Summary

Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem

Published: February 25, 2008
doi:

Summary

Kortikal kan akımı dinamikleri 2-foton mikroskobu ile kemirgen kuyruk damar içine enjekte görüntüleme floresan dekstran boyalar in vivo olarak incelenebilir. Bu video görüntü kan akışını dinamikleri ile farelerin bir cam kaplı kafatası pencere hazırlama neokorteks nasıl gösterir.

Abstract

Yaşayan kemirgenler bozulmamış beyin beyin damarsal (kılcal büyük damarları) ve kan akışını dinamikleri kaydetmek için resim yeteneği güçlü bir tekniktir. Kafatası bir pencereden in vivo olarak 2 foton mikroskopi kullanılarak damar içine enjekte görüntü floresan boyalar mümkün. Bu kan akışı ölçümleri elde etmek için de görüntü kortikal damarsal bir izin ve. Bu teknik aslında David Kleinfeld ve Winfried Denk tarafından geliştirilmiştir. Bu yöntem, nörodejeneratif hastalıklar, beyin tümörleri, ya da normal beyin fizyolojisi, serebral iskemi sırasında veya sonrasında kan akış dinamiklerini incelemek için kullanılabilir. Örneğin, kırmızı kan hücre hız veya akı infarkt ve çevresinde ne kadar inme nedenleri kan akış yönü vardiya ve değişiklikleri incelemek için kullanılır olmuştur. Burada kuyruk damar içine enjekte floresan boyalar kullanarak yaşayan farelerin neokorteks görüntü kan akışını dinamikleri 2-foton mikroskopi nasıl kullanılacağını göstermektedir.

Protocol

Kuyruk ven enjeksiyonları floresan dextrans boyalar Görüntü serebral vasküler amacıyla, hayvanların bir floresan boya ile intravenöz olarak enjekte edilmelidir. Dekstran benzer parçaları beyin kan bariyerini geçen ve kan damarlarının dışarı sızdıran boya engeller çünkü dekstran-konjuge boyaları kullanabilirsiniz. Fareler izofluran (% 4, indüksiyon için enjeksiyon sırasında% 1.5-2) ile anestezi. Kuyruk% 70 alkol ile dezenfekte edilir. 26 gauge iğne ile, 7…

Discussion

Kortikal kan akımı dinamikleri görüntüleme floresan dekstran boyalar iki foton mikroskobu ile kemirgen kuyruk damar içine enjekte in vivo olarak incelenebilir. Bu video görüntü kan akışını dinamikleri ile farelerin bir cam kaplı kafatası pencere hazırlama neokorteks nasıl bir yöntem gösterdi.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Fluorescein isothio-cyanate-dextran Reagent Sigma FD500S mol wt 500,000
Rhodamine B isothio-cyanate-dextran Reagent Simga R9379 mol wt ~70,000

References

  1. Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Nat Acad Sci. 95, 15741-15746 (1998).
  2. Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed. Eng. Online. 17, 2-13 (2003).
  3. Zhang, S., Murphy, T. H. Imaging the impact of cortical microcirculation on synaptic structure and sensory-evoked hemodynamic responses in vivo. 5, (2007).
  4. Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex. Proc Nat Acad Sci. 104, 365-370 (2007).

Play Video

Cite This Article
Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window. J. Vis. Exp. (12), e678, doi:10.3791/678 (2008).

View Video