Etablering av en modell för oronasala fistelmöss

Summary

Den här artikeln beskriver en steg-för-steg-procedur för att etablera en musmodell med en oronasal fistel. Den oronasala fisteln skapades genom att använda uppvärmd oftalmologisk kauteri för att skada mittlinjedelen av den hårda gommen, vilket resulterade i bildandet av en öppning mellan mun- och näshålan.

Abstract

Denna studie presenterar en metod som använder uppvärmd oftalmologisk kauteri för att utveckla en genomförbar modell för att undersöka oronasala fistlar. C57BL/6-möss användes för att etablera den oronasala fistelmodellen (ONF). För att skapa ONF sövdes mössen, immobiliserades och deras hårda gommar exponerades. Under det kirurgiska ingreppet inducerades en 2,0 x 1,5 mm fullhudsslemhinneskada i den hårda gommens mittlinje med hjälp av oftalmologisk kauteri. Det var avgörande att kontrollera storleken på ONF och minimera blödningen för att säkerställa att experimentet lyckades. Verifiering av OLF-modellens effektivitet genomfördes på den 7:e dagen efter operationen, vilket omfattade både anatomiska och funktionella bedömningar. Närvaron av nässkiljeväggen i munhålan och utflödet av sterilt vatten från näsborrarna vid injektion i munhålan bekräftade den framgångsrika etableringen av OLF-modellen. Modellen visade en praktisk och framgångsrik oronasal fistel, kännetecknad av låg dödlighet, signifikanta viktförändringar och minimal variation i ORF-storlek. Framtida studier kan överväga att använda denna metodik för att belysa mekanismerna för sårläkning i gommen och utforska nya behandlingar för oronasala fistlar.

Introduction

Oronasal fistel (ONF), en onormal öppning mellan mun- och näshålan, manifesterar sig kliniskt som en defekt i ett strukturellt område från alveolarprocessen till uvula, vilket vanligtvis uppstår som en komplikation efter reparation av gomspalt¹. Patienter med ONF upplever matreflux, artikulationsstörningar och nedsatt velofaryngeal funktion, vilket avsevärt påverkar deras livskvalitet ^2,3,4. Frekvensen av postoperativ ONF varierar från 2,4 % till 55 % på grund av faktorer som spaltbredd, Veau-typ och kirurgisk metod 5,6,7,8. Dessutom är återfallsfrekvensen efter ONF-reparation hög, från 0 % till 43 %⁹.

Flera nya behandlingar har nyligen visat sig lovande inom ONF-området, inklusive olika material, läkemedel och nya tekniker 10,11,12,13,14,15,16,17. Noggrann utvärdering av terapeutiska effekter är avgörande eftersom det utgör grunden för att välja och vidareutveckla ORF-behandlingar. Det är dock svårt att få en giltig bedömning på kort sikt för andra terapeutiska effekter än kirurgi, eftersom egenskaperna hos ONF varierar mellan olika patienter. Därför är det nödvändigt att etablera en ORF-sjukdomsmodell för att verifiera effektiviteten av dessa behandlingsmetoder.

Under flera decennier har forskare genererat den oronasala fistelmodellen (ONF) hos olika djurarter, inklusive råttor^18,19, smågrisar^20,21, minigrisar²² och hundar ^23, eftersom dessa arter har en betydande hård gom som lämpar sig för kirurgisk manipulation. Möss har dock en genetisk sekvens och ett helt genom som liknar människans, vilket gör dem till en viktig modell för forskning och utveckling av^{nya läkemedel.} Dessutom erbjuder möss liten variation från batch till batch, vilket gör dem till ett gynnsamt val för att etablera ONF-modellen^12,13,27.

De detaljerade stegen för att skapa ONF beskrevs dock inte, och stabiliteten för ORF-storleken beaktades inte. Dessutom förlitade sig kontrollen av ONF-bildningen enbart på observation²⁸, utan att säkerställa direkt kommunikation mellan munhålan och näshålan. Det påvisades inte på andra sätt, såsom musens viktminskning på grund av svårigheter att äta orsakad av ONF. Vidare beaktades inte normal variation i sårstorlek, vilket är avgörande för studier av läkemedel eller material som främjar eller hämmar sårläkning. Därför finns det ett stort behov av att etablera en stabil och validerad ONF-modell.

Syftet med denna studie var att utveckla en praktisk ORF-modell som tar itu med de ovan nämnda problemen, med förhoppningen att detta protokoll kommer att fungera som grund för framtida forskning om mekanismerna för gomsårläkning och nya behandlingar för ONF.

Protocol

Alla djurprocedurer i denna studie granskades och godkändes av den etiska kommittén vid West China School of Stomatology, Sichuan University. Vuxna C57BL/6-möss (honor) användes för den aktuella studien. 1. Kirurgisk förberedelse Samla de nödvändiga kirurgiska instrumenten för ingreppet: groningsman, oftalmologisk kauteri, mikrokirurgisk sax, mikrokirurgisk pincett, sprutor och nålar (26 g x 0.63 tum) (Figur 1A,B</stron…

Representative Results

För att bedöma genomförbarheten och stabiliteten av denna experimentella metod utfördes samma procedur på tio möss, och observationer gjordes avseende mortalitet, förändringar i sårstorlek, kroppsvikt och histologisk analys. Mössen avlivades dag 7. Ingreppet uppvisade en låg dödlighet. Den oftalmologiska kauteriet och groningsmaskinen, som avbildas i figur 1A-C, var de viktigaste instrumenten som användes i detta expe…

Discussion

Forskare har utforskat olika material, läkemedel och nya tekniker för behandling av ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Med framsteg inom kirurgiska ingrepp har incidensen och återfallet av ONF minskat. På grund av sjukdomens unika egenskaper är dock antalet …

Materials

Germinator	Electron Microscopy Sciences	66118-20	Heating and disinfection equipment
Latex gloves	Allmed		or similar
Lights	Olympus	A1813
Meloxicam	MedChemExpress	HY-B0261	crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers)	Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.	M-Y-0087	Surgical instrument
Ophthalmologic cautery	Suqian Wenchong Medical Equipment Co.	1.00234E+13	Surgical instrument
Sterile cotton,	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Sterile metal foil	Biosharp		or similar
Sterile sheets	3M	XH003801129	or similar
Surgical drapes	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Syringes	Yancheng Begu Technology Co.	S-015301	or similar
Tape	Bkmamlab		or similar
Temperature maintenance device	Harvard Apparatus	LE-13-2104
Zoletil50	Virbac		80 mg/kg