Establecimiento de un modelo de ratones con fístula oronasal

Summary

Este artículo describe un procedimiento paso a paso para establecer un modelo de ratones con una fístula oronasal. La fístula oronasal se creó mediante el empleo de cauterización oftalmológica calentada para dañar la porción de la línea media del paladar duro, lo que resultó en la formación de una abertura entre las cavidades oral y nasal.

Abstract

Este estudio presenta un método que utiliza cauterización oftalmológica calentada para desarrollar un modelo viable para investigar las fístulas oronasales. Se utilizaron ratones C57BL/6 para establecer el modelo de fístula oronasal (ONF). Para crear el ONF, los ratones fueron anestesiados, inmovilizados y sus paladares duros fueron expuestos. Durante el procedimiento quirúrgico, se indujo una lesión de la mucosa de espesor total de 2,0 x 1,5 mm en la línea media del paladar duro mediante cauterización oftalmológica. Era crucial controlar el tamaño de la ONF y minimizar el sangrado para garantizar el éxito del experimento. La verificación de la efectividad del modelo ONF se llevó a cabo en el 7º día postoperatorio, abarcando tanto evaluaciones anatómicas como funcionales. La presencia del tabique nasal dentro de la cavidad oral y la salida de agua estéril de las fosas nasales tras la inyección en la cavidad oral confirmaron el establecimiento exitoso del modelo de ONF. El modelo demostró una fístula oronasal práctica y exitosa, caracterizada por una baja tasa de mortalidad, cambios significativos de peso y una variación mínima en el tamaño de la FNO. Los estudios futuros pueden considerar la adopción de esta metodología para dilucidar los mecanismos de cicatrización de las heridas del paladar y explorar nuevos tratamientos para las fístulas oronasales.

Introduction

La fístula oronasal (FNO), una abertura anormal entre las cavidades oral y nasal, se manifiesta clínicamente como un defecto en un área estructural desde la apófisis alveolar hasta la úvula, que comúnmente ocurre como una complicación después de la reparación del paladar hendido¹. Los pacientes con FNO experimentan reflujo alimentario, trastornos articulares y deterioro de la función velofaríngea, lo que afecta significativamente su calidad de vida ^2,3,4. La tasa de FNO postoperatoria oscila entre el 2,4% y el 55% debido a factores como el ancho de la hendidura, el tipo de Veau y el método quirúrgico 5,6,7,8. Además, la tasa de recurrencia después de la reparación de ONF es alta, oscilando entre el 0% y el 43%⁹.

Varios tratamientos novedosos se han mostrado recientemente prometedores en el campo de la ONF, incluyendo diferentes materiales, fármacos y técnicas novedosas 10,11,12,13,14,15,16,17. La evaluación precisa de los efectos terapéuticos es esencial, ya que proporciona la base para seleccionar y desarrollar tratamientos con FENO. Sin embargo, obtener una evaluación válida a corto plazo para efectos terapéuticos distintos de la cirugía es un desafío, ya que las características de las FNO varían entre los diferentes pacientes. Por lo tanto, es necesario establecer un modelo de enfermedad de ONF para verificar la efectividad de estos métodos de tratamiento.

Durante varias décadas, los investigadores han generado el modelo de fístula oronasal (ONF) en varias especies animales, incluidas ratas^18,19, lechones 20,21, minicerdos²² y perros ^23, ya que estas especies poseen un paladar duro sustancial adecuado para la manipulación quirúrgica. Sin embargo, los ratones tienen una secuencia genética y un genoma completo similar al de los humanos, lo que los convierte en un modelo importante para la investigación y el desarrollo de nuevos fármacos^24,25,26. Además, los ratones ofrecen poca variación de un lote a otro, lo que los convierte en una opción favorable para establecer el modelo ONF^12,13,27.

Sin embargo, no se describieron los pasos detallados para crear ONF y no se tuvo en cuenta la estabilidad del tamaño de ONF. Además, la verificación de la formación de ONF se basó únicamente en la observación²⁸, sin garantizar la comunicación directa entre las cavidades oral y nasal. No se demostró a través de otros medios, como la pérdida de peso corporal del ratón debido a las dificultades para comer causadas por la ONF. Además, no se tuvo en cuenta la variación normal en el tamaño de la herida, lo cual es crucial para los estudios sobre fármacos o materiales que promueven o inhiben la cicatrización de heridas. Por lo tanto, existe una gran necesidad de establecer un modelo ONF estable y validado.

El objetivo de este estudio fue desarrollar un modelo práctico de ONF que aborde los problemas antes mencionados, con la esperanza de que este protocolo sirva como base para futuras investigaciones sobre los mecanismos de cicatrización de heridas palatinas y nuevos tratamientos para ONF.

Protocol

Todos los procedimientos con animales en este estudio fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética de la Escuela de Estomatología de China Occidental de la Universidad de Sichuan. Para el presente estudio se utilizaron ratones adultos C57BL/6 (hembras). 1. Preparación quirúrgica Reúna los instrumentos quirúrgicos necesarios para el procedimiento: germinador, cauterización oftalmológica, tijeras microquirúrgicas, pinzas microquirúrgicas, jeringas y a…

Representative Results

Para evaluar la viabilidad y estabilidad de este método experimental, se realizó el mismo procedimiento en diez ratones, y se realizaron observaciones sobre la mortalidad, los cambios en el tamaño de la herida, el peso corporal y el análisis histológico. Los ratones fueron sacrificados el día 7. El procedimiento presentó una baja tasa de mortalidad. La cauterización oftalmológica y el germinador, representados en la Figura 1A-C</s…

Discussion

Los investigadores han explorado diversos materiales, fármacos y técnicas novedosas para tratar la FNO 10,11,12,13,14,15,16,17. Con los avances en los procedimientos quirúrgicos, se ha reducido la incidencia y la recurrencia de la FNO. Sin embargo, debid…

Materials

Germinator	Electron Microscopy Sciences	66118-20	Heating and disinfection equipment
Latex gloves	Allmed		or similar
Lights	Olympus	A1813
Meloxicam	MedChemExpress	HY-B0261	crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers)	Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.	M-Y-0087	Surgical instrument
Ophthalmologic cautery	Suqian Wenchong Medical Equipment Co.	1.00234E+13	Surgical instrument
Sterile cotton,	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Sterile metal foil	Biosharp		or similar
Sterile sheets	3M	XH003801129	or similar
Surgical drapes	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Syringes	Yancheng Begu Technology Co.	S-015301	or similar
Tape	Bkmamlab		or similar
Temperature maintenance device	Harvard Apparatus	LE-13-2104
Zoletil50	Virbac		80 mg/kg