Summary

Opstelling van een oronasale fistelmuizen

Published: September 08, 2023
doi:

Summary

Dit artikel schetst een stapsgewijze procedure voor het opstellen van een muizenmodel met een oronasale fistel. De oronasale fistel werd gecreëerd door gebruik te maken van verwarmde oftalmologische cauterisatie om het middellijngedeelte van het harde gehemelte te beschadigen, wat resulteerde in de vorming van een opening tussen de mond- en neusholte.

Abstract

Deze studie presenteert een methode die gebruik maakt van verwarmde oftalmologische cauterisatie om een levensvatbaar model te ontwikkelen voor het onderzoeken van oronasale fistels. C57BL/6-muizen werden gebruikt om het oronasale fistelmodel (ONF) vast te stellen. Om de ONF te creëren, werden de muizen verdoofd, geïmmobiliseerd en werden hun harde gehemelte blootgesteld. Tijdens de chirurgische ingreep werd een slijmvliesbeschadiging van 2,0 x 1,5 mm over de volledige dikte geïnduceerd in de middellijn van het harde gehemelte met behulp van oftalmologische cauterisatie. Het was van cruciaal belang om de grootte van het ONF onder controle te houden en bloedingen tot een minimum te beperken om het succes van het experiment te garanderen. Verificatie van de effectiviteit van het ONF-model werd uitgevoerd op de 7e dag na de operatie, met zowel anatomische als functionele beoordelingen. De aanwezigheid van het neustussenschot in de mondholte en de uitstroom van steriel water uit de neusgaten bij injectie in de mondholte bevestigden de succesvolle oprichting van het ONF-model. Het model toonde een praktische en succesvolle oronasale fistel, gekenmerkt door een laag sterftecijfer, significante gewichtsveranderingen en minimale variatie in ONF-grootte. Toekomstige studies kunnen overwegen om deze methodologie toe te passen om de mechanismen van gehemeltewondgenezing op te helderen en nieuwe behandelingen voor oronasale fistels te onderzoeken.

Introduction

Oronasale fistel (ONF), een abnormale opening tussen de mond- en neusholte, manifesteert zich klinisch als een defect in een structureel gebied van de processus alveolair naar de huig, dat vaak optreedt als een complicatie na herstel van het gespleten gehemelte. Patiënten met ONF ervaren voedselreflux, articulatiestoornissen en een verminderde velofaryngeale functie, wat een aanzienlijke invloed heeft op hun kwaliteit van leven 2,3,4. Het percentage postoperatieve ONF varieert van 2.4% tot 55% als gevolg van factoren zoals gespleten breedte, Veau-type en chirurgische methode 5,6,7,8. Bovendien is het recidiefpercentage na ONF-reparatie hoog, variërend van 0% tot 43%9.

Verschillende nieuwe behandelingen zijn onlangs veelbelovend gebleken op het gebied van ONF, waaronder verschillende materialen, medicijnen en nieuwe technieken 10,11,12,13,14,15,16,17. Nauwkeurige evaluatie van therapeutische effecten is essentieel omdat het de basis vormt voor het selecteren en verder ontwikkelen van ONF-behandelingen. Het is echter een uitdaging om op korte termijn een geldige beoordeling te krijgen voor andere therapeutische effecten dan chirurgie, aangezien de kenmerken van ONF’s variëren tussen verschillende patiënten. Daarom is het opstellen van een ONF-ziektemodel noodzakelijk om de effectiviteit van deze behandelmethoden te verifiëren.

Al tientallen jaren hebben onderzoekers het oronasale fistelmodel (ONF) gegenereerd bij verschillende diersoorten, waaronder ratten18,19, biggen 20,21, minivarkens22 en honden 23, omdat deze soorten een aanzienlijk hard gehemelte hebben dat geschikt is voor chirurgische manipulatie. Muizen hebben echter een genetische sequentie en een volledig genoom dat vergelijkbaar is met dat van mensen, waardoor ze een belangrijk model zijn voor het onderzoeken en ontwikkelen van nieuwe medicijnen24,25,26. Bovendien bieden muizen weinig variatie van batch tot batch, waardoor ze een gunstige keuze zijn voor het vaststellen van het ONF-model12,13,27.

De gedetailleerde stappen voor het creëren van ONF werden echter niet beschreven en er werd geen rekening gehouden met de stabiliteit van de ONF-omvang. Bovendien was de verificatie van de vorming van ONF uitsluitend gebaseerd op observatie28, zonder directe communicatie tussen de mond- en neusholten te waarborgen. Het werd niet aangetoond met andere middelen, zoals het verlies van lichaamsgewicht van de muis als gevolg van eetproblemen veroorzaakt door het ONF. Bovendien werd geen rekening gehouden met normale variatie in wondgrootte, wat cruciaal is voor onderzoeken naar geneesmiddelen of materialen die wondgenezing bevorderen of remmen. Daarom is er een sterke behoefte aan een stabiel en gevalideerd ONF-model.

Het doel van deze studie was om een praktisch ONF-model te ontwikkelen dat de bovengenoemde problemen aanpakt, in de hoop dat dit protocol als basis zal dienen voor toekomstig onderzoek naar de mechanismen van palatinale wondgenezing en nieuwe behandelingen voor ONF.

Protocol

Alle dierproeven in deze studie werden beoordeeld en goedgekeurd door de ethische commissie van de West China School of Stomatology, Sichuan University. Volwassen C57BL/6 muizen (vrouwtjes) werden gebruikt voor de huidige studie. 1. Chirurgische voorbereiding Verzamel de benodigde chirurgische instrumenten voor de procedure: kiemer, oftalmologische cauterisatie, microchirurgische schaar, microchirurgisch pincet, spuiten en naalden (26 g x 0.63 inch) (<strong class="x…

Representative Results

Om de haalbaarheid en stabiliteit van deze experimentele methode te beoordelen, werd dezelfde procedure uitgevoerd op tien muizen en werden observaties gedaan met betrekking tot mortaliteit, veranderingen in wondgrootte, lichaamsgewicht en histologische analyse. De muizen werden op dag 7 geëuthanaseerd. De procedure vertoonde een laag sterftecijfer. De oftalmologische cauterisatie en kiemer, afgebeeld in figuur 1A-C, waren de bel…

Discussion

Onderzoekers hebben verschillende materialen, medicijnen en nieuwe technieken onderzocht voor de behandeling van ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Met de vooruitgang in chirurgische ingrepen zijn de incidentie en herhaling van ONF verminderd. Vanwege de unieke k…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit werk werd ondersteund door het onderzoeks- en ontwikkelingsprogramma, het West China Hospital of Stomatology, Sichuan University (RD-02-202107), het Sichuan Province Science and Technology Support Program (2022NSFSC0743) en de Sichuan Postdoctoral Science Foundation (TB2022005) subsidie aan H. Huang.

Materials

Germinator Electron Microscopy Sciences  66118-20 Heating and disinfection equipment
Latex gloves Allmed or similar
Lights Olympus A1813
Meloxicam MedChemExpress HY-B0261 crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers) Jiangsu Tonghui Medical Devices Co. M-Y-0087 Surgical instrument
Ophthalmologic cautery Suqian Wenchong Medical Equipment Co. 1.00234E+13 Surgical instrument
Sterile cotton, Yancheng Begu Technology Co. or similar
Sterile metal foil Biosharp or similar
Sterile sheets 3M XH003801129 or similar
Surgical drapes Yancheng Begu Technology Co. or similar
Syringes Yancheng Begu Technology Co. S-015301 or similar
Tape Bkmamlab or similar
Temperature maintenance device Harvard Apparatus  LE-13-2104
Zoletil50 Virbac 80 mg/kg

References

  1. Alonso, V., et al. Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children. International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679 (2019).
  2. Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula. National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).
  3. Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula. Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).
  4. Huang, H., et al. Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument. Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).
  5. Sakran, K. A., et al. Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions. Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).
  6. Sakran, K. A., et al. Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions. Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403 (2023).
  7. Sakran, K. A., et al. The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors. Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).
  8. Sakran, K. A., et al. Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions. The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).
  9. Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques. Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251 (2022).
  10. Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial. BMC Oral Health. 21 (1), 208 (2021).
  11. Miron, R. J., et al. Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review. Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).
  12. Ballestas, S. A., et al. Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies. Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).
  13. Ferreira, C. L., et al. Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice. Archives of Oral Biology. 122, 105028 (2021).
  14. Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. Biology and Biomarkers for Wound Healing. Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).
  15. Xu, Y., et al. Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient. Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).
  16. Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).
  17. In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).
  18. Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats. Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).
  19. Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -. C. Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model. BMC Oral Health. 15 (1), 60 (2015).
  20. Kirschner, R. E., et al. Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices. Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).
  21. Rohleder, N. H., et al. Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft. Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).
  22. Kesting, M. R., et al. Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs. British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).
  23. Ayvazyan, A., et al. Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs. Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).
  24. Takao, K., Miyakawa, T. Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).
  25. Rongvaux, A., et al. Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model. Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).
  26. Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease. Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).
  27. Keswani, S. G., et al. Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing. Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).
  28. Amanso, A. M., et al. Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model. Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).
  29. Antiorio, A. T. F. B., et al. Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 – 2020). Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).

Play Video

Cite This Article
Chen, J., Yin, J., Zhang, S., Zhuang, S., Yang, R., Xu, Y., Zheng, Q., Shi, B., Huang, H. Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model. J. Vis. Exp. (199), e65578, doi:10.3791/65578 (2023).

View Video