Etablering af en oronasale fistelmusmodel

Summary

Denne artikel skitserer en trinvis procedure til etablering af en musemodel med en oronasale fistel. Den oronasale fistel blev skabt ved at anvende opvarmet oftalmologisk cautery for at beskadige midterlinjedelen af den hårde gane, hvilket resulterede i dannelsen af en åbning mellem mund- og næsehulen.

Abstract

Denne undersøgelse præsenterer en metode, der anvender opvarmet oftalmologisk cautery til at udvikle en levedygtig model til undersøgelse af oranasale fistler. C57BL/6-mus blev brugt til at etablere oronasal fistel (ONF) -modellen. For at skabe ONF blev musene bedøvet, immobiliseret, og deres hårde ganer blev udsat. Under den kirurgiske procedure blev en 2,0 x 1,5 mm slimhindeskade i fuld tykkelse induceret i midterlinjen af den hårde gane ved hjælp af oftalmologisk cautery. Det var afgørende at kontrollere størrelsen af ONF og minimere blødning for at sikre eksperimentets succes. Verifikation af ONF-modellens effektivitet blev udført på den 7. dag efter operationen, der omfattede både anatomiske og funktionelle vurderinger. Tilstedeværelsen af næseseptumet i mundhulen og udstrømningen af sterilt vand fra næseborene ved injektion i mundhulen bekræftede den vellykkede etablering af ONF-modellen. Modellen demonstrerede en praktisk og vellykket oronasal fistel, kendetegnet ved en lav dødelighed, betydelige vægtændringer og minimal variation i ONF-størrelse. Fremtidige undersøgelser kan overveje at vedtage denne metode til at belyse mekanismerne for gane sårheling og udforske nye behandlinger for oronasale fistler.

Introduction

Oronasale fistel (ONF), en unormal åbning mellem mund- og næsehulen, manifesterer sig klinisk som en defekt i et strukturelt område fra den alveolære proces til uvulaen, som almindeligvis forekommer som en komplikation efter ganespaltereparation¹. Patienter med ONF oplever mad refluks, artikulationsforstyrrelser og nedsat velopharyngeal funktion, hvilket påvirker deres livskvalitet^betydeligt 2,3,4. Hastigheden af postoperativ ONF varierer fra 2,4% til 55% på grund af faktorer som kløftbredde, Veau-type og kirurgisk metode 5,6,7,8. Derudover er gentagelsesraten efter ONF-reparation høj, lige fra 0% til 43%⁹.

Flere nye behandlinger har for nylig vist løfte inden for ONF, herunder forskellige materialer, lægemidler og nye teknikker 10,11,12,13,14,15,16,17. Nøjagtig evaluering af terapeutiske virkninger er afgørende, da det danner grundlag for udvælgelse og videreudvikling af ONF-behandlinger. Det er imidlertid udfordrende at opnå en gyldig vurdering på kort sigt for andre terapeutiske virkninger end kirurgi, da egenskaberne ved ONF’er varierer mellem forskellige patienter. Derfor er det nødvendigt at etablere en ONF-sygdomsmodel for at verificere effektiviteten af disse behandlingsmetoder.

I flere årtier har forskere genereret oronasal fistel (ONF) -modellen i forskellige dyrearter, herunder rotter^18,19, smågrise 20,21, minigrise²² og hunde ²³, da disse arter har en betydelig hård gane^, der er egnet til kirurgisk manipulation. Imidlertid har mus en genetisk sekvens og hele genomet, der ligner menneskers, hvilket gør dem til en vigtig model til forskning og udvikling af nye lægemidler^24,25,26. Desuden tilbyder mus lidt variation fra batch til batch, hvilket gør dem til et gunstigt valg til etablering af ONF-modellen^12,13,27.

De detaljerede trin til oprettelse af ONF blev imidlertid ikke beskrevet, og stabiliteten af ONF-størrelsen blev ikke taget i betragtning. Derudover var verifikationen af ONF-dannelse udelukkende baseret på observation²⁸ uden at sikre direkte kommunikation mellem mund- og næsehulen. Det blev ikke påvist på andre måder, såsom musens tab af kropsvægt på grund af vanskeligheder med at spise forårsaget af ONF. Desuden blev normal variation i sårstørrelse ikke overvejet, hvilket er afgørende for undersøgelser af lægemidler eller materialer, der fremmer eller hæmmer sårheling. Der er derfor et stort behov for at etablere en stabil og valideret ONF-model.

Formålet med denne undersøgelse var at udvikle en praktisk ONF-model, der adresserer de ovennævnte spørgsmål med håb om, at denne protokol vil tjene som grundlag for fremtidig forskning i mekanismerne for palatal sårheling og nye behandlinger for ONF.

Protocol

Alle dyreforsøg i denne undersøgelse blev gennemgået og godkendt af den etiske komité for West China School of Stomatology, Sichuan University. Voksne C57BL/6-mus (hunmus) blev anvendt til nærværende undersøgelse. 1. Kirurgisk forberedelse Saml de nødvendige kirurgiske instrumenter til proceduren: germinator, oftalmologisk cautery, mikrokirurgisk saks, mikrokirurgisk pincet, sprøjter og nåle (26 g x 0,63 tommer) (figur 1A<stron…

Representative Results

For at vurdere gennemførligheden og stabiliteten af denne eksperimentelle metode blev den samme procedure udført på ti mus, og der blev foretaget observationer vedrørende dødelighed, ændringer i sårstørrelse, kropsvægt og histologisk analyse. Musene blev aflivet på dag 7. Proceduren udviste en lav dødelighed. Den oftalmologiske kauteri og germinator, afbildet i figur 1A-C, var de vigtigste instrumenter, der blev brugt i…

Discussion

Forskere har udforsket forskellige materialer, lægemidler og nye teknikker til behandling af ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Med fremskridt inden for kirurgiske procedurer er forekomsten og gentagelsen af ONF blevet reduceret. På grund af sygdommens unikke e…

Materials

Germinator	Electron Microscopy Sciences	66118-20	Heating and disinfection equipment
Latex gloves	Allmed		or similar
Lights	Olympus	A1813
Meloxicam	MedChemExpress	HY-B0261	crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers)	Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.	M-Y-0087	Surgical instrument
Ophthalmologic cautery	Suqian Wenchong Medical Equipment Co.	1.00234E+13	Surgical instrument
Sterile cotton,	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Sterile metal foil	Biosharp		or similar
Sterile sheets	3M	XH003801129	or similar
Surgical drapes	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Syringes	Yancheng Begu Technology Co.	S-015301	or similar
Tape	Bkmamlab		or similar
Temperature maintenance device	Harvard Apparatus	LE-13-2104
Zoletil50	Virbac		80 mg/kg