vorhandensein der Nasenscheidewand in der Mundhöhle und der Abfluss von sterilem Wasser aus den Nasenlöchern bei Injektion in die Mundhöhle bestätigten die erfolgreiche Etablierung des ONF-Modells. Das Modell zeigte eine praktische und erfolgreiche Mund-Nasen-Fistel, die durch eine niedrige Mortalitätsrate, signifikante Gewichtsveränderungen und minimale Variationen in der ONF-Größe gekennzeichnet ist. Zukünftige Studien könnten die Anwendung dieser Methodik in Betracht ziehen, um die Mechanismen der Wundheilung am Gaumen aufzuklären und neue Behandlungen für oronasale Fisteln zu erforschen.

Introduction

Die oronasale Fistel (ONF), eine abnorme Öffnung zwischen Mund- und Nasenhöhle, manifestiert sich klinisch als Defekt in einem strukturellen Bereich vom Alveolarfortsatz bis zum Zäpfchen, der häufig als Komplikation nach einer Gaumenspaltenreparatur auftritt¹. Patienten mit ONF leiden unter Nahrungsreflux, Artikulationsstörungen und einer Beeinträchtigung der velopharyngealen Funktion, was ihre Lebensqualität erheblich beeinträchtigt ^2,3,4. Die postoperative ONF-Rate liegt zwischen 2,4 % und 55 %, was auf Faktoren wie Spaltbreite, Veau-Typ und Operationsmethode zurückzuführen^ist 5,6,7,8. Darüber hinaus ist die Rezidivrate nach einer ONF-Reparatur hoch und liegt zwischen 0 % und 43 %⁹.

Mehrere neuartige Behandlungen haben sich in letzter Zeit auf dem Gebiet der ONF als vielversprechend erwiesen, darunter verschiedene Materialien, Medikamente und neuartige Techniken 10,11,12,13,14,15,16,17. Eine genaue Bewertung der therapeutischen Effekte ist von entscheidender Bedeutung, da sie die Grundlage für die Auswahl und Weiterentwicklung von ONF-Behandlungen bildet. Es ist jedoch schwierig, kurzfristig eine valide Bewertung für andere therapeutische Wirkungen als die Operation zu erhalten, da die Eigenschaften von ONFs von Patient zu Patient unterschiedlich sind. Daher ist die Etablierung eines ONF-Krankheitsmodells notwendig, um die Wirksamkeit dieser Behandlungsmethoden zu überprüfen.

Seit mehreren Jahrzehnten haben Forscher das Modell der oronasalen Fistel (ONF) bei verschiedenen Tierarten entwickelt, darunter Ratten^18,19, Ferkel 20,21, Minischweine²² und Hunde ²³, da diese Arten einen beträchtlichen harten Gaumen besitzen^, der für chirurgische Eingriffe geeignet ist. Mäuse haben jedoch eine genetische Sequenz und ein vollständiges Genom, die dem des Menschen ähneln, was sie zu einem wichtigen Modell für die Erforschung und Entwicklung neuer Medikamente macht^24,25,26. Darüber hinaus bieten Mäuse nur geringe Variationen von Charge zu Charge, was sie zu einer günstigen Wahl für die Etablierung des ONF-Modells^12,13,27 macht.

Die detaillierten Schritte zur Erstellung von ONF wurden jedoch nicht beschrieben, und die Stabilität der ONF-Größe wurde nicht berücksichtigt. Darüber hinaus stützte sich der Nachweis der ONF-Bildung ausschließlich auf die Beobachtung²⁸, ohne eine direkte Kommunikation zwischen der Mund- und der Nasenhöhle zu gewährleisten. Es wurde nicht mit anderen Mitteln nachgewiesen, wie z. B. dem Verlust des Körpergewichts der Maus aufgrund von Schwierigkeiten beim Fressen, die durch die ONF verursacht wurden. Darüber hinaus wurde die normale Variation der Wundgröße nicht berücksichtigt, was für Studien zu Medikamenten oder Materialien, die die Wundheilung fördern oder hemmen, von entscheidender Bedeutung ist. Daher besteht ein dringender Bedarf an der Etablierung eines stabilen und validierten ONF-Modells.

Das Ziel dieser Studie war es, ein praktisches ONF-Modell zu entwickeln, das die oben genannten Probleme adressiert, in der Hoffnung, dass dieses Protokoll als Grundlage für zukünftige Forschungen zu den Mechanismen der palatinalen Wundheilung und neuartigen Behandlungen für ONF dienen wird.

Protocol

Alle tierexperimentellen Verfahren in dieser Studie wurden vom Ethikkomitee der West China School of Stomatology der Universität Sichuan geprüft und genehmigt. Für die vorliegende Studie wurden adulte C57BL/6 Mäuse (weiblich) verwendet. 1. Chirurgische Vorbereitung Stellen Sie die für den Eingriff erforderlichen chirurgischen Instrumente zusammen: Keimer, ophthalmologische Kauter, mikrochirurgische Scheren, mikrochirurgische Pinzetten, Spritzen und Nadeln (26 g …

Representative Results

Um die Durchführbarkeit und Stabilität dieser experimentellen Methode zu beurteilen, wurde das gleiche Verfahren an zehn Mäusen durchgeführt und Beobachtungen hinsichtlich Mortalität, Veränderungen der Wundgröße, des Körpergewichts und der histologischen Analyse gemacht. Die Mäuse wurden am 7. Tag eingeschläfert. Das Verfahren wies eine niedrige Mortalitätsrate auf. Der ophthalmologische Kauter und der Keimer, die in Abbildung 1A-C<str…

Discussion

Forscher haben verschiedene Materialien, Medikamente und neuartige Techniken zur Behandlung von ONF 10,11,12,13,14,15,16,17 erforscht. Mit Fortschritten bei den chirurgischen Verfahren konnten die Inzidenz und das Wiederauftreten von ONF reduziert werden. A…

Materials

Germinator	Electron Microscopy Sciences	66118-20	Heating and disinfection equipment
Latex gloves	Allmed		or similar
Lights	Olympus	A1813
Meloxicam	MedChemExpress	HY-B0261	crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers)	Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.	M-Y-0087	Surgical instrument
Ophthalmologic cautery	Suqian Wenchong Medical Equipment Co.	1.00234E+13	Surgical instrument
Sterile cotton,	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Sterile metal foil	Biosharp		or similar
Sterile sheets	3M	XH003801129	or similar
Surgical drapes	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Syringes	Yancheng Begu Technology Co.	S-015301	or similar
Tape	Bkmamlab		or similar
Temperature maintenance device	Harvard Apparatus	LE-13-2104
Zoletil50	Virbac		80 mg/kg